本发明专利技术公开了一种荧光素标记物及基于荧光偏振的有机磷农药均相多残留免疫检测方法。本发明专利技术通过将待测样品、荧光示踪物和有机磷农药多特异性抗体混合，荧光示踪物和有机磷农药多特异性抗体结合后产生可检测的荧光偏振值，测量混合物的荧光偏振值，通过一系列已知浓度的有机磷农药标准物建立的标准曲线，利用标准曲线计算待测样品中有机磷农药的浓度。本发明专利技术方法样品前处理简单，反应过程中无需洗涤分离，检测时间低于3～5min，操作方便；可以同时测定20种有机磷农药，灵敏度在0.003～1.0mg/kg之间；采用96微孔板可以同时测定42个样品（每个样品2次平行），是一种快速、简便、高灵敏度的有机磷农药高通量检测方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全检测
，涉及一种。
技术介绍
有机磷农药(organophosphorus pesticides)是一类广谱杀虫剂，在有机氯农药的使用被禁止后，有机磷农药成为我国使用量最大的农药，约占农药杀虫剂总量的70%。由于有机磷农药对人类及动物具有潜在的毒性，其大量的使用已经造成我国蔬菜、食品及环境水等的残留严重超标，不仅对人体产生直接毒害，而且对生态环境造成污染，由饮食品中农药残留量过高而引发的食物中毒事故频繁发生。因此，加强对有机磷农药的监测十分必要。目前针对有机磷农药的检测主要采用仪器检测的方法和基于胆碱酯酶抑制的酶法。仪器方法如气相色谱(GC)、气-质联用(GC-MS或GC-MS/MS)、高效液相色谱(HPLC)、 液_质联用(HPLC-MS或HPLC-MS/MS)等虽然检测灵敏度高，准确度好，但是这些仪器方法价格昂贵，且方法操作复杂，需受过专门训练的人员才能操作，而且存在着适用范围窄、设备昂贵、成本高等问题。基于酶抑制法的产品如酶法速测卡、酶法速测试剂等广泛应用于我国蔬菜水果中有机磷农药的快速检测，不过由于该种方法存在灵敏度较差(0. 1 IOmg/ kg)以及准确度不高(一般低于80%)等不足，已经不能满足目前我国高标准的检测要求。免疫检测方法以其灵敏、特异、快速、简便的优点在药物残留检测领域已被广泛应用，比起理化检验方法有很多优势。目前，非均相的酶联免疫吸附测定法(ELISA)以其高效、 低成本和高灵敏的优势应用的最广，目前已经有许多关于有机磷农药ELISA方法的研究报道，国外也已经有关于有机磷农药商业化的ELISA试剂盒。但是该方法每一步的反应都需要分离反应结合物和未反应的游离试剂，并且需要多步的反应、洗涤，比较非常繁琐。因此， 有必要发展一种快速、简便的高通量均相检测方法。均相的荧光偏振免疫方法，只需一步反应，将待测样品、示踪物和特异性的抗体混合，无需分离洗涤操作，几分钟就可以实现定量检测的目的，非常适合高通量，自动化的免疫检测。虽然目前已有关于有机磷农药的荧光偏振免疫检测方法的零星报道(Kolosova 等，J. Agric. Food Chem. 2003, 51, 1107-1114 ;Tang等，J. Immunoassay Immunochem. 2008, 29, 356-369.)，但这些方法都是针对单一有机磷农药对象的荧光偏振方法，且灵敏度比较差。目前针对一次可以同时检测多种有机磷农药对象的多残留荧光偏振免疫检测方法，国内外尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有有机磷农药残留严重、多种对象同时残留以及非均相免疫检测技术中操作复杂、耗时等不足，提供一种荧光标记物，其可应用于基于荧光偏振的有机磷农药均相多残留免疫检测方面。本专利技术另一目的在于提供所述荧光标记物的制备方法。本专利技术还有一目的在于提供基于荧光偏振的有机磷农药均相多残留免疫检测方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案予以实现提供一种应用于有机磷农药均相多残留免疫检测的荧光素标记物，具有式(I )、(11)或 (III)所示结构权利要求1. 一种应用于有机磷农药均相多残留免疫检测的荧光素标记物，其特征在于具有式 (I )、(II)或(III)所示结构2.—种权利要求1所述荧光标记物的制备方法，其特征在于是采用异硫氰酸荧光素与有机磷农药半抗原偶联得到，包括以下步骤(1)制备乙二胺衍生化的异硫氰酸荧光素；(2)活化有机磷农药半抗原将有机磷农药半抗原、N,N’ - 二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀亚酰胺溶于N，N’ 二甲基甲酰胺中，反应后去除沉淀得活化的半抗原上清液；(3)在步骤(2)的半抗原上清液中加入乙二胺衍生化的异硫氰酸荧光素，反应产物用制备型薄层层析板分离纯化即得荧光标记物。3.权利要求1所述荧光素标记物的应用，其特征在于应用于对环境水、水果或蔬菜的有机磷农药均相多残留免疫检测方面。4.一种基于荧光偏振原理的有机磷农药均相多残留免疫检测方法，其特征在于将有机磷农药抗体和权利要求1所述荧光素标记物加入待测样品形成混合物，测定所述混合物的荧光偏振值，根据有机磷农药标准品建立的标准曲线计算待测样品中有机磷农药的浓度；所述有机磷农药为对硫磷、甲基对硫磷、蝇毒磷、三唑磷、辛硫磷、喹硫磷、除线磷、伏杀硫磷、乙基谷硫磷、甲拌磷、乙拌磷、异氯磷、杀螟腈、乙基溴硫磷、毒死蜱、乙硫磷、二嗪农、 氯唑磷、治螟磷和/或杀螟硫磷；所述有机磷农药抗体为基于半抗原制备的多克隆抗体、单克隆抗体或基因工程抗体。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于所述荧光素标记物为权利要求1所述具有结构式(II)的标记物。6.根据权利要求4所述的基于荧光偏振原理的有机磷农药均相多残留免疫检测方法， 其特征在于所述方法采用96孔板。7.一种权利要求4、5或6所述检测方法的应用，其特征在于应用于对环境水、水果或蔬菜的有机磷农药均相多残留免疫检测方面。全文摘要本专利技术公开了一种。本专利技术通过将待测样品、荧光示踪物和有机磷农药多特异性抗体混合，荧光示踪物和有机磷农药多特异性抗体结合后产生可检测的荧光偏振值，测量混合物的荧光偏振值，通过一系列已知浓度的有机磷农药标准物建立的标准曲线，利用标准曲线计算待测样品中有机磷农药的浓度。本专利技术方法样品前处理简单，反应过程中无需洗涤分离，检测时间低于3～5min，操作方便；可以同时测定20种有机磷农药，灵敏度在0.003～1.0mg/kg之间；采用96微孔板可以同时测定42个样品(每个样品2次平行)，是一种快速、简便、高灵敏度的有机磷农药高通量检测方法。文档编号C07F9/18GK102206485SQ20111009085公开日2011年10月5日 申请日期2011年4月12日 优先权日2011年4月12日专利技术者孙远明, 徐振林, 杨金易, 沈玉栋, 王弘, 王强, 雷红涛 申请人:华南农业大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种应用于有机磷农药均相多残留免疫检测的荧光素标记物，其特征在于具有式（Ⅰ）、（Ⅱ）或（Ⅲ）所示结构：（Ⅰ）；（Ⅱ）；（Ⅲ）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙远明，徐振林，雷红涛，王强，沈玉栋，杨金易，王弘，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：81
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