一种高效生产Trx-hCTRP2的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效生产Trx-hCTRP2的方法，该方法主要包括以下步骤：克隆人hCTRP2基因，构建原核表达载体：表达载体pET32-a(+)和质粒hCTRP2/pMD20-T经过XhoI及BamH?I双酶切并纯化回收，并利用T4DNA连接酶连接，得重组载体pET32/hCTRP2，转化重组载体到大肠杆菌宿主中，可溶诱导表达；纯化。本发明专利技术所述生产方法，利用pET32作为载体、优化组合诱导表达条件，最终可高效表达可溶hCTRP2融合蛋白的方法，既保证了hCTRP2融合蛋白的生物学活性也高效地获得了大量稳定蛋白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及应用重组DNA技术生产基因工程蛋白药物技术，具体来说涉及到一种高效生产还有组氨酸标签的thi0red0XinCTrX)-hCTRP2融合蛋白。
技术介绍
脂联素是一种由脂肪细胞分泌产生的细胞因子，1995年由Scherer等在小鼠的 3T3脂肪细胞中首次发现。研究表明，它具有增加脂肪酸氧化、提高葡萄糖摄取量、改善胰岛素抵抗、调控血管内皮的炎症反应等作用，且与肥胖、2型糖尿病和心血管疾病密切相关。 CTRPs (Clq-tumor necrosis factor-related protein)是一类与脂联素结构与功能都很相似的新型蛋白质家族，NCBI数据库中共有该家族已发现的12个成员(CTRP1-12)的cDNA 及蛋白质序列。CTRl^s蛋白由四个不同的结构域组成一个N-末端信号肽，一个短的可变结构域，一个胶原结构域，和一个与补体蛋白Clq同源的C-末端球形结构域。Wong等发现， CTRPs在哺乳动物中都是可分泌的糖蛋白。并且，CTRPs不像脂联素，只在脂肪组织表达，它们可以在多种组织中表达。CTRPs具有高保守性。鼠CTRPs与相应的人的CTRPs在N-端可变本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种高效生产Ｔｒｘ－ｈＣＴＲＰ２的方法，其特征在于：主要包括以下步骤：（１）克隆人ｈＣＴＲＰ２基因：以从人脂肪细胞中提取的总ｍＲＮＡ为模板，先用ＲＴ－ＰＣＲ扩增总ｃＤＮＡ，再以该ｃＤＮＡ为模板，用特异引物扩增出完整ｈＣＴＲＰ２基因片段，所用ｈＣＴＲＰ２特异引物中引入ＢａｍＨ　Ｉ酶切位点和在未端引入Ｘｈｏ　Ｉ酶切位点，回收ＰＣＲ产物连接到质粒ｐＭＤ２０－Ｔ载体，得质粒ｈＣＴＲＰ２／ｐＭＤ２０－Ｔ，经过测序确定为正确表达序列；（２）构建原核表达载体：将表达载体ｐＥＴ３２－ａ（＋）和质粒ｈＣＴＲＰ２／ｐＭＤ２０－Ｔ经过Ｘｈｏ　Ｉ及ＢａｍＨ　Ｉ双酶切并纯化回收，并利用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，得重组载...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴东海，李洪波，金守光，徐爱民，李侍武，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：81