本发明专利技术是一种鲤鱼肌肉中环丙沙星、恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，以鲤鱼为研究对象，用添加目标药物饲养方式，研制出同时含有一定浓度环丙沙星和恩诺沙星的鲤鱼肌肉实物标准样品。掌握本实物标准样品的生产关键控制技术，包括含量水平、均匀性、稳定性及定值等的控制，实现该标准样品的规范化、规模化生产制备。该标准样品用于动物源食品兽药残留检测质量控制和检测能力评价，对食品安全检测具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽药残留检测的动物性食品基体标准物质
，具体是涉及一种鲤鱼肌肉中环丙沙星、恩诺沙星残留基体冻干粉标准样品的制备方法。标准物质是具有准确量值的测量标准，是研究与评价测量方法、保证测量结果的一致性和可比性，保证国家之间、部门之间、商品交换或技术交流之间、生产过程控制的不同时间之间的分析结果的可比性和一致性的重要物质。标准物质(ReferenceMaterial，简称RM)包括纯的化学物质和具有一定理化特性的实物标准样品
技术介绍
环丙沙星和恩诺沙星是典型的喹诺酮类药物，喹诺酮类药物是一种人工合成的广谱抗生素，很多国家都禁止使用喹诺酮类药物用作兽药，在我国环丙沙星是禁止用于动物的，恩诺沙星是限制使用的兽药，但一些养殖企业盲目追求治疗效果，大量滥用喹诺酮类药物，致使一些动物产品中存在一定喹诺酮类药物残留，日本、美国等发达国家经常以此为技术壁垒限制中国动物源食品特别是水产品的出口。在食品安全检测体系中，标准物质对整个检测质量控制体系起到核心作用。欧盟对兽药残留分析方法与结果表达的法规(2002/657/EC)中明确指出了需要采用实物标准样品进行检测过程控制，可见实物标准样品在兽药残留检测中的具有十分重要的意义。目前用于喹诺酮类药物残留检测的标准物质主要是各种纯品标准样品，检测质量控制主要是通过向样品中添加纯的各种标准品后进行检测分析，这种分析方法无法代表目标分析物在活体内真正存在的状态，即无法代表目标分析物在动物的体内“内化”状态。这样方式得到的标准样品并非真正意义上的实物标准样品，由于目标物和基体结合情形与真实检测样品不完全一致而导致提取、净化等处理结果与日常分析样本存在较大差异，从而影响结果的可靠性和有效性。
技术实现思路
本专利技术是国内首次获得鲤鱼肌肉实物环丙沙星、恩诺沙星标准样品，且两种药物同时存在。本专利技术的目的是提供一种鲤鱼肌肉中环丙沙星和恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，通过添加环丙沙星和恩诺沙星养殖鲤鱼，获得样品材料，并制备成一种均勻性好、稳定性好、易保存且目标物和基体结合情形与真实检测样品一致的标准样品；该标准样品可用于环丙沙星、恩诺沙星等喹诺酮类药物残留检测质量控制、检测方法评价、检测能力评价。本专利技术鲤鱼肌肉中环丙沙星和恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法采用环丙沙星和恩诺沙星对活鲤鱼进行添加养殖，使鲤鱼体内含有环丙沙星和恩诺沙星，在不含药物水中饲养待鲤鱼肌肉药物分布达到均勻状态后，将鲤鱼捕捞快速冷冻至-18°C以下，将冷冻的鲤鱼室温下解冻，取肌肉部分勻浆制成鱼糜，冷冻干燥，过筛，装瓶，真空封装，制备得到鲤鱼肌肉中环丙沙星和恩诺沙星残留冻干粉标准样品；制备的标准样品中的环丙沙星和恩诺沙星浓度约为100ug/kg。本专利技术的显著优点是采用模拟养殖条件下对生长的活鲤鱼药物养殖添加后选择适当时机，将鲤鱼捕捞快速冷冻至-18°C以下，将冷冻的鲤鱼室温下解冻，取肌肉部分勻浆制成鱼糜，冷冻干燥，过筛，分装密封包装、均勻性检验、稳定性研究和协作实验检测，通过给药控制和采集时机的选择可获得预期含量的目标物结合状态与实际检测样品一致的含环丙沙星和恩诺沙星鲤鱼基体阳性材料，采用搅碎和勻化介质相结合的工艺可以保证材料的均勻性，冷冻干燥、分装密封可以保证样品的稳定性，便于标准样品的常温传递。本专利技术的产品可以在常温下运输，保质期长，目标物和基体结合情形与真实检测样品一致，可用于相关检测分析的质量控制，样品均勻稳定，运输方便，使用可靠，产品具有显著的经济价值和市场竞争力。具体实施例方式下面结合具体实施例1对本专利技术作进一步详细的说明。实施例1，一种鲤鱼肌肉中环丙沙星和恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法， 本实施例以控制目标含量水平lOOug/kg为例，其具体步骤如下(1)实验动物的选择市购活体鲤鱼，要求个体大小均一、均重约1. ^g，应先确认样品中不含环丙沙星和恩诺沙星，随机取样，检测确认为阴性样品后进行喂养。阴性样品在 200C -25°C环境下饲养2天后，剔除受伤不健康的鲤鱼；(2)药物养殖添加向鱼池中添加的医用环丙沙星和恩诺沙星片剂，先将两种药片分别粉碎、水溶解，根据养殖水量，添加药物使水中环丙沙星浓度约为500ug/L，喂养M 小时后再添加恩诺沙星药液，浓度控制约为250ug/L，实时监控检测水体中和鱼体内药物浓度，在此条件下继续养殖18- 小时后，鲤鱼肌肉内药物浓度约为环丙沙星和恩诺沙星浓度分别约为20ug/kg和25ug/kg，将鲤鱼捞至不含环丙沙星和恩诺沙星的养殖池中继续养殖12小时，使鲤鱼肌肉内药物分布均勻；此时两种药物在鲤鱼体内浓度约为20ug/kg。(3)捞出步骤( 中饲养完成后的鲤鱼快速冷冻至_18°C以下，将冷冻的鲤鱼室温下解冻，去鳞、去皮、去头、去刺、去内脏，留取肌肉部分；(3)搅碎勻浆将鱼肉混合搅碎，IOkg搅碎鱼肉中加^ig稀释剂(水+乙醇，95+5，) 混勻制成鱼糜(4)冷冻干燥将鱼糜放入真空冷冻干燥机内冷冻干燥，冷冻干燥条件-60°C速冻成厚度不超过2cm的冻块，置于真空干燥仓中，快速升温至60°C，保持48小时，直至冻块干燥；(5)粉碎均质将冷冻干燥的鱼糜用中药粉碎机粉碎，以搅拌锅混勻。(6)过筛勻质后的鱼粉过0.6mm孔筛，弃去筛余；(7)包装快速用聚乙烯瓶分装(聚乙烯瓶提前45°C烘干)，每个瓶内鱼粉重量 10g，再用铝箔袋将聚乙烯瓶进行真空封装；以下是本专利技术的具体实施实验和效果数据，以进一步说明本专利技术，但是本专利技术不仅限于此。1、均勻性检验采用单因素方差分析进行均勻性检验，随机抽取10个样品，每个样品平行测定2 次，进行单因素方差分析，分析结果表明，环丙沙星F值为0. 74 ；恩诺沙星F值为0. 88，均小于F临界值3. 02，样品是均勻的。称取0. 5g样品，加2. Oml水还原15min，按GB/T20366-2006《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法》方法进行检测，结果如下表1环丙沙星均匀性检测结果权利要求1.，其特征在于 采用环丙沙星、恩诺沙星对活鲤鱼进行添加养殖并控制添加时间，使鲤鱼体内含有环丙沙星、恩诺沙星，在不含药物水中饲养待鲤鱼肌肉中药物分布达到均勻状态后，取鱼肉勻浆制成鱼糜，冷冻干燥，过筛，装瓶，真空封装，制备得到鲤鱼肌肉中同时含有环丙沙星、恩诺沙星冻干粉标准样品。2.—种鲤鱼肌肉中同时含有环丙沙星、恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，其特征在于所述制备的冻干粉标准样品中的环丙沙星、恩诺沙星浓度约为lOOug/kg。3.根据权利要求1所述的鲤鱼肌肉中环丙沙星、恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，其特征在于采用内外包装，内包装使用聚乙烯瓶，外包装使用铝箔袋真空封装。4.根据权利要求1或2所述的鲤鱼肌肉中环丙沙星、恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)实验动物的选择市购活体鲤鱼，要求个体大小均一、均重约1.^g，应先确认样品中不含环丙沙星、恩诺沙星，随机取样，检测确认为阴性样品后进行喂养，阴性样品在 200C -25°C环境下饲养2天后，剔除受伤不健康的鲤鱼；(2)药物养殖添加向鱼池中添加的医用环丙沙星和恩诺沙星片剂，先将两种药片分别粉碎、水溶解，根据养殖水量，添加药物使水中环丙沙星浓度本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种鲤鱼肌肉中环丙沙星、恩诺沙星残留冻干粉标准样品的制备方法，其特征在于：采用环丙沙星、恩诺沙星对活鲤鱼进行添加养殖并控制添加时间，使鲤鱼体内含有环丙沙星、恩诺沙星，在不含药物水中饲养待鲤鱼肌肉中药物分布达到均匀状态后，取鱼肉匀浆制成鱼糜，冷冻干燥，过筛，装瓶，真空封装，制备得到鲤鱼肌肉中同时含有环丙沙星、恩诺沙星冻干粉标准样品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽君，崔凤杰，时文春，冯燕平，周长朋，
申请(专利权)人：时文春，
类型：发明
国别省市：37
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