一种检测细胞培养基液pH的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测细胞培养基液pH的方法，属于细胞检测领域。一种检测细胞培养基液pH的方法，包括以下步骤：步骤一：采集样本数据；采集细胞培养基液样本的R、G值或R、G、B值和pH值；步骤二：建立R、G值或R、G、B值和pH值的线性关系；步骤三：根据线性关系，通过测量细胞培养基液的R、G值或R、G、B值得知其pH值。本发明专利技术的方法简单、操作方便、无需取出培养基液即可实现封闭环境下实时检测细胞培养管路中培养基液的pH值，在细胞培养过程中不需要直接与细胞培养基液直接接触，减小感染几率，防止发生污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞检测领域，具体地说，涉及一种检测细胞培养基液pH的方法。
技术介绍
在微生物培养过程中，特别是细胞培养，需要检测培养基液的pH值，以得知培养基液的状况，进而控制培养基液的添加或减少，从而控制细胞的生长速度。目前，通常的做法是取出培养基液，通过pH试纸检测或者pH检测仪等工具进行测量后，根据测量结果再对培养基液进行调控。该方法操作复杂，并且需要时常人工将培养基液取出，容易造成培养基液污染，且检测结果存在滞后，无法实现实时检测培养基液的pH值以便及时调控。所以，急需一种能够实时检测细胞培养基液pH的方法，得知细胞当前生长状态。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种方法简单、能够实时检测细胞培养基液pH的方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种检测细胞培养基液pH的方法，包括以下步骤：步骤一：采集样本数据；采集细胞培养基液样本的R、G值或R、G、B值和pH值；步骤二：建立R、G值或R、G、B值和pH值的线性关系；步骤三：根据线性关系，通过测量细胞培养基液的R、G值或R、G、B值得知其pH值；进一步的技术方案，所述的细胞培养基液中含有酚红指示剂。进一步的技术方案，所述的步骤二中的线性关系的公式为pH＝a1(R/G)+b1。进一步的技术方案，所述的步骤二中的线性关系的公式为pH＝a2[(R/G)+(B/R)]+b2。进一步的技术方案，所述的步骤一中是直接测试样本溶液得到R、G、B值。进一步的技术方案，所述的R值对应的红色波长范围：615-650nm；所述的G值对应的绿色波长范围:495-530nm；所述的B值对应的蓝色波长范围：450-480nm。专利技术人经过大量实验得出结论，细胞培养基液的pH值和R/G、(R/G)+(B/R)成线性关系，基于此，专利技术了一种实时监测pH值的方法，大部分细胞培养的培养基液中的pH范围是6.8-8.0，完全能够使用该方法。有益效果与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：1、本专利技术的方法简单、操作方便、无需取出培养基液即可实现封闭环境下实时检测细胞培养管路中培养基液的pH值，在细胞培养过程中不需要直接与细胞培养基液直接接触，减小感染几率，防止发生污染。2、本专利技术的适用范围广，通过建立R、G、B值和pH值的线性关系，适用于大多数的细胞培养，和其他需测pH值的细菌等微生物培养。3、本专利技术通过自动获取pH值，实时监测培养基液的状况，进而得知细胞的生长状况，可以通过添加或者排除废弃培养基液来保持细胞生长的良好环境。4、一般一种细胞培养基液对应一个线性关系，通过建立线性关系能够适应多种利用该培养基液培养的细胞培养过程的检测，适用范围广，相关性达到0.95以上，数据准确率高。附图说明图1为实施例1中pH与R/G的线性关系图；图2为实施例1中pH与(R/G)+(B/R)的线性关系图；图3为实施例2中pH与R/G的线性关系图；图4为实施例2中pH与(R/G)+(B/R)的线性关系图；具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进一步详细的说明。实施例1一、确定R、G、B值与pH值的关系式1、实验准备：配置好RPMI-1640培养基液，盐酸，pH计，颜色检测装置；2、实验步骤：(1)取样：1640培养基液取样8份，每份20mL，分别放入离心管中，并标号1-8。(2)调pH值：对8份样本分别用1mol/L的盐酸调pH值，调得的pH值分别为6.88，7.28，7.37，7.58，7.85，8.02，8.38，8.46。(3)读取R、G、B：用颜色检测装置读取不同pH值的培养基液对应的RGB值。每隔一个小时读数一次，共计三次，记录数据。3、实验结果：8个点实验数据如下表：4、线性关系建立：(1)探索R/G与pH值之间的线性关系：将所得到的RGB值根据不同的点计算R/G值，记录如下表：结果分析：由图1可知，R/G值与pH值之间呈线性关系，y＝0.31544x-1.2144，线性相关性R2达到0.95，相关性强。(2)探索(R/G)+(B/R)值与pH值之间的线性关系：将所得到的RGB值根据不同的点计算(R/G)+(B/R)值，记录如下表：结果分析：由图2可知，(R/G)+(B/R)值与pH值之间呈线性关系，y＝0.4111x-1.2693，线性相关性R2达到0.97，相关性强。二、验证RGB值与pH值的关系式1、实验准备：实验一配置好的RPMI-1640培养基液，pH计，细胞培养仪器；细胞原始液，请明确待培养细胞名称2、实验步骤：(1)细胞培养仪器运行，载入实验一的关系式1：R/G值与pH值之间呈线性关系，y＝0.31544x-1.2144；载入实验一的关系式2：(R/G)+(B/R)值与pH值之间呈线性关系，y＝0.4111x-1.2693；(2)抽取1640培养基液液1L在细胞培养仪器中培养工作，仪器不再补充培养基液，也不排废液。仪器开始培养细胞，每隔一小时读取一次培养基液的RGB值，同时进行采样。(3)取样6次，将样品取出，标号并用pH计测量pH值，记录。3、实验结果：(1)、RGB值如下所示：从上表可以看出，仪器在测量到培养基液的RGB值后，分别根据R/G值与pH值之间的线性关系式，(R/G)+(B/R)值与pH值的线性关系式，可以计算得到培养基液的pH值，同时采样得到的培养基液的pH值可以在外部测量得到，对比验证后发现结果非常接近，误差值较小，具体如下表：上表数据表明，通过测量RGB值计算出pH值的方法可行性非常高。实施例2一、确定R、G、B值与pH值的关系式1、实验准备：配置好DMEM培养基液(DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基液)，盐酸，pH计，颜色检测装置；2、实验步骤：(1)取样：DMEM培养基液取样6份，每份20mL，分别放入离心管中，并标号1-6。(2)调pH值：对6份样本分别用1mol/L的盐酸调pH值，调得的pH值分别为6.59，6.86，7.22，7.43，7.53，7.82。(3)读取R、G、B：用颜色检测装置读取不同pH值的培养基液对应的RGB值。每隔一个小时读数一次，共计三次，记录数据。3、实验结果：6个点实验数据如下表：4、线性关系建立：(1)探索R/G与pH值之间的线性关系：将所得到的RGB值根据不同的点计算R/G值，记录如下表：结果分析：由图3可知，R/G值与pH值之间呈线性关系，y＝0.82488x-4.1655，线性相关性达到0.98，相关性强。(2)探索(R/G)+(B/R)值与pH值之间的线性关系：将所得到的RGB值根据不同的点计算(R/G)+(B/R)值，记录如下表：结果分析：由图4可知，(R/G)+(B/R)值与pH值之间呈线性关系，y＝0.83444x-3.9564，线性相关性达到0.99，相关性强。二、验证RGB值与pH值的关系式1、实验准备：实验一配置好的DMEM培养基液，pH计，细胞培养仪器；2、实验步骤：(1)细胞培养仪器运行，载入实验一的关系式1：R/G值与pH值之间呈线性关系，y＝0.82488x-4.1655；载入实验一的关系式2：(R/G)+(B/R)值与pH值之间呈线性关系，y＝0.83444x-3.95本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测细胞培养基液pH的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：采集样本数据；采集细胞培养基液样本的R、G值或R、G、B值和pH值；步骤二：建立R、G值或R、G、B值和pH值的线性关系；步骤三：根据线性关系，通过测量细胞培养基液的R、G值或R、G、B值得知其pH值。

【技术特征摘要】
1.一种检测细胞培养基液pH的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：采集样本数据；采集细胞培养基液样本的R、G值或R、G、B值和pH值；步骤二：建立R、G值或R、G、B值和pH值的线性关系；步骤三：根据线性关系，通过测量细胞培养基液的R、G值或R、G、B值得知其pH值。2.根据权利要求1所述的检测细胞培养基液pH的方法，其特征在于，所述的细胞培养基液中含有酚红指示剂。3.根据权利要求1所述的检测细胞培养基液pH的方法，其特征在于，所述的步骤二中的线性关系的公式为pH=a1(R/G)...

【专利技术属性】
技术研发人员：童明庆，叶森，
申请(专利权)人：南京诺尔曼生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32