一种从葡萄皮中分离制备五种高纯度花色苷单体的方法，涉及天然色素的制备，属于食品安全和食品分析化学领域。本发明专利技术为先对赤霞珠葡萄皮进行花色苷浸提，得到花色苷的粗提取物。再用XAD-7HP大孔树脂对粗提取物进行纯化，除去其中大部分的糖类、无机盐、粘液质等吸潮成分。将初步纯化后的花色苷提取物进行制备液相分离，得到花色苷的高纯单体。在花色苷制备的提取、纯化、分离阶段溶剂仅使用乙醇和酸，环境友好，方法简便易行。纯化后得到的五种花色苷单体分别为花翠素葡萄糖苷、3’-甲基花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素乙酰化葡萄糖苷、二甲花翠素反式香豆酰化葡萄糖苷，纯度依次为：99.9%、99.9%、99.9%、91.7%、95.5%。
【技术实现步骤摘要】
，涉及天然色素的制备， 属于食品安全和食品分析化学领域。
技术介绍
花色苷是一种对人体有益的天然色素，可做为食用色素使用，在食品中的应用广泛。花色苷有助于人体抵御炎症，抑制脂质过氧化作用，同时还能促进血液循环。在葡萄中天然花色苷主要存在于果皮上，经酿造过程赋予了葡萄酒亮丽的红色。葡萄是世界年产量最大的水果之一，大部分用于了葡萄酒的酿造。在欧亚种葡萄中，花翠素葡萄糖苷(Delphinidin-3-glucoside，Dp3_glu)、3’甲基花翠素葡萄糖苷 (Petunidin-3-glucoside, Pt3_glu)、二甲花翠素葡萄糖苷(Malvidin-3-glucoside， Mv3-glu)及其乙酷化(Malvidin-3-acetylglucoside, Mv3_acet_glu)禾口香豆酷化的花色 ^f (Malvidin-3coumarylglucoside, Mv3-coum-glu) 禾中ifii^^^^EfefS 禾中^Efe 苷结构如下所示。权利要求1.一种花色苷的提取方法，其特征在于以葡萄皮为原料依次进行花色苷的提取、纯化、分离；从葡萄皮中分离制备五种高纯度花色苷单体为花翠素葡萄糖苷Dp3-glu、3’甲基花翠素葡萄糖苷Pt3-glu、二甲花翠素葡萄糖苷Mv3-glu、二甲花翠素乙酰化葡萄糖苷 Mv3-aCet-glu、二甲花翠素反式香豆酰化葡萄糖苷Mv3-COum-glu ；其步骤为(1)提取采用分析纯95%乙醇，V/V，浸提葡萄皮，得到花色苷的提取液，离心后真空旋蒸除乙醇，然后真空冷冻干燥得到花色苷的粗提取物；(2)大孔树脂纯化将花色苷的粗提取物用稀释到50%的分析纯乙醇溶解，V/V，离心去沉淀，将上清液加样于XAD-7HP大孔树脂，用稀释到50%的分析纯乙醇，V/V，lBV/h流速洗脱，收集颜色明显的流出液，真空冷冻干燥后得到初步纯化的提取物；(3)制备液相分离将初步纯化的提取物用稀释到15%的分析纯乙醇溶解至饱和，V/ V，SOOOr离心6min，上清液用于制备液相分离，经程序1分离，按照时间顺序收集得到了 Dp3-glu、Pt3-glu、Mv3-glu、Mv3-acet-glu、Mv3-coum-glu 五种花色苷单体；对首次分离后纯度较低的3’甲基花翠素葡萄糖苷Pt3-glu及二甲花翠素葡萄糖苷Mv3-glu再用程序2 分别进行二次分离获得纯度高的Pt3-glu及Mv3-glu ；分离后 Dp3-glu、Pt3-glu、Mv3-glu、Mv3_acet_glu、Mv3_coum-glu 的纯度分别达 99. 9%, 99. 9%, 99. 9%, 91. 7%, 95. 5% ；所述程序1中的流动相分别为A相色谱纯，V/V,2%甲酸的乙醇，B相2%甲酸的纯水；程序 1 采用梯度洗脱:0-20min :15%_40%A，用 B 相补足 100% ；20_28min :40%_80%A，用 B 相补足 100% ；28-30min :80%_15%A，用 B 相补足 100% ；30_35min :15%A，用 B 相补足 100% ；程序2中的流动相分别为C相乙醇/纯水/甲酸=60/40/3，V/V/V，D相纯水/甲酸=100/3，V/V ；程序 2 采用梯度洗脱:0-15min :40%_45%C，用 D 相补足 100% ；15_30min 45%-60%C，用 D 相补足 100% ；30-35min :60%_40%C，用 D 相补足 100%。2.根据权利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述的花色苷提取所用的葡萄皮是人工剥离的将新鲜酿酒葡萄在_20°C冷冻，置冷冻的葡萄于室温下，待表皮化冻而果肉未解冻时将葡萄皮剥离。3.根据权利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述的提取，花色苷的提取条件为浸提液95%分析纯乙醇中添加1%盐酸，V/V，30°C，浸提过夜。4.根据权利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述的大孔树脂纯化，选用XAD-7HP大孔树脂，纯化条件为0. 5BV/h流速加样，含0. 1%盐酸的50%乙醇，V/V， lBV/h流速洗脱。5.根据权利要求1所述花色苷的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述的制备液相分离，使用了 bridge Prep C18, 250mmX 19mm i. d.，10 μ m，制备分离柱，流动相为 99. 9% 乙醇、色谱纯甲酸和超纯水，流速为8mL/min。全文摘要，涉及天然色素的制备，属于食品安全和食品分析化学领域。本专利技术为先对赤霞珠葡萄皮进行花色苷浸提，得到花色苷的粗提取物。再用XAD-7HP大孔树脂对粗提取物进行纯化，除去其中大部分的糖类、无机盐、粘液质等吸潮成分。将初步纯化后的花色苷提取物进行制备液相分离，得到花色苷的高纯单体。在花色苷制备的提取、纯化、分离阶段溶剂仅使用乙醇和酸，环境友好，方法简便易行。纯化后得到的五种花色苷单体分别为花翠素葡萄糖苷、3’-甲基花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素葡萄糖苷、二甲花翠素乙酰化葡萄糖苷、二甲花翠素反式香豆酰化葡萄糖苷，纯度依次为99.9%、99.9%、99.9%、91.7%、95.5%。文档编号C07H1/08GK102229633SQ20111014396公开日2011年11月2日 申请日期2011年5月31日 优先权日2011年5月31日专利技术者徐岩, 韩富亮 申请人:江南大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种花色苷的提取方法，其特征在于以葡萄皮为原料依次进行花色苷的提取、纯化、分离；从葡萄皮中分离制备五种高纯度花色苷单体为：花翠素葡萄糖苷Ｄｐ３－ｇｌｕ、３’甲基花翠素葡萄糖苷Ｐｔ３－ｇｌｕ、二甲花翠素葡萄糖苷Ｍｖ３－ｇｌｕ、二甲花翠素乙酰化葡萄糖苷Ｍｖ３－ａｃｅｔ－ｇｌｕ、二甲花翠素反式香豆酰化葡萄糖苷Ｍｖ３－ｃｏｕｍ－ｇｌｕ；其步骤为：（１）提取：采用分析纯９５％乙醇，Ｖ／Ｖ，浸提葡萄皮，得到花色苷的提取液，离心后真空旋蒸除乙醇，然后真空冷冻干燥得到花色苷的粗提取物；（２）大孔树脂纯化：将花色苷的粗提取物用稀释到５０％的分析纯乙醇溶解，Ｖ／Ｖ，离心去沉淀，将上清液加样于ＸＡＤ－７ＨＰ大孔树脂，用稀释到５０％的分析纯乙醇，Ｖ／Ｖ，１ＢＶ／ｈ流速洗脱，收集颜色明显的流出液，真空冷冻干燥后得到初步纯化的提取物；（３）制备液相分离：将初步纯化的提取物用稀释到１５％的分析纯乙醇溶解至饱和，Ｖ／Ｖ， ８０００ｒ离心６ｍｉｎ，上清液用于制备液相分离，经程序１分离，按照时间顺序收集得到了Ｄｐ３－ｇｌｕ、Ｐｔ３－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ａｃｅｔ－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ｃｏｕｍ－ｇｌｕ五种花色苷单体；对首次分离后纯度较低的３’甲基花翠素葡萄糖苷Ｐｔ３－ｇｌｕ及二甲花翠素葡萄糖苷Ｍｖ３－ｇｌｕ再用程序２分别进行二次分离获得纯度高的Ｐｔ３－ｇｌｕ及Ｍｖ３－ｇｌｕ；分离后Ｄｐ３－ｇｌｕ、Ｐｔ３－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ａｃｅｔ－ｇｌｕ、Ｍｖ３－ｃｏｕｍ－ｇｌｕ的纯度分别达９９．９％、９９．９％、９９．９％、９１．７％、９５．５％；所述程序１中的流动相分别为Ａ 相：色谱纯，Ｖ／Ｖ，２％甲酸的乙醇，Ｂ相：２％甲酸的纯水；程序１采用梯度洗脱：０－２０ｍｉｎ：１５％－４０％Ａ，用Ｂ相补足１００％；２０－２８ｍｉｎ：４０％－８０％Ａ，用Ｂ相补足１００％；２８－３０ｍｉｎ：８０％－１５％Ａ，用Ｂ相补足１００％；３０－３５ｍｉｎ：１５％Ａ，用Ｂ相补足１００％；程序２中的流动相分别为Ｃ 相：乙醇／纯水／甲酸＝６０／４０／３，Ｖ／Ｖ／Ｖ，Ｄ相：纯水／甲酸＝１００／３，Ｖ／Ｖ；程序２采用梯度洗脱：０－１５ｍｉｎ：４０％－４５％Ｃ，用Ｄ相补足１００％；１５－３０ｍｉｎ：４５％－６０％Ｃ，用Ｄ相补足１００％；３０－３５ｍｉｎ：６０％－４０％Ｃ，用Ｄ相补足１００％。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩富亮，徐岩，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32
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