胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，其包括有样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫由底板的一侧依次向所述底板的另一侧粘贴在所述底板上，其结合垫包被有金标抗体a层和金标抗体b层；硝酸纤维素包被膜上设置有检测线和质控线，检测线包被有Ro52抗原蛋白层，质控线包被有金标抗体c层。本实用新型专利技术采用间接免疫测定法，引入Ro52抗原蛋白，对结合垫和样品垫进行了工艺优化，来实现抗Ro52抗体的高灵敏度、高特异、高准确性的检测性能，为辅助诊断干燥综合症提供参考依据。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗 Ro52抗体的试纸。
技术介绍
SS-A抗原是一种小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质(分子量分别为52和60kDa)组成，抗-SS-A 60kDa蛋白的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗SS-A 52kDa的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其它抗体发生交叉反应。在鉴别诊断中，抗SSA/Ro抗体对干燥综合症和SLE具有极高的特异性。尤其是抗 Ro抗体与60KD Ro蛋白(Ro60)和52KD Ro蛋白(Ro52)的免疫反应，分别用于辨别SLE和原发性干燥综合症。334/1 0抗体见于85(%-95(%的干燥综合症病人。因此，此抗体是鉴别此病的主要指标。抗Ro52抗体与抗Ro60抗体相比，对原发性干燥综合症具有更高的特异性。在超过60%的原发性干燥综合症病人中可单独检测到Ro52自身抗体，而只有5%的 SLE病人可单独检测到此抗体。本技术采用大肠杆菌原核表达人源基因工程方法Ro52，即为本产品的检测抗原。目前实验室常用的检测抗R052抗体的方法主要有酶联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、间接免疫焚光法(indirect immunoflurescence, IFF)、免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)、线性免疫分析法(Line immuno assay, LIA)等。免疫印迹法虽综合了 SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，且试剂具有较强的毒性和污染性。间接免疫荧光法可作半定量测定，但需有荧光显微镜观察结果，结果判定的客观性不足，标准化困难，技术程序比较复杂，也不适合高通量标本的检测。线性免疫分析法主要用于疾病大类的筛查，针对性相对较差，同时也不适合高通量样本的检测。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，且易受温度和孵育条件的影响，在专业实验室里进行操作，给实验带来诸多不便。目前市场上商品化抗Ro52抗体检测试剂盒主要为酶联免疫吸附法，需多次加样和洗涤步骤，完成整个实验过程需三小时左右，需酶标仪，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，易受人员和场地的限制，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。胶体金层析法应用到抗Ro52抗体的检测中。胶体金免疫层析法 (gold-immunochromatography assay, GICA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，以条状纤维层析材料为固相，通过毛细效应使样品溶液在层析条上泳动，使样品中的待3测物与结合垫上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生免疫反应，并与条状纤维层析材料上的抗原(或抗体)发生免疫反应而被截留，进而形成肉眼可见的紫红色条带，得到直观的实验结果，达到快速检测的目的(Sikowicz G et al. One-step chromatographic immunoassay for qualitative determination of choricogonadotropin in urine. Clin Chem. 1990(36) 1579-1586.)。使用时只将样品加样到样品垫上，数分钟就根据检测线上紫红色条带出现情况来判断阴阳性结果。与其他检测方法相比，检测时间短，只需要5 10 分钟，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便等优势。在自身免疫性疾病方面，目前国外市场上出现了一些检测自身免疫疾病的试纸条产品，但抗Ro52抗体的胶体金免疫试纸在国内外市场上仍没有问世。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是为了克服以上方法学的不足，将胶体金层析法应用到抗Ro52抗体的检测中，同时首次将Ro52抗原蛋白应用到胶体金层析法中，采用间接法来实现血液中的抗R052抗体检测，实现高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，快速筛选出抗R052抗体的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断干燥综合症。本技术所要解决的技术问题在于提供一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸。本技术所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现一种胶体金层析法抗Ro52抗体检测试纸，包括有样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素包被膜、吸水垫由底板的一侧依次向所述底板的另一侧相互搭接粘贴在所述底板上，其特症在于所述的结合垫包被有金标抗体a层和金标抗体b层；所述的硝酸纤维素包被膜上设置有检测线和质控线，所述的检测线包被有Ro52 抗原蛋白层，所述的质控线包被有金标抗体c层。进一步，所述的金标抗体a层中的抗体A为抗人IgG单克隆抗体、抗人IgG多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)中的一种或多种。所述的抗人IgG多克隆抗体为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源中的一种。所述的抗人IgG单克隆抗体为羊源或兔源中的一种。 所述金标抗体a层中的抗体A优选为葡萄球菌A蛋白。所述的金标抗体b层中的抗体B和金标抗体c中的抗体C同时或不同时为单克隆抗体或多克隆抗体中的一种，其中金标抗体b中的抗体B和金标抗体c中的抗体C可发生特异性结合形成免疫复合物。所述的多克隆抗体为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源中的一种，单克隆抗体为鼠源或兔源中的一种。所述的金标抗体b中的抗体B优选为兔IgG，相应地金标抗体c中的抗体C优选为羊抗兔IgG0所述的检测线上包被的Ro52抗原蛋白层为通过原核表达克隆化基因获得的Ro52 抗原蛋白层。所述Ro52抗原蛋白是通过大肠杆菌原核表达的克隆化基因所获得的重组蛋白。所述样品垫的样本来自人血清、血浆、全血样本。根据本技术应用的单克隆抗体可通过由Kohler等(Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature,1975(256) 495-497)首先描述的杂交瘤法进行制备，或者可通过重组DNA法进行制备(见美国专禾Ij 4816567)。"单克隆抗体，，由 Clackson 等(Making antibody fragments using phage display libraries. Nature,1991 :624-628)禾口 Marks 等(By-passing immunization Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage. Journal of Molecular Biology, 1991 :581-597)所述技术从噬菌体抗体文库中分离。根据本技术应用的多克隆抗体可通过陈学清等(免疫学常用实验方法.， 2000 :15-26)通过免疫动物来制备。本技术的SPAlrotein G通过原核表达克隆化重组基因，由J.萨姆布鲁克等 (分子克隆实验指南.，2002:12^-1232)描述的大肠杆菌原核表达克隆化基本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．胶体金层析法抗Ｒｏ５２抗体检测试纸，包括有样品垫（１）、结合垫（２）、硝酸纤维素包被膜（３）、吸水垫（６），所述样品垫（１）、结合垫（２）、硝酸纤维素包被膜（３）、吸水垫（６）由底板（７）的一侧依次向所述底板（７）的另一侧相互搭接粘贴在所述底板（７）上，其特征在于：所述的结合垫（２）包被有金标抗体ａ层和金标抗体ｂ层；所述的硝酸纤维素包被膜（３）上设置有检测线（４）和质控线（５），所述的检测线（４）包被有Ｒｏ５２抗原蛋白层，所述的质控线（５）包被有金标抗体ｃ层。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩永俊，高成秀，张玥，葛文斌，孙宏彬，钱杰，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：实用新型
国别省市：31