一种多肽液相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种多肽液相合成方法，涉及多肽的合成，该方法包括以下步骤：将氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除全保护多肽的保护基，得到目标多肽。本发明专利技术避免大量使用有机溶剂进行反应后的处理，改用水作为析出保护多肽中间体的溶剂，能大幅度降低多肽的生产成本，并减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽的合成，特别是涉及。
技术介绍
随着科技水平的提高和人类对多肽的重视与研发，越来越多的多肽药物被开发应用于临床，为提高人类健康水平和治疗、预防疾病，提供高效安全的新型药物和疫苗。随着人们对多肽药物的需求逐渐增加，对化学家，特别是药物化学家而言，如何高效合成廉价的多肽药物，是一个亟待解决的技术问题。多肽的化学合成已经成为获得多肽药物的最重要途径。目前，液相合成多肽是合成短肽及片段肽的非常高效廉价的制备手段，而结合固相合成和液相合成优点的片段缩合工艺，与液相合成多肽的方法相比，则更是廉价且高效。但是，采用传统的液相合成方法合成多肽时，除了必须使用保护氨基酸、缩合剂和反应溶剂 (一般为有机溶剂)之外，还需要使用大量有机溶剂用于反应后的处理，常用的有机溶剂包括石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等，易污染环境。由于必须使用大量有机溶剂，不仅提高了多肽的生产成本，而且造成非常严重的环境污染，因此，如何降低液相合成多肽的成本和减少对环境的污染，是本领域亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述
技术介绍
的不足，提供，能够大幅度降低多肽的生产成本，并减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。本专利技术提供的多肽液相合成方法，包括以下步骤将氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。在上述技术方案中，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脱除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除 9-芴甲氧羰基(Fmoc)。在上述技术方案中，将脱除叔丁氧羰基(Boc)后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基(Boc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。在上述技术方案中，将脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。与现有技术相比，本专利技术的优点如下本专利技术避免大量使用有机溶剂进行反应后的处理，改用水作为析出保护多肽中间体的溶剂。本专利技术适用于规模化生产小分子多肽，不需大规模改变原有工艺，只需在合成环节中采用易溶于水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)作为反应溶剂，在脱除氨基保护基的过程中，选用易溶于水的三氟乙酸(TFA)来脱除叔丁氧羰基(Boc)，选用哌啶和DMF的混合溶液来脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。因此，本专利技术不仅能够大幅度降低多肽的生产成本，而且能够减少因大量使用有机溶剂而对环境造成的污染。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。本专利技术实施例提供的多肽液相合成方法，包括以下步骤将氨基酸衍生物置于N， N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于N， N-二甲基甲酰胺(DMF)中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。其中，所述中间体的氨基保护基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)， 采用三氟乙酸(TFA)脱除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。将脱除叔丁氧羰基(Boc)后的反应溶液加入水中，再通过弱碱来调节溶液酸碱性，使脱除叔丁氧羰基(Boc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。将脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反应溶液加入水中，再通过弱酸来调节溶液酸碱性，使脱除9-芴甲氧羰基 (Fmoc)的中间体析出，然后过滤、洗涤、干燥。反应过程的具体实施通式如下1号保护氨基酸+2号保护氨基酸一在二甲基甲酰胺(DMF)中缩合一全保护二肽溶液一加入纯水中析出全保护二肽(固体)一过滤洗涤得到全保护二肽(纯化的保护二肽)一干燥，脱除全保护二肽的氨基保护基一脱除氨基保护基的侧链保护二肽溶液一加入纯水中并用弱酸(或弱碱)调节溶液酸碱性使侧链保护二肽析出完全一过滤洗涤得侧链保护二肽一干燥，与3号保护氨基酸缩合一过程循环一得全保护多肽一脱除保护基一多肽下面通过4个实施例来详细阐述本专利技术的具体应用。实施例1、本专利技术在混合酸酐法合成胸腺五肽中的应用。步骤101:合成二肽。将21. 7g (IOOmmol)叔丁氧羰基缬氨酸(Boc-Val-OH)溶解在 IOOml DMF 中，-15 °C下加入30g(300mmol)N-甲基吗啉(NMM)后，滴加20. 4g(150mmol)氯甲酸异丁酯(ClCC^iBu)，搅拌反应30分钟后，加入39. 7g(110mmol)酪氨酸(卞醚)卞酯(H2N-Tyr (OBzl) -OBzl)，搅拌反应并撤去冷浴，用液相色谱HPLC检测反应完全 (Boc-Val-OH消耗完全)。将反应液在搅拌下徐徐加入2000ml冷水中搅拌20分钟，待产物析出完全，抽滤，滤饼用IOOml水洗涤两次，转入500ml圆底烧瓶中，在50°C下真空干燥4小时，得5Ig粉状固体全保护二肽(Boc-Val-Try (OBzl) -OBzl)，收率91 %，纯度97% (面积归一)。步骤102:合成三肽。将50g全保护二肽(Boc-Val-Try(OBzl)-OBzl)溶解在50ml三氟乙酸中，室温下搅拌，反应至完全，将反应液在搅拌下徐徐加入IOOOml水中，然后在持续搅拌下慢慢加入36g碳酸钠至pH 7。抽滤，滤饼用50ml 5%碳酸氢钠水溶液洗涤两次后，40°C下真空干燥得40g粉状固体脱除氨基保护基的二肽(H2N-Val-Try (OBzl) -OBzl)，收率97%。将40g(124mmOl)N-叔丁氧羰基(卞酯)天冬氨酸溶解在IOOmlDMF中，加入 37g (372mol) NMM,冷却至-15°C，搅拌下慢慢滴入 33. 8g (248mmol) ClCC^iBu,搅拌反应 30 分钟后，将40g(87mmol)脱除氨基保护基的二肽(H2N-Val_Try (OBzl)-OBzl)溶解在50ml DMF 中，搅拌并徐徐升温至室温(21°C )。监测反应完全(H2N-Val-Try(OBzl)-OBzl消耗完全) 后，加入持续搅拌着的2000ml水中，搅拌20分钟，抽滤，滤饼用IOOml水洗涤两次，50°C下真空干燥4小时。得61. 2g白色粉状固体全保护三肽(BoC-ASp(0Bzl)-Val-Try (OBzl)-O Bzl)，收率 91.8%，纯度 95%。步骤103 合成四肽。将60g(78mmol)全保护三肽溶解在60ml三氟乙酸中，室温下搅拌反应至完全，将反应液在搅拌下徐徐加入IOOOml水中，然后在持续搅拌下，慢慢加入43本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种多肽液相合成方法，其特征在于包括以下步骤：将氨基酸衍生物置于Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）中缩合，将反应溶液加入水中，析出固体后，经过滤、洗涤、干燥，得到中间体，脱除所述中间体的氨基保护基后加入水中，并调节溶液酸碱性，将脱除氨基保护基的中间体析出，干燥；将所述脱除氨基保护基的中间体与待缩合的氨基酸衍生物置于Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）中缩合，然后重复上述过程，直至得到全保护多肽，再脱除所述全保护多肽的保护基，得到目标多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘大学，
申请(专利权)人：兰州凯博生物化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：62