本发明专利技术提供了一株双歧杆菌LJM-001菌株，保藏号为CGMCC?No.4090。LJM-001菌株对乐果超敏感，是检测食品中乐果残留的工作菌株。本发明专利技术还提供了一种筛检食品中乐果残留的微生物法，根据筛检培养基上抑菌圈的大小判定待测食品样品中乐果残留量是否超标。本发明专利技术提供筛查食品中乐果残留的方法具有操作简便、费用低廉、灵敏度高、适合样本筛查的特点，更符合我国农药残留检测部门的大量样品筛检要求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株青春双歧杆菌及其作为工作菌株在食品中乐果残留筛检的应用。
技术介绍
乐果是一种高效中等毒性的有机磷农药，化学名为0，0- 二甲基-S_(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯(C6H12NO3PS2),因其见效快、价格低廉等优势，已在我国广泛用于蔬菜水果等农作物的杀虫、杀菌及杀螨。但乐果的过量使用，使其在蔬菜水果中高残留，给人们的健康带来巨大的威胁，因此我国已限量使用。2005年1月中华人民共和国卫生部和中国国家标准化管理委员会发布 GB2763-2005规定在叶菜类蔬菜的最大残留限量(maximum residue limits, MRL)为lmg/ kg,梨果类水果MRL为lmg/kg，核果类水果MRL为ang/kg，柑橘类水果MRL为ang/kg，并将检测食品中乐果残留量列为残留监控重点。目前，测定乐果的方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、化学发光法、酶抑制法、毛细管电泳技术(CE)等。用上述方法检测存在仪器设备复杂、样本前处理和测定操作繁琐的缺陷，不适合大量样本筛检，而且费用高昂，使其推广使用受到限制。微生物法突出优点是简便而经济，不需要复杂的仪器设备，在一般的实验条件下就可以进行，可以对大量样本进行快速初筛。但是，工作菌株对待测物质的敏感性和特异性高低是影响微生物法准确度和精密度的最关键问题。迄今为止，尚无筛选出对乐果农药敏感性高、特异性高的双歧杆菌工作菌株及其在食品中乐果残留筛检应用的相关报道。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一株对乐果敏感性高的双歧杆菌。本专利技术的双歧杆菌是青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis) LJM-OOICGMCC No. 4090。本专利技术的青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)LJM-001,已于 2010 年 8月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC(地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)，保藏编号为 CGMCC No. 4090。本专利技术的青春双歧杆菌LJM-001分离于一名浙江省健康青年人粪便中。本专利技术的青春双歧杆菌LJM-001具有下述微生物学特征(1)菌落形态呈淡黄色或乳白色，中央隆起，边缘整齐，圆形，光滑，直径1 2mm 大小。(2)个体形态为不规则G+无芽孢杆菌，菌体呈杆状，稍弯曲，有的呈V型，少量呈 Y型，两端着色深。(3)生理生化特征:D_核糖(+) ；L-阿拉伯糖(+)；乳糖(+)；纤维二糖(+)；松三糖⑴；棉籽糖⑴；山梨醇⑴；淀粉⑴；葡萄糖⑴；木糖⑴；甘露糖⑴；果糖⑴；半乳糖⑴；麦芽糖⑴；海藻糖⑴；密二糖⑴；甘露醇⑴；水杨苷⑴；硝酸盐还原㈠； 触酶(“)；精氨酸水解试验(“)；明胶液化反应试验(“)；吲哚试验(“)；F6PPK Bl (+)。厌氧下生长良好，有氧环境中不生长。最适生长温度37 41°C ；最低生长温度 25 ；最高43 45°C ；生长最适pH 6. 5 7. 0 ；pH4. 5 5. 0或8. 0 8. 5不生长。本专利技术的青春双歧杆菌LJM-001与同属同种标准菌株相比对乐果敏感性提高了 100倍以上。本专利技术的另一目的是建立一种应用青春双歧杆菌LJM-001作为工作菌株筛检食品乐果残留的微生物法。本专利技术筛检食品乐果残留的原理是基于乐果对其敏感的青春双歧杆菌LJM-001 具有明显的抑制作用，将食品样品点样双歧杆菌菌层筛检培养基上，厌氧培养18-24小时后，测定其形成的抑菌圈，根据抑菌圈的大小即可判定待测食品样品中乐果残留量是否合格。本专利技术利用青春双歧杆菌LJM-001作为工作菌株筛检食品乐果残留的微生物法， 包括步骤1、筛检培养基制备蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乙酸钠5g， K2HPO4 2g，MgSO4 · 7 H2O 0. 5g，MnSO4 · 4H20 0. 2g，低聚果糖 3g，柠檬酸二铵 2g，吐温-80 lml，琼脂15g，显色剂0. lg，蒸馏水1L，将以上成分加热溶解校正pH6.5，115°C高压灭菌 15-20分钟。显色剂为5-溴-4-氯-3-吲哚-β -D半乳糖苷(X-Gal)。2、菌悬液制备青春双歧杆菌LJM-001接种于营养琼脂的斜面培养基，35士2°C厌氧培养M小时，用灭菌生理盐水将菌苔洗下，制成菌悬液，，在721分光光度计580nm波长下将光透过率控制为0. 8，置2-8°C冰箱中保存。3、菌层平板制备取直径约90mm、高16 17mm的平板，注入加热融化的筛检培养基20mL，使在碟底内均勻摊布，放置水平台上使凝固，作为底层；在已凝固的底层培养基 (放冷至48 50°C )上加入菌悬液0. 5mL，充分混勻，使在底层上均勻摊布，作为菌层。4、样品前处理取待检的食品样品勻浆组织5g，用无菌磷酸盐缓冲液 (pH6. 0)25ml稀释，漩涡混勻，于80°C水浴加热5min，冷却后于5000r/min离心15min，取上清液作为供试样品液。5、样品测定在菌层平板的培养皿中放置圆滤纸片(直径13士 1mm)，用镊子轻压纸片，使纸片与培养基紧密接触，用微量移液器在圆滤纸片上滴加供试样品液90μ 1。每个供试样至少重复2个培养皿，35士2°C厌氧培养18 M小时，抑菌圈直径通过抑菌圈电脑测量分析仪测量。6、结果判定当抑菌圈彡15mm，判断食品样品中乐果残留阳性(+)。本专利技术工作菌株为青春双歧杆菌LJM-001，已于2010年08月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No. 4090。本专利技术所述的食品样品包括白菜、茄子、黄瓜、南瓜、冬瓜、苹果、梨子、桃子等蔬菜水果。本专利技术的优点及效果(1)本专利技术青春双歧杆菌LJM-001对乐果敏感性高、特异性好，可以作为微生物方法筛检食品中乐果残留的工作菌种；(2)本专利技术筛检培养基中添加了 X-Gal指示剂，使产生的抑菌圈更加清晰；(3)本专利技术样品前处理简单，能同时筛检大量食品样品；(4)本专利技术检测方法简便易行，具有灵敏度高，精确度高等特点，在蔬菜中最低检测限为0. lmg/kg，低于国家标准的最大残留限量，回收率均大于70%，变异系数在10%以内，符合食品乐果残留筛检的准确度和精密度要求，完全适合食品中乐果残留的筛检。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1青春双歧杆菌LJM-001的分离与鉴定以一名浙江省健康青年人的粪便作为分离样品，在改良MRS琼脂培养基上，37°C 厌氧条件下，4 涂布分离培养，获得本专利技术所述的青春双歧杆菌LJM-001，鉴定为青春双歧杆菌，已于2010年08月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)，保藏号为 CGMCC No. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一株青春双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＬＪＭ－００１，保藏编号为ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．４０９０。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳明，
申请(专利权)人：温州医学院，
类型：发明
国别省市：33
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