第一方面，本发明专利技术提供了从细胞群体中去除非存活细胞的方法，所述方法包括在适于使化合物和细胞培养物中存在的非存活细胞连接的条件下，使细胞群体与化合物相接触，并从所述细胞群体中去除至少部分化合物，本发明专利技术进一步提供适合在这些方法中使用的组合物，还提供了这样的组合物以及多种其他系统和试剂盒的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从细胞群体，如细胞培养物中去除非存活细胞的方法，适合在这些方法中使用的组合物，还涉及这样的组合物以及多种其他系统和试剂盒的用途。
技术介绍
细胞会由于多种原因死亡，包括控制所有组织中细胞数量的正常生理过程。细胞死亡可以通过自然生理过程(最著名的是细胞凋亡)发生，也可以通过细胞培养中的，例如由培养容器中的剪应力引起的意外损伤(坏死)发生。在我们体内，死亡的细胞被吞噬细胞，如巨噬细胞有效的清除，否则它们可能引起组织损伤而且会促进疾病的进展。如果这些细胞保持未被清除的状态(如通常发生在细胞培养中的)，凋亡的细胞进一步坏死(有时被称为“继发性坏死”)。这种进展以细胞质膜完整性的失去为特征。现有的细胞存活率检验方法多种多样，或简单或复杂。例如，最简单的检验方法， 如活细胞拒染，检测被存活细胞排除的染料进入死细胞的能力。常用的这样的染料例子是台盼蓝、碘化丙啶和溴化乙锭。更复杂的检验方法包括大分子的释放，如乳酸脱氢酶(LDH)， 其活性可以通过其在适合的显色底物上的活性来检测。然而，这些检验方法局限于检测细胞死亡的坏死阶段，因为其均需要细胞质膜完整性的失去来获得阳性结果。给定时间细胞群体真实存活率的完整评价需要同时检测正在死亡(凋亡)和死亡(坏死)的细胞。给定时间细胞群体真实存活率的完整评价需要同时检测正在死亡(凋亡)和死亡(坏死)的细胞。正在死亡、凋亡细胞的检验通常是复杂的，需要多个步骤(例如TUNEL-type法检验或半胱天冬酶活化检验)，而这些步骤可能引起如假阳性的技术问题。一种常用的方法利用了凋亡的特征，细胞质膜磷脂不对称性的早期改变。磷脂结合蛋白，膜联蛋白V，在胞外Ca2+ 浓度相对高的情况下与在细胞质膜完整性失去之前快速暴露于凋亡细胞表面的磷脂、磷脂酰丝氨酸(PS)结合。抗体介导的PS检测，例如通过Immunosolv的imab6单克隆抗体，避免了对胞外Ca2+的需求。目前，可实现从细胞培养物中选择性去除正在死亡的/死亡的细胞的方法和试剂盒范围有限。其包括，例如，Miltenyi试剂盒和Immunosolv生产的imab6 连接Dead-Cert 纳米粒子。尽管可以使用这些试剂和试剂盒，仍然需要新的改进的技术，因为尽管像台盼蓝的染料能够用于准确检测或标记死亡细胞，但其不能够突出正在死亡的细胞。此外，膜联蛋白V是依赖Ca2+的，因而其不方便在生物生产里常用的悬浮培养中可能出现的低Ca2+的环境中进行检测。除上述之外，还需要控制非存活细胞，改进细胞培养物和细胞储存和运输的存活率的额外方法。也需要细胞系建立和生产的改进的方法。降低死细胞引起的本底存活率以及改进转染效率的方法也是对先前技术的显著改进。还需要控制处于凋亡晚期的细胞的方法，因为产生生长因子，如乳铁蛋白的早期的凋亡细胞可对其周围环境有积极的影响。专利技术简述4本专利技术基于发现在细胞死亡中某些细胞组分数量会增加(或其与某些外源化合物的可接触性增加)。此外，专利技术人发现这些细胞组分能够与某些化合物结合，特别是，例如，非蛋白化合物。因此，由于正在死亡的和/或死亡的细胞拥有比存活细胞更多的此类结合部位，本专利技术提供了适合用于从存活细胞中分离正在死亡的，和/或坏死/死亡的细胞的方法和组合物。第一方面，本专利技术提供了一种从细胞群体中去除非存活细胞的方法，所述的方法包括在适于使化合物和细胞培养物中存在的非存活细胞连接的条件下，使细胞群体与化合物接触的步骤，以及从所述细胞群体中去除至少部分化合物的步骤，其中的化合物不是蛋白性质的化合物。术语“蛋白性质的”化合物是指包括蛋白、多肽、氨基酸和/或抗体/抗体片段。因此，应当理解本专利技术第一方面提供的化合物不是蛋白、多肽、氨基酸或抗体/抗体片段。本领域技术人员能理解细胞群体可能包括存活的、正在死亡的、和/或坏死(死亡)的细胞，而且应理解正在死亡的，坏死或死亡的细胞以下统称为“非存活的细胞”。此外，术语“细胞群体”包括含有例如，真核细胞如哺乳动物，尤其是人细胞的细胞培养物。这方面，本专利技术可以提供了适用于这些细胞类型群体和/或在专门细胞类型，例如，干细胞(成人和/或胚胎干细胞)、心脏细胞、上皮细胞、内皮细胞、皮肤(真皮)细胞、 神经细胞、肌肉细胞、循环(即血液)系统细胞和/或其他细胞类型，例如，淋巴细胞、骨细胞和/或软骨细胞培养物的方法和组合物。例子示于表1。表1 :已经成功展示了使用本专利技术去除非存活细胞的细胞类型实例。权利要求1.一种从细胞群体中去除非存活细胞的方法，所述方法包括在适于使化合物和细胞培养物中存在的非存活细胞连接的条件下，使细胞群体与化合物相接触的步骤，以及从所述细胞群体中去除至少部分化合物的步骤，其中的化合物不是蛋白性质的化合物。2.权利要求1的方法，其中细胞群体是细胞培养物。3.前面任意权利要求的方法，其中化合物是能够与存在于非存活细胞上或非存活细胞中的细胞组分结合的化合物。4.前面任意权利要求的方法，其中化合物能与细胞死亡时数量和/或可接触性增加的细胞组分相结合。5.前面任意权利要求的方法，其中化合物是多糖。6.前面任意权利要求的方法，其中化合物是葡聚糖或其类似物、变体或衍生物。7.前面任意权利要求的方法，其中化合物是包括羧化和/或氨基葡聚糖的化合物。8.权利要求1-7的方法，其中化合物被包装进细胞群体可加入的柱或者在细胞群体可加入的柱中提供。9.权利要求1-7的方法，其中化合物与加入细胞群体的支架材料粘附、连接、固定和/ 或其他方式相联系。10.权利要求1-9的方法，其中化合物以颗粒的形式提供，例如微粒子或纳米粒子。11.权利要求10的方法，其中微粒子或纳米粒子采用直径10-500nm的小珠子或微球的形式。12.权利要求11的方法，其中微粒子或纳米粒子包括多糖或由多糖组成。13.权利要求12的方法，其中微粒子或纳米粒子包括葡聚糖或由葡聚糖组成。14.权利要求10-13的方法，其中微粒子或纳米粒子进一步包括磁性材料。15.权利要求14的方法，其中微粒子或纳米粒子包括葡聚糖包裹的磁性核心。16.前述任意权利要求的方法，其中化合物被标签或标记过。17.前述任意权利要求的方法，其中至少部分化合物通过过滤、密度分离、流式细胞仪 /细胞分选和/或亲和层析技术被从细胞群体中去除。18.权利要求14-16的方法，其中至少部分化合物通过使用磁场被从细胞群体中去除。19.前述任意权利要求的方法，方法包括第一步骤，其中细胞群体与阻断缓冲剂相接触，阻断缓冲剂含有能够连接存在于非存活细胞上或非存活细胞中的细胞组分的化合物， 化合物的浓度被制成能阻断全部(或基本上全部)存在于存活细胞和/或正在死亡的细胞上的所述细胞组分，但留下许多存在于非存活细胞和/或正在死亡的细胞上或非存活细胞和/或正在死亡的细胞中的所述细胞组分暴露或非封闭。20.非蛋白化合物用于从细胞群体中去除非存活细胞的用途。21.权利要求20的用途，其中细胞群体选自细胞系；储存或运输的细胞群体以及原代细胞制备品或培养物组成的组。22.权利要求20的用途，其中细胞群体被用于基于细胞的检验或被转染。23.权利要求20的用途，其中细胞群体用于产生或生产细胞产品。24.葡聚糖在标记或标签非存活细胞中的用途。25.权利要求24的用途，其中葡聚糖被进一步修饰以包含可检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种从细胞群体中去除非存活细胞的方法，所述方法包括在适于使化合物和细胞培养物中存在的非存活细胞连接的条件下，使细胞群体与化合物相接触的步骤，以及从所述细胞群体中去除至少部分化合物的步骤，其中的化合物不是蛋白性质的化合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·格雷戈里，
申请(专利权)人：易优诺生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：GB
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。