本发明专利技术涉及一种绿僵菌制剂，同时本发明专利技术还涉及此绿僵菌制剂在防治植物寄生性线虫方面的应用，属于生物农药技术领域。此绿僵菌制剂是通过以下方法制备的：将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA或SDAY平板进行培养；挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04～0.06%的吐温-80制成（0.5～1）×107个/mL的孢子悬液；取10～12mL孢子悬液接入至50～60mL由发酵培养基在22～35℃环境下，110～220rpm培养3～15d发酵形成的发酵液中；将接入孢子悬液的发酵液调整pH至3.0～3.5。本发明专利技术提供的一种绿僵菌制剂在处理植物寄生性线虫时具有有效的杀灭或抑制作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种绿僵菌制剂，同时本专利技术还涉及此绿僵菌制剂在防治植物寄生性线虫方面的应用，属于生物农药
技术介绍
绿僵菌是一种广谱的昆虫病原菌，能够寄生于多种害虫，通过体表或取食作用进入害虫体内，在害虫体内不断增生繁殖，通过消耗营养、机械穿透、产生毒素，使害虫个体致死，并不断在害虫种群中传播。利用绿僵菌防治害虫的研究与实践已愈百年，因其寄主范围广，致病力强，且对人畜作用无毒害，是当今虫生真菌研究的主要对象之一。在全世界，绿僵菌作为生防菌种防治害虫已经进行了很多研究，并取得一系列进展。人们发现绿僵菌在侵染过程中会向寄主昆虫血腔分泌的一种环缩肽类抗生素——绿僵菌素(destruxin)，这种物质有显著的杀虫效果，并且具有不同于现有杀虫剂的全新作用机理，主要作用于昆虫的血液淋巴免疫系统，使之丧失免疫防御能力。绿僵菌素易降解、无残留，低毒性，开发利用绿僵菌素具有重要的经济意义。然而， 据申请人了解，绿僵菌在植物寄生性线虫方面防治报到很少，而有明显防治效果的更是鲜见。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种绿僵菌制剂，它具有效杀灭或抑制植物寄生性线虫的优点ο本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的 一种绿僵菌制剂，它是通过以下方法制备的①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA或SDAY平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04 0. 06%的吐温-80制成(0. 5 1) X IO7个 /mL的孢子悬液；③取10 12mL孢子悬液接入至50 60mL由发酵培养基在22 35°C环境下，110 220rpm培养3 15d发酵形成的发酵液中，④将接入孢子悬液的发酵液调整pH至3.0 3. 5。作为上述技术方案的优选，所述发酵培养基含有2. 5 3wt%的麦芽糖，0. 7 lwt%的蛋白胨，0. 5 0. 8wt%的葡萄糖。作为上述技术方案的优选，在步骤④中，在调整pH之后，再用1/12 1/10体积的萃取液进行萃取，然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1 (1 1.2)组成的混合物。本专利技术所述的绿僵菌是金龟子绿僵菌，拉丁学名为Metarhizium anisopliae。本专利技术的另一个目的是提供上述绿僵菌制剂的在防治植物寄生性线虫方面的应用。本专利技术具有以下技术效果本专利技术提供的一种绿僵菌制剂在处理植物寄生性线虫时具有有效的杀灭或抑制作用。具体实施例方式本具体实施例仅仅是对本专利技术的解释，其并不是对本专利技术的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本专利技术的权利要求范围内都受到专利法的保护。实施例一一种绿僵菌制剂，它是通过以下方法制备的①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用SDAY平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04%的吐温-80制成0. 5 X IO7个/mL的孢子悬液；③取IOmL孢子悬液接入至50mL由发酵培养基在22°C环境下，IlOrpm培养3d发酵形成的发酵液中，所述发酵培养基含有2. 5wt%的麦芽糖，0. 7wt%的蛋白胨，0. 5wt%的葡萄糖；④将接入孢子悬液的发酵液过滤，调整PH至3.0，用1/12体积的萃取液进行萃取，然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1 1 组成的混合物。实施例二一种绿僵菌制剂，它是通过以下方法制备的①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用0.05%的吐温-80制成0. 8 X IO7个/mL的孢子悬液；③取IlmL孢子悬液接入至55mL由发酵培养基在环境下，160rpm培养8d发酵形成的发酵液中，所述发酵培养基含有2. 8wt%的麦芽糖，0. 8wt%的蛋白胨，0. 6wt%的葡萄糖；④将接入孢子悬液的发酵液过滤，调整PH至3.2，用1/11体积的萃取液进行萃取， 然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1 1.1组成的混合物。实施例三一种绿僵菌制剂，它是通过以下方法制备的①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用0.06%的吐温-80制成1. 0 X IO7个/mL的孢子悬液；③取12mL孢子悬液接入至60mL由发酵培养基在35°C环境下，220rpm培养15d发酵形成的发酵液中，所述发酵培养基含有3. 0wt%的麦芽糖，1. 0wt%的蛋白胨；④将接入孢子悬液的发酵液过滤，调整PH至3.5，用1/12体积的萃取液进行萃取， 然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1 1. 2组成的混合物。 一、试管法测定绿僵菌制剂杀根结线虫活性1.方法①每个试管中装沙10m L②移栽4天的黄瓜苗一株③打入100ρ ρ m的待试药品3 m L④处理一天⑤打入1000个根结线虫虫卵⑥18天后观察黄瓜苗根部情况2.根结线虫发病等级判定标准 数字表示0 10个M级10 20个 N级>20个二、实验结果权利要求1.一种绿僵菌制剂，其特征在于，它是通过以下方法制备的①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA或SDAY平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04 0. 06%的吐温-80制成(0. 5 1) X IO7个 /mL的孢子悬液；③取10 12mL孢子悬液接入至50 60mL由发酵培养基在22 35°C环境下，110 220rpm培养3 15d发酵形成的发酵液中；④将接入孢子悬液的发酵液调整pH至3.0 3. 5。2.根据权利要求1所述的一种绿僵菌制剂，其特征在于所述发酵培养基含有2.5 3wt%的麦芽糖，0. 7 lwt%的蛋白胨，0. 5 0. 8wt%的葡萄糖。3.根据权利要求1所述的一种绿僵菌制剂，其特征在于在步骤④中，在调整PH之后， 再用1/12 1/10体积的萃取液进行萃取，然后收集有机相并将该有机相浓缩；所述萃取液是由乙酸乙酯和二氯甲烷以体积比为1 (1 1.2)组成的混合物。4.如权利要求1或2或3所述的绿僵菌制剂在防治植物寄生性线虫方面的应用。全文摘要本专利技术涉及一种绿僵菌制剂，同时本专利技术还涉及此绿僵菌制剂在防治植物寄生性线虫方面的应用，属于生物农药
此绿僵菌制剂是通过以下方法制备的将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用PDA或SDAY平板进行培养；挑选平板上产孢较好的菌株，用0.04～0.06%的吐温-80制成(0.5～1)×107个/mL的孢子悬液；取10～12mL孢子悬液接入至50～60mL由发酵培养基在22～35℃环境下，110～220rpm培养3～15d发酵形成的发酵液中；将接入孢子悬液的发酵液调整pH至3.0～3.5。本专利技术提供的一种绿僵菌制剂在处理植物寄生性线虫时具有有效的杀灭或抑制作用。文档编号A01N63/04GK102337317SQ201110245800公开日2012年2月1日 申请日期2011年8月25日 优先权日2011年8月25日专利技术者张莉, 朱振, 李爱民, 王成树, 田宏, 高丙利, 龚茂江 申请人:中国科学院上海生命科学研究院湖州现代农业生物技术产业创新中心, 浙江东奇生物科技有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种绿僵菌制剂，其特征在于，它是通过以下方法制备的：①将分离、筛选、纯化的绿僵菌菌株用ＰＤＡ或ＳＤＡＹ平板进行培养；②挑选平板上产孢较好的菌株，用０．０４～０．０６％的吐温－８０制成（０．５～１）×１０７个／ｍＬ的孢子悬液；③取１０～１２ｍＬ孢子悬液接入至５０～６０ｍＬ由发酵培养基在２２～３５℃环境下，１１０～２２０ｒｐｍ培养３～１５ｄ发酵形成的发酵液中；④将接入孢子悬液的发酵液调整ｐＨ至３．０～３．５。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高丙利，王成树，李爱民，朱振，张莉，田宏，龚茂江，
申请(专利权)人：浙江东奇生物科技有限公司，中国科学院上海生命科学研究院湖州现代农业生物技术产业创新中心，
类型：发明
国别省市：33
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