纳他霉素片状晶体的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种纳他霉素片状晶体的制备方法，它包括以下步骤：①取纳他霉素菌丝体加入体积比为60-90∶40-10的甲醇与水的混合液中；②用碱性物质调节pH值至10-12；③液固分离，收集滤液得纳他霉素提取液；④浓缩提取液至纳他霉素含量在18～26mg/ml之间，絮凝去除不溶物，得纳他霉素精提取液；⑤分两阶段酸化纳他霉素精提取液：先缓慢滴加酸，使pH值降到8-9后再搅拌1小时以上；接着继续缓慢滴加酸，使pH值降到6-7后再搅拌3小时以上，得片状的纳他霉素晶体的结晶液；⑥液固分离，真空干燥得片状纳他霉素晶体。本发明专利技术可制得均一的纳他霉素片状晶体，降低后续晶体洗涤与干燥的难度，缩短晶体的过滤和干燥时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从菌丝体中制备纳他霉素片状晶体的方法。
技术介绍
纳他霉素(Natamycin)又称匹马霉素(Pimaricin)是一种多烯大环内酯类抗生素，它能够抑制酵母菌和霉菌的生长，且不作用于人体肠道内的正常菌群。自1996年起我国食品添加剂委员会就对纳他霉素进行了应用方面的跟踪研究与评价，2011年正式出台了纳他霉素的国家标准，作为食品防霉剂用于奶酪、糕点、肉肠等食品的加工过程中。纳他霉素分子式为C33H47N013 ；分子量为665. 75道尔顿；是两性化合物，等电点为 6. 5。纳他霉素由链霉菌发酵产生，发酵液经液固分离后，收集菌丝体，通过添加有机溶媒和调节PH的方法，最终可以得到纳他霉素的晶体。纳他霉素的晶习有片状与针状两种， 它们都属于α-纳他霉素晶系。在纳他霉素的分离纯化过程中，纳他霉素的不同晶习会影响纳他霉素晶体的过滤速度和干燥时间。针状晶习易于聚结成团，在聚结时又易于包裹杂质而影响纯度，同时增加过滤、洗涤及干燥的难度。采用中国专利CN101062934A公布的提取方法制得的纳他霉素晶体是短针状的或无定形的，不利于纳他霉素晶体的过滤及干燥，过滤和干燥时间都较长。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，它可制得均一的纳他霉素片状晶体，从而降低后续晶体洗涤与干燥的难度，缩短晶体的过滤和干燥时间。本专利技术技术方案是这样构成的一种，其特征在于 它包括以下步骤a、取纳他霉素菌丝体加入甲醇与水的混合液中；所述的甲醇与水的混合液中，甲醇与水的体积比为60-90 40-10 ；每IL甲醇与水的混合液添加90_110g纳他霉素菌丝体；b、用碱性物质均勻搅拌调节步骤a获得的溶液的pH值至10-12，使纳他霉素溶解于混合溶液中；C、将步骤b获得的溶液进行液固分离，收集滤液得到纳他霉素的提取液；d、浓缩步骤c获得的纳他霉素的提取液至纳他霉素含量在18 ^mg/ml之间，并絮凝去除在此过程中析出的不溶物，得到纳他霉素精提取液；e、分两阶段酸化步骤d获得的纳他霉素精提取液第一阶段一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的PH 值逐步降低到8-9，在pH值不再回升的情况下，再搅拌1小时以上；第二阶段继续一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的pH值逐步降低到6-7，在pH值不再回升的情况下，再搅拌3小时以上，得到片状的纳他霉素晶体的结晶液；f、将步骤e获得的纳他霉素晶体的结晶液进行液固分离，然后真空干燥得到片状纳他霉素晶体。本专利技术的制备原理说明如下本专利技术的申请人通过研究发现纳他霉素提取液中甲醇的含量对晶习有很大的影响，并且在纳他霉素的结晶过程中养晶工艺可以改善片状晶体的颗粒分布，提高纳他霉素晶体的纯度。根据以上两点，本专利技术采用一定比例的甲醇与水的混合液从纳他霉素菌丝体中提取并纯化纳他霉素，然后通过结晶和养晶工艺，分阶段酸化纳他霉素精提取液，从而制备获得片状的纯度较高的纳他霉素晶体。分阶段酸化纳他霉素精提取液的目的在于在第一阶段，通过滴加酸使纳他霉素精提取液的PH值缓慢而有控制的下降，即缓慢而有控制的降低纳他霉素的溶解度，防止纳他霉素爆发成核的现象出现；此时结晶与溶解趋向平衡，利于晶体的长大，但此时溶解度较大，直接过滤的话收率低，所以平稳后继续调节PH到第二阶段，此时达到纳他霉素的等电点，溶解度最小，收率高。如果直接调到等电点，则纳他霉素快速结晶，得到的晶体粒度不均一且包裹杂质。第二阶段继续缓慢而有控制地调节pH值至6 7的目的在于使纳他霉素的析出主要发生在已形成的晶核的表面，由此得到的纳他霉素片状晶体颗粒较大、粒度分布较均勻，纯度较高。较之现有技术而言，本专利技术的优点在于本专利技术以纳他霉素培养物的菌丝体为对象，通过控制提取液中甲醇与水的比例以及纳他霉素的结晶过程，从而可制得均一的纳他霉素片状晶体，降低后续晶体过滤与干燥的难度，缩短晶体的过滤和干燥时间，便于工业化的生产控制。附图说明图1是实施例1所得片状晶体的显微照相晶体形貌图。图2是实施例4所得晶体的显微照相晶体形貌图。图3是对比实验组的组9所得晶体的显微照相晶体形貌图。具体实施例方式下面结合具体实施方式、实施例及说明书附图对本
技术实现思路
进行详细说明一具体实施例方式本专利技术具体实施方式提供了一种，其特征在于它包括以下步骤a、取纳他霉素菌丝体加入甲醇与水的混合液中；所述的甲醇与水的混合液中，甲醇与水的体积比为60-90 40-10 ；每IL甲醇与水的混合液添加90_110g纳他霉素菌丝体；本步骤中所述的纳他霉素菌丝体为纳他霉素发酵液通过液固分离技术得到的湿菌丝体或干燥菌丝体，优选水分含量的干燥菌丝体。当然，也可采用湿菌丝体，如果湿菌丝体的含水量较高，则最好预先测定一下湿菌丝体的水分含量，这样在制备甲醇与水的混合液时可适当相应减少水的比例。所述的甲醇与水的体积比优选为73 27，每IL甲醇与水的混合液优选添加IOOg纳他霉素菌丝体。b、用碱性物质均勻搅拌调节步骤a获得的溶液的pH值至10-12，使纳他霉素溶解于混合溶液中；本步骤所述的碱性物质优选为氢氧化钠或氨水等，为工业上常用的调节溶液至碱性的物质。C、将步骤b获得的溶液进行液固分离，收集滤液得到纳他霉素的提取液；本步骤所述的液固分离方法可采用在抗生素提取过程中常用的液固分离方法，如板框过滤、重力离心、抽滤、错流过滤等，其目的在于去除菌渣，收集滤液以得到纳他霉素的提取液。d、浓缩步骤c获得的纳他霉素的提取液至纳他霉素含量在18 ^mg/ml之间，并絮凝去除在此过程中析出的不溶物，得到纳他霉素精提取液；本步骤所述的浓缩方法可采用常用的真空浓缩法。e、分两阶段酸化步骤d获得的纳他霉素精提取液第一阶段一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的PH 值逐步降低到8-9(最优值依据纳他霉素的浓度而定，如当纳他霉素的浓度为22mg/ml时， PH值是8. 6)，在pH值不再回升的情况下，再搅拌1小时以上(优选1小时)，使纳他霉素的成核与晶体生长达到平衡；第二阶段继续一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的pH值逐步降低到6-7，在pH值不再回升的情况下，再搅拌3小时以上(优选3-5小时)， 得到片状的纳他霉素晶体的结晶液。本步骤的酸化调节过程使用的酸为工业上常用的酸，如盐酸、硫酸等。本步骤中搅拌为常规的勻速搅拌方法，如磁力搅拌、机械搅拌等，搅拌的目的一方面在于使结晶液混合均勻，避免局部PH过低引起纳他霉素爆发成核，另一方面可以使纳他霉素的晶体充分悬浮于结晶液中，避免晶体粘结包裹杂质。f、将步骤e获得的纳他霉素晶体的结晶液进行液固分离，然后真空干燥得到片状纳他霉素晶体。本步骤中所述的结晶液的液固分离选用任意常规的固液分离方法皆可，如抽滤、 离心过滤等。本步骤经液固分离得到的纳他霉素晶体，可用50%乙醇-水(V V)溶液洗涤3次，于50°C、-0. 09MI^条件下真空干燥至恒重，即可得到白色微带淡黄色的片状纳他霉素晶体，纯度约90%。二、具体实施例实施例1取纳他霉素的干燥菌丝体100g，其中纳他霉素含量为11. 2% (w/w)，加入IL甲醇与水的混合液(甲醇与水的体积比为75 25)，搅拌使菌丝体充分悬浮。用lOmol/L的NaOH 调节本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种纳他霉素片状晶体的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：ａ、取纳他霉素菌丝体加入甲醇与水的混合液中；所述的甲醇与水的混合液中，甲醇与水的体积比为６０－９０∶４０－１０；每１Ｌ甲醇与水的混合液添加９０－１１０ｇ纳他霉素菌丝体；ｂ、用碱性物质均匀搅拌调节步骤ａ获得的溶液的ｐＨ值至１０－１２；ｃ、将步骤ｂ获得的溶液进行液固分离，收集滤液得到纳他霉素的提取液；ｄ、浓缩步骤ｃ获得的纳他霉素的提取液至纳他霉素含量在１８～２６ｍｇ／ｍｌ之间，并絮凝去除在此过程中析出的不溶物，得到纳他霉素精提取液；ｅ、分两阶段酸化步骤ｄ获得的纳他霉素精提取液：第一阶段一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的ｐＨ值逐步降低到８－９，在ｐＨ值不再回升的情况下，再搅拌１小时以上；第二阶段继续一边搅拌纳他霉素精提取液一边缓慢滴加酸，使纳他霉素精提取液的ｐＨ值逐步降低到６－７，在ｐＨ值不再回升的情况下，再搅拌３小时以上，得到片状的纳他霉素晶体的结晶液；ｆ、将步骤ｅ获得的纳他霉素晶体的结晶液进行液固分离，然后真空干燥得到片状纳他霉素晶体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊辉，姜献民，赖潭平，
申请(专利权)人：浦城绿康生化有限公司，
类型：发明
国别省市：35