活体组织的冷冻保存方法技术

提供一种万一冷冻保存用容器破损时，活体组织也不会流到外部，以及贴在冷冻保存用容器上的标签不脱离、丢失的活体组织的冷冻保存方法。将存放着活体组织的冷冻保存用容器装入塑料薄膜或由其层合体制成的厚０．０１～１．００ｍｍ的包装体中，将该包装体内部空气抽出后密封、冷冻。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

Method for cryopreservation of living tissue

Provided is a method for cryopreservation of a living tissue that is not detached from a frozen container and a label that is not attached to a refrigerated container when the container is damaged when the freezer is damaged. The storage of a living tissue cryopreservation container or plastic film with a thickness of 0.01 to 1.00mm packaging body is made of the laminate, will draw air inside the package after sealing, frozen.

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及将存放了活体组织的冷冻保存用容器浸渍在液氮中进行冷冻保存的方法。迄今为止，活体组织的长期保存方法通常是采用将存放着活体组织的冷冻保存用容器浸渍在液氮中的方法。作为所用的冷冻保存用容器是经电子线照射后在X、Y双轴拉伸了的乙烯-醋酸乙烯共聚物的薄膜(参见特公昭55-44977号公报)，或用双轴拉伸了的交联聚乙烯薄膜(参见特公昭62-57351号公报)。这样的容器在冷冻状态受到猛烈冲击造成破损时，若其容器中存放着染有病毒及有害物质的活体组织，处理这种活体组织的操作人员便面临感染的危险，同时其他的冷冻保存用容器也存在被污染的问题。再则，以往的冷冻保存用容器上，为了判别其内部贮存的活体组织是谁的，都贴有标签。所用标签呈叠层结构，是由聚对苯二甲酸乙二醇酯、纸、聚烯烃系无纺布等组成的薄片层与丙烯酸系、有机硅酮系、橡胶系粘合剂等组成的粘合剂层而制成。当冷冻保存活体组织时，标签随活体组织保存用容器浸渍在液氮中，直接与液氮相接触，其粘着力因液氮的作用而降低，从冷冻保存用容器上脱落丢失的事情时有发生。鉴于上述问题，本专利技术意在提供一种万一冷冻保存用容器破损时活体组织也不会撒到外部、且粘在冷冻保存用容器上的标签不至脱离、丢失的活体组织冷冻保存方法。本专利技术人为防止粘贴的标签脱离丢失，尝试将冷冻保存用容器放入由塑料薄膜制成的包装体中，当不慎将冷冻保存用容器碰落地面时，惊恐之余，即使冻结保存用容器破损了，塑料薄膜的包装体也不会破损。基于这一事实进一步研究的结果，本专利技术人通过将包装体内部抽气并封装，能确实防止包装体破损，从而完成了本专利技术。即本专利技术是以将存放了活体组织的冷冻保存用容器放入塑料薄膜或由其叠层体制成的壁厚0.01～1.00mm的包装体中，再将该包装体内部抽气后封装、冷冻为特征的活体组织冷冻方法。这里，塑料薄膜最好是平均分子量100万～1500万的超高分子量聚乙烯。且塑料薄膜最好是用放射线以交联度50％～70％进行交联处理后的聚乙烯或其共聚物。关于本专利技术所述活体组织冷冻保存方法的说明如下。首先，将添加了二甲基亚砜等防冻剂的活体组织放入冷冻保存用容器，再将冷冻保存用容器密封起来。作为存入冷冻保存用容器中的活体组织，可举出红血球、血小板、白血球、骨髓、造血干细胞等；作为冷冻保存用容器的材料，可选用超高分子量聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、含氟树脂、聚酰亚胺等，最好是能耐得住液氮温度的材料。接下来，将贴着标签的冷冻保存用容器放入塑料薄膜或其叠层体制成的膜厚0.01～1.00mm的包装体中。一般认为，因坠落使冷冻保存用容器破损而包装体不破损的原因大概是由于冷冻用容器与收存并冷冻着的活体组织互相粘结，由下坠产生的冲击力使活体组织连同冻为一体的冻结用容器一起破损所至。相反，由于包装体与冻结保存用容器不互相粘结，包装体也就不会同冻结保存用容器一起破损了。还认为，由于包装体比冻结保存用容器升温快，抗冲击强度的恢复亦快，因此不至破损。作为塑料薄膜，最好选用脆化温度在-30℃以下的可挠性的胶片或薄膜。这里所说的脆化温度是指用JIS-K-7216试验方法(对放入特定温度试验槽中的带外伸臂的试验片施以预定的打击的测试方法)进行试验时，使试验片的50％受到破坏的温度。作为脆化温度在-30℃以下的塑料薄膜，所用材料可以是三氟化聚乙烯、低密度聚乙烯、中密度聚乙烯、高密度聚乙烯、聚碳酸酯、尼龙、聚砜、聚酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、超高分子量聚苯乙烯、乙烯醋酸乙烯共聚体及这些材料的叠层体。必要时，也可采用平均分子量100万～1500万的超高分子量聚乙烯、用放射线以交联度50％～70％交联了的聚乙烯或其共聚物、或是低分子量聚乙烯、聚酯等的聚烯烃系树脂叠层后的层合体等耐冲击性强的材料。包装体采用膜厚0.01～1.00mm的片材或薄膜制成的材料。当薄膜的厚度不足0.01mm时，低温下的冲击强度弱，可能因冲击而破损，而膜的厚度超过1.00mm时，包装体的导热性下降，冷冻迟缓，有可能损伤活体组织。平均分子量100万～1500万的超高分子量聚乙烯与低密度聚乙烯、高密度聚乙烯不同，在耐冲击性、耐磨耗性、自润滑性、耐药性、耐寒性、无毒性等方面都显示出极为优良的性质。当平均分子量超过1500万时，其低温下冲击强度没有明显提高但将增加制造成本。超高分子量聚乙烯片的成形由切削加工完成。具体说，就是将作为原料的超高分子量聚乙烯粉末压缩成圆筒状，再用锋利的刀将固化后的超高分子量聚乙烯块切削加工成形。用这样加工后的超高分子量聚乙烯片制成包装体。用放射线进行交联度50％～70％交联后的聚乙烯，其密度为0.92～0.95，通过放射线进行交联度50％～70％的交联，便获得了耐冲击性、耐寒性的性质。这里，当交联度不足50％时，耐冲击强度有可能变弱，而当交联度超过70％时，又难于热封。放射线交联时使用电子射线、γ射线等。作为电子射线源，可使用谐振变压器，以2兆电子伏特的电压，照射剂量率为1兆拉德/秒至10光拉德/秒的短时间进行照射。作为γ射线源，可使用剂量率为0.5兆拉德/时的钴60。最后，抽出包装体内部(冻结保存用容器与包装体之间的空隙处)存留的空气，密封包装体的开口部(最好是热封)，浸渍入液氮中。由于抽出了包装体内部的空气，包装体便紧贴在冻结保存用容器的外表面，不会妨碍活体组织冷冻时的热传导，所以不会影响冷冻速度。例如在冷冻保存脐带血干细胞时，若突然冻结将损伤组织细胞，因此，防止的办法是冷冻开始时降温速度控制在约2℃/分～10℃/分为好。另外，由于抽出了包装体内部的空气，可防止包装体内部存有空气时发生的破损(由外部直接受到冲击对包装体造成的破损)。作为抽气方法，除真空包装外，还有将接有真空泵的管子插入包装体的开口部抽出包装体内部的空气，或从包装体外部进行按压排气等方法。由于包装体的开口部做了密封处理，即使冷冻保存用容器破损，活体组织也不至流到外部。同样，贴在冷冻保存用容器上的标签也不会脱落、丢失。本专利技术以冷冻保存用容器和包装体对活体组织进行双重包装。结束冷冻时，将其从液氮中取出置于室温中使活体组织解冻。此时，即使不慎将容器碰落，因有双重包装，活体组织也不会飞散到外面。实施例1向用市售的乙烯-醋酸乙烯共聚体制成的造血干细胞保存用袋中注入一定量的水后密封起来，再用厚度为0.13mm的超高分子量聚乙烯薄膜(作新工业株式会社制、新光)制成的包装体对造血干细胞保存用袋进行真空包装，然后，将其放入液氮环境中以2℃/分的降温速度进行冷却，再在液氮中浸渍1小时。将这一浸渍在液氮中的放有造血干细胞保存用袋的包装体取出时，未见包装体破损，亦未见标签丢失。随即将装有上述袋子的包装体从1m高度扔下，结果是造血干细胞保存用袋破损了，而高分子量聚乙烯薄膜制成的包装体没有破损，内容物(冰)集中在包装体内没有飞散。实施例2向用市售的乙烯-醋酸乙烯共聚体制成的造血干细胞保存用袋中注入一定量的水后密封起来，再用经电子线照射交联度为60％交联的膜厚0.15mm的聚乙烯薄膜制成的包装体将造血干细胞保存用袋真空包装起来，将其放入液氮环境中以2℃/分的降温速度进行冷却，再在液氮中浸渍1小时。将这一存放着冷冻的造血干细胞保存用袋的包装体取出时，未见包装体破损，亦未见标签丢失。随即将装有上述袋子的包装体从1m高的台上扔下本文档来自技高网...

【技术保护点】
活体组织的冷冻保存方法，其特征是将存放了活体组织的冷冻保存用容器放入塑料薄膜或由其叠层体制成的膜厚０．０１～１．００ｍｍ的包装体中，再将该包装袋内部抽气后封装并冷冻。

【技术特征摘要】
JP 1997-9-4 240010/971．活体组织的冷冻保存方法，其特征是将存放了活体组织的冷冻保存用容器放入塑料薄膜或由其叠层体制成的膜厚0.01～1.00mm的包装体中，再将该包装袋内部抽气后...

【专利技术属性】
技术研发人员：川本升司，
申请(专利权)人：尼普洛株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]