净化血液及血液制品的方法技术

一种净化血液及血液制品的方法，其以吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒作为反应和分离的固相载体，按每１升待处理血液或血液制品中加入５～５０ｍｇ吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的比例加入这种磁球并混合均匀，则病毒被吸附于吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒上，用波长６００～８００ｎｍ的光照射，激活键合在吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料，所产生单线态氧及氢氧自由基将病毒杀灭，用外加磁场将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒与被杀灭病毒的血液或血液制品的混合物进行分离，得到净化血液或血液制品。本发明专利技术解决了背景技术中无法将灭活后的病毒从血液或血液制品中完全去除的技术问题。本发明专利技术特异性强，无染料残留，操作简便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，具体涉及一种用吩噻嗪类染料修 饰的磁性微粒杀灭并去除血液及血液制品中病毒的方法。技术背景输血是治病救人的有效治疗手段，但输血也伴随着艾滋病、乙型肝炎以及丙型肝炎等病毒性疾病传播的危险。据统计，目前全世界被艾滋病毒(HIV)感染的人 数大于三千万，被乙肝病毒(HBV)感染的人数大约3.7亿，被丙肝病毒(HCV) 感染的人数大约1.8亿，而被HIV感染总数的5-10%源于不安全的输血！ 目前，血液及血液制品中所含病毒的处理主要有灭活和去除两种形式。 灭活方法中巴斯德消毒法，对一些耐热病毒的灭活效果不佳。有机溶剂结合 表面活性剂(S/D)法，对非脂包膜病毒无效，且工艺复杂，成本高。干热灭活法， 虽安全有效，但仅适用于冻干制剂的病毒灭活。光化学灭活法，是目前被视为颇有 前景的血液净化的热点研究方向，不仅可以灭活血浆中游离的病毒，而且可以灭活 细胞内整合的病毒，故可用于全血、血浆及血细胞等各种血液成分及血液制品的消 毒。己使用的化学光敏剂主要有血卟啉衍生物、补骨脂素衍生物及吩噻嗪类染料亚 甲蓝等。亚甲蓝光化学法具有效率高、成本低、起效快、操作简单的优点，灭活后的血 桨副作用小，血浆蛋白的免疫原性无变异，主要用于血桨中HIV、 HBV及HCV的 灭活；且亚甲蓝是FDA批准的临床用药，毒副作用较小。对亚甲蓝光化学法作用 机理的研究表明，亚甲蓝既可与病毒脂包膜上的脂质和蛋白质结合，又可与核酸， 尤其是富含GC碱基区域结合，经一定波长的光照后，光敏剂形成单态氧和氢氧自 由基，破坏了病毒脂包膜，使得鸟嘌呤发生氧化，核酸发生断裂，从而可阻止病毒 的复制。该方法目前主要用于新鲜冰冻血浆中病毒的净化，而其它的一些对核酸具 有更高亲和力并可杀灭细胞内病毒的亚甲蓝衍生物已用于全血及红细胞悬液中病毒 的灭活研究。1993年起在欧洲一些国家的红十字会输血中心开始使用该方法灭活新 鲜冷冻血浆中的病毒，至今未发现明显的负面反应。我国近年来也将采用该法灭活 的血浆用于临床治疗，取得了良好的效果。但该法主要的缺点是亚甲蓝残留在血 液中，导致血液颜色变化，会使受血者产生心理抗拒。尤其是残留的亚甲蓝在人体 内会积累，存在潜在的致突变的危险。虽然可以用吸附剂法去除亚甲蓝，但去除率通常只能达到85%左右，且该过程会影响血液制品中的正常成分。上述儿种灭活病毒的方法均无法将灭活后的病毒从血液或血液制品中去除，而且临床使用表明，没有一种病毒灭活方法能保证血液制品绝对无传播病毒的危险。 比较成熟的病毒去除方法中色谱法耗时太长，且去除病毒不彻底。膜法易损伤细胞成分。免疫吸附柱法处于研发之中，可用于血液制品中病毒的彻底去除，但该法特异性太强，故实际应用范围很窄。申请号为200410026221.2的中国专利，公开了 一种将抗体固定于磁性微粒表面， 利用抗原抗体间的特异性结合及磁性微粒的磁性分离性能去除血液中病毒的方法。 但由于该法中抗体稳定性较差，产品难以长期保存，故实际应用受到很大限制。综上所述，现存的血液净化方法，有的只能杀灭病毒而无法去除被杀灭的病毒， 致使异源蛋白/核酸虽无活性但依然存在于血液或血液制品中，而这种存在本身就有 潜在的危险；有的虽能去除病毒，但无法确保病毒被完全去除。磁性微粒是由有机或无机基质与磁性金属、金属氧化物等磁性超细粉末复合形 成的纳米或微米级胶态颗粒。该材料的超顺磁性使其在胶体溶液中具有稳定性，其 磁响应性可保证在外加磁场中颗粒与悬浮介质的分离，在撤去外磁场时微粒本身会 重新悬浮分散而不聚集，即不具有磁记忆性。更有意义的是，通过高分子或有机试 剂与磁性颗粒的复合，可在颗粒表面引入氨基、羧基、巯基、羟基等功能基团，通 过共价作用将酶、抗体、细胞、核酸及寡核苷酸等生物分子固定在表面，可应用于 细胞分选、酶的固定化、免疫检测、药物载体及核酸的纯化与分离、肿瘤的靶向治 疗研究等生物、医学领域。磁性微粒的制备有球磨法、乳液聚合法、液相干燥法、溶胶-凝胶法、均匀沉淀 法、气溶胶法、反相胶束法、无定型晶化法等许多方法，国外已有相关上市产品， 1986年挪威的Dynal公司率先实现了该类产品的商业化，所提供的DynabeadBeads M-280和M-450已广泛用于细胞分选、蛋白质及核酸分离等领域；德国Miltenyi Biotech公司利用多糖包覆的磁性微粒偶联抗体己应用于细胞分选方面；Boehringer Mannheim公司的mRNA分离试剂盒也是特色产品；美国的FeRx公司、PE公司、 Perseptive公司、瑞典的Pharmacia公司、法国的Estapor、德国的Micromod以及加 拿大的Biochem Immunosystem等公司，都已将相关的产品商业化。产品所涉及的 高分子种类、特性及其与磁性内芯组成等各种各样，应用领域也越来越广。目前，国内在该领域大多处于研究阶段。中科院成都有机所较早利用单体聚合 法进行了磁性聚苯乙烯微粒的合成，并用于固定化中性蛋白酶的研究。南开大学高 分子化学所研究了磁性葡聚糖毫微粒的合成，并探讨了固定化酶的条件。中国专利CN03124061.5公开的一种核/壳型超顺磁性复合微粒及其制备方法与应用，中国专 利CN03153486.4公开的一种组装型磁性复合微粒及其制备方法与应用，中国专利 CN02139365.6公开的一种磁性荧光微球及其制备方法和采用该磁性荧光微球进行 生物分子检测的方法，中国专利CN03134319.8公开的一种磁性微球介导的微流体 分析系统及其检测方法，均与磁性微粒的制备与应用相关。《中国药师》(陶利军， 孙永海，张宏，刘建行9: 24-26, 2006)最近有文章报道了一种将亚甲蓝包加在磁 性明胶微粒中以制备磁性药物缓释剂的方法，仅仅对产品的性能进行了评价。对吩 噻嗪类染料修饰的磁性微粒用于灭活及去除血液及血液制品中病毒的方法及装置则 未报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，其解决了
技术介绍
中 无法将灭活后的病毒从血液或血液制品中完全去除的技术问题。本专利技术的技术解决方案如下一种，其实现步骤包括(1) 以吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒作为反应和分离的固相载体，将吩噻嗪类 染料修饰的磁性微粒加入待处理血液或血液制品中；比例为每1升待处理血液或血液制品中加入5 50mg吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒；(2) 将待处理血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒通过温和振荡混合均匀，吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料分子与血液或血液制品中的病毒作用，则病毒被吸附于吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒上；(3) 用波长600 800nm的光照射血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性 微粒的混合物，激活键合在吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料，所 产生单线态氧及氢氧自由基将血液或血液制品中的病毒杀灭；(4) 用外加磁场作用于血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的混合 物，作用时间10 30分钟，则将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒与被杀灭病毒的血液 或血液制品的混合物进行分离，得到净化血液或血液制品。上述用光照射杀灭血液或血液制品中的病毒的光波长可为600 700nm;光照时 间一般为5 30分钟；光照温度一般可为4 30°C;用外加磁场作用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种净化血液及血液制品的方法，其实现步骤包括：　　　　（１）以吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒作为反应和分离的固相载体，将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒加入待处理血液或血液制品中；比例为每１升待处理血液或血液制品中加入５～５０ｍｇ吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒；　　　　（２）将待处理血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒通过温和振荡混合均匀，吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料分子与血液或血液制品中的病毒作用，病毒被吸附于吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒上；　　　　（３）用波长６００～８００ｎｍ的光照射血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的混合物，激活键合在吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料，所产生单线态氧及氢氧自由基将血液或血液制品中的病毒杀灭；　　　　（４）用外加磁场作用于血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的混合物，作用时间１０～３０分钟，则将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒与被杀灭病毒的血液或血液制品的混合物进行分离，得到净化血液或血液制品。

【技术特征摘要】
1. 一种净化血液及血液制品的方法，其实现步骤包括(1)以吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒作为反应和分离的固相载体，将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒加入待处理血液或血液制品中；比例为每1升待处理血液或血液制品中加入5～50mg吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒；(2)将待处理血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒通过温和振荡混合均匀，吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料分子与血液或血液制品中的病毒作用，病毒被吸附于吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒上；(3)用波长600～800nm的光照射血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的混合物，激活键合在吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒表面的吩噻嗪类染料，所产生单线态氧及氢氧自由基将血液或血液制品中的病毒杀灭；(4)用外加磁场作用于血液或血液制品与吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒的混合物，作用时间10～30分钟，则将吩噻嗪类染料修饰的磁性微粒与被杀灭病毒的血液或血液制品的混合物进行分离，得到净化血液或血液制品。2. 根据权利要求1所述的净化血液及血液制品的方法，其特征在于所述用光 照射杀灭血液或血液制品中的病毒的光波长为600 700nm...

【专利技术属性】
技术研发人员：高文运，陈超，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]