一种用于池蝶蚌养殖的微生物制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种用于池蝶蚌养殖的微生物制剂，该微生物制剂包含有芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的活菌，以及溶藻弧菌、副溶血弧菌和黑曲霉的发酵液灭菌干粉。本发明专利技术的微生物制剂中包含有的芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的活菌，能够有效的促进淡水养殖珍珠的抗病能力，提高珍珠的生长速度，并能够改善水质环境。并且，加入了灭活的溶藻弧菌、副溶血弧菌的菌粉，进一步增强了微生物制剂的免疫增强效果。实际应用表明本发明专利技术的制剂相比于对照组提高了淡水珍珠池蝶蚌对常见疾病的抵抗力，并提高了淡水珍珠的生长速率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于水产养殖微生物制剂
，具体涉及一种可用于增强池蝶蛘疾病抵抗力和净化养殖水质的微生物制剂。
技术介绍
我国是世界上最早采集和利用珍珠的国家，是世界最大的珍珠生产国，在世界珍珠行业中有着举足轻重的地位。2005年我国淡水珍珠产量已达到1500余吨，占世界珍珠总产量的95%，创造了巨大的经济和社会效益。然而，随着珍珠养殖业的迅速发展，养殖水域的污染也日趋严重，养殖的生态环境正遭受着不同程度的破坏，珍珠蛘的暴发性疾病频繁发生，给整个养殖业造成巨大的经济损失。为了解决这一问题，水产养殖工作者除了通过遗传育种方法筛选出抗病力强的品系外，还从养殖方法、饵料等外部因素入手，来减少珍珠贝染病的机率；或是提高珍珠贝的疾病抵抗力。在这些方法中，一种值得借鉴的手段就是目前在鱼类养殖中大力提倡的生态养殖模式，通过在养殖水体中加入有益微生物，来调节和改善养殖生态环境，控制和减少养殖动物暴发性病害发生。有益微生物是指能够提高水产养殖动物产量、提高其抗病能力及改善水质环境的微生物；用有益微生物制成的制剂，被称为微生态制剂，又称益生素、促生素、竞生素等。通过在养殖水体中或是养殖饵料中加入有益微生物，可以有效的消除水体中的氨氮、硫化氢、 有机酸等有害物质，从而改善水质，平衡酸碱度；并将养殖动物的排泄物、残饵、浮游生物残体等分解成二氧化碳、硝酸盐、磷酸盐等。而这些分解产物又能够作为营养促进单细胞藻类的生长繁殖；单细胞藻类进行光合作用释放氧气，不仅可以给养殖生物提供氧气，还能氧化有机物。因此，制备出一种性能良好的微生物制剂对于淡水珍珠贝的健康养殖具有重要的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种微生物制剂，即一种能够有效的对淡水珍珠贝池蝶蛘的养殖水体进行净化，提高池蝶蛘抗病力的微生物制剂，已弥补现有技术的不足。本专利技术的微生物制剂，包括有通过生物夺氧，创造厌氧环境供有益菌生长的芽孢杆菌；通过产酸抑制致病菌生长繁殖，合成维生素，促进消化吸收和代谢，克制腐败的乳酸菌；能够促进生长发育并具有生物拮抗和免疫功能，抵制病原微生物的双歧杆菌；能够促进营养物质消化吸收的酵母菌的活菌。同时，为了增强淡水珍珠贝的疾病抵抗力，在本专利技术的微生物制剂的干粉中又加入了贝类常见的致病菌(溶藻弧菌、副溶血弧菌)的菌体灭菌干粉，以增强珍珠贝的非特异性免疫能力，进一步提高贝类对病源生物的侵扰。本专利技术用于制备微生物制剂的菌株可以采用任一市售的产品，例如芽孢杆菌采用广东省微生物研究所的枯草芽胞杆菌(Bacillus Subtilis Cohn,GIMI136)；乳酸菌选用植物乳杆菌(LactcAacillus plantarum)，保藏号CGMCC1. 298 ；或是嗜酸乳杆菌，选购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为嗜酸乳杆菌(LactcAacillus acidophilus)，3保藏号CGMCC 1.1854。双歧杆菌选用动物双歧杆菌，中国普通微生物菌种保藏管理中心， 商品号CGMCC 1.2268.酵母菌购自中科院微生物菌种库。溶藻弧菌、副溶血弧菌也购自中科院微生物菌种库。本专利技术微生物制剂，包括有芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的活菌。上述的微生物制剂中活菌的浓度为IO7 109CFU/ml，微生物制剂中活菌以菌液或菌粉形式存在。为了更好的增强本专利技术制剂的增强免疫效果，在干粉状态的微生物制剂中又加入溶藻弧菌和/或副溶血弧菌的发酵液灭菌干粉。为了防止微生物干粉制剂在放置过程中产生霉变，在干粉制剂中又加入了黑曲霉的发酵液灭菌干粉；黑曲霉可选用购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为黑曲霉(Aspergillus niger)，保藏号CGMCC 3.316。上述微生物制剂作为饵料添加剂，用于增强养殖淡水珍珠贝的疾病抵抗力。本专利技术的微生物制剂中包含有芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的活菌，能够有效的促进淡水养殖珍珠的抗病能力，提高珍珠的生长速度，并能够改善水质环境。并且， 在干粉状态的制剂中加入了灭活的溶藻弧菌、副溶血弧菌的菌粉，进一步增强了微生物制剂的免疫增强效果。实际应用表明本专利技术的制剂相比于对照组明显增强了淡水珍珠池蝶蛘对疾病的抵抗力，并提高了淡水珍珠的生长速率。具体实施例方式本专利技术的芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的培养基可选用任一种上述四种菌都适用的配方，也可以是四种菌分别对应的培养基。适用培养基的配方如下=NaCl 0. 5g、 酵母浸出粉0. 3g、琼脂30g、葡萄糖0. 3g，依次溶解到850ml的纯净水中。另外也可以选用四种菌单独使用的培养基，具体如下1、芽孢杆菌的培养基1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0. 5g牛肉膏+20g琼脂；2、乳酸菌培养基(MRS固体培养基)蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、 K2HPO4 ·3Η20 2g、乙酸钠 5g、葡萄糖 20g、吐温 801g、柠檬酸二铵 2gMgS04*7H20 0. 58g、 MnSO4 · 4H20 0. 25g，加蒸馏水 lOOOmL，调 PH6. 2-6. 4 在 121°C，15min 灭菌备用；3、双歧杆菌培养基选用BS培养基，可购买自青岛高科园海博生物技术有限公司；4、酵母菌培养基为麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。溶藻弧菌的培养基可以选用胰胨大豆胨琼脂培养基(TSA+2% NaCl)，副溶血弧菌的培养基为TCBS培养基。下面结合具体实施例对本专利技术的微生物制剂进行描述。实施例1 菌液形式的微生物制剂将芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的培养基配制好后，分别将菌种按照2% 的接种量接种于培养基中，接入后，在35°C过夜培养M 4 后，或是测量0D600值为0. 5 时停止培养。将各菌的培养液等体积混合，就制成本专利技术的微生物制剂。制得的微生物制剂中菌的浓度为2.8X109CFU/ml，其中四种菌的菌株数目大致相同，比例为1 1 1 1。实施例2 菌粉形式的微生物制剂按实施例1中的方法制成菌液制剂后，将混合菌液按照中国专利技术专利 200310105423. 1所描述的方法进行干燥，具体就是菌液经过高速离心后加入保护剂，在真空冻干机中经180-300分钟降温至-20-50°C时开始抽真空，同时经1000-2000分钟升温至 20-40°C，停止升温并维持180-500分钟即得到菌粉形式的微生物制剂。测试结果表明菌粉中活菌的比例还保存在80 %左右。实施例3 微生物制剂中加入溶藻弧菌、副溶血弧菌的灭菌菌粉将胰胨大豆胨琼脂培养基和TCBS培养基配制好后，分别接入溶藻弧菌和副溶血弧菌的菌种，在36°C过夜培养制成发酵菌液，发酵菌液中的菌数为IO8 109CFU/ml。然后将混合菌液进闪蒸干燥塔干燥，进口温度85°C，出口温度48-50°C，干燥10s，40目粉碎，即得到溶藻弧菌、副溶血弧菌的灭菌菌粉。将溶藻弧菌、副溶血弧菌的灭菌菌粉加入到实施例 2制备的菌粉制剂中，每IOOg实施例2制备的菌粉制剂中分别加入4 8g的溶藻弧菌、副溶血弧菌灭菌菌粉。之所以加入溶藻弧菌、副溶血弧菌的灭菌菌粉，是防止制备的微生物制剂中有致病活菌的存在。但灭活的菌粉蛋白不但不会使养殖的珍珠贝发生病害，菌粉中的抗原蛋白还可诱导池蝶蛘产生非特异的免疫应答，从本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于池蝶蚌养殖的微生物制剂，包括有芽孢杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌的活菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王纪荣，王纪卫，王纪军，
申请(专利权)人：浙江天地润珍珠有限公司，
类型：发明
国别省市：33