酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖棕榈酸酯的方法技术

本发明专利技术公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖棕榈酸酯的方法，包括：将蔗糖和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得蔗糖棕榈酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia?pastoris)GS?115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明专利技术通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成蔗糖棕榈酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种。
技术介绍
蔗糖酯作为一种安全的表面活性剂，其表面活性作用和广泛的适用范围已受到人们的关注。日本、美国、欧洲共同体各国、联合国粮农组织(FAO)，世界卫生组织(WHO)及我国均已批准蔗糖酯为食品、化妆品和药物的乳化剂。与一般的表面活性剂不同，蔗糖酯在好氧和厌氧条件下均能生物降解，这使日用工业产品的三废成为环境友好产物。我国蔗糖价格低廉、纯度高，进口棕榈油价格较低，食用安全。因此，其用途不断被开发，市场潜力巨大， 极具发展前景。长期以来，蔗糖酯的化学制备多利用蔗糖直接酯化的方法，由于蔗糖有8个反应活性相近的羟基，所以酯化反应作用位点难以控制，欲得到指定结构的单一产物十分困难， 往往需要冗长的保护和去保护的步骤。脂肪酶是目前蔗糖酯合成中使用最广泛的酶，但是生产成本高、固定化过程繁杂费时大大局限了其商业化应用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种，可显著降低蔗糖棕榈酸酯生产成本，同时达到较高的酯化反应效率和产率。一种，包括将蔗糖和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50 60°C反应10 14小时，分离、纯化制得蔗糖棕榈酸酯。优选的，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖棕榈酸酯的方法，包括：将蔗糖和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于５０～６０℃反应１０～１４小时，分离、纯化制得蔗糖棕榈酸酯；所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备：将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＧＳ１１５，将所得转化子接种于ＢＭＭＹ培养基中，诱导培养７２～１４４小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；所述的重组质粒由原始载体ｐＰＩＣ９Ｋ和依次插入原始载体ｐＰＩＣ９Ｋ中ＭＦα１信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母ＧＳ１１５的细胞壁α凝集素基因组成。

【技术特征摘要】
1.一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖棕榈酸酯的方法，包括将蔗糖和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50 60°C反应10 14小时，分离、纯化制得蔗糖棕榈酸酯；所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia paSt0riS)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72 144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；所述的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮晖，周陈伟，迪拉热木，徐娟，王睿之，林吉恒，何国庆，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86