一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法，属于食品微生物检测领 域。该方法用一定尺寸的圆形橡胶圈与设备表面组合成密封容器，以超声波空化效应对设 备表面的生物被膜进行取样，荧光染色后过滤，显微镜下拍照计数。此法用于对食品生产 车间内加工设备表面总菌数的测定，误差小，耗时短，为及时有效的杀菌消毒提供依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种总菌数测定方法，具体涉及一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定 方法，该方法能快速检测食品加工企业各个车间设备表面单位面积的总菌数。
技术介绍
目前，国标法对生产设备上微生物总量的估计采用擦拭法、琼脂覆盖法或接触板法。 擦拭法通过人工擦拭设备表面将菌体采集而后选用合适的培养基进行培养，琼脂覆盖法和 接触板法则是通过培养基与生产设备的直接接触对菌体进行培养。但是，擦拭法因擦拭方 式的不同及取样人员用力强度的差异造成结果不够准确，影响结果的可比性。同时，由于 细菌以生物被膜这种特殊的形式生长于设备表面，且难于彻底剥离，人工擦拭的方法不足 以将生物被膜中的绝大多数微生物收集到。甚至可能因为棉拭本身吸附部分微生物，从而 降低了该方法的检测灵敏度。琼脂覆盖法和接触板法由于与设备表面接触时间短、作用力 弱，难以将生物被膜内包裹的各种菌吸附到培养基上，更不能准确反映实际菌量，造成较 大误差。这三种方法不能准确完全的反应生产中设备表面的总菌数状况。除此之外，传统 方法需要对菌体进行培养，耗时较长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述缺点，提供一种基于超声波及荧光观察的总菌数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法，其特征在于：将内径为１．６０－１．９６ｃｍ的橡胶圈下沿直接与平坦的设备表面接触，橡胶圈上再放置一个与其内径相同的圆柱形硬塑料管，人工向下压塑料管，使橡胶圈、设备表面和硬塑料管形成一个密闭的可以盛装液体的容器，向容器内部注入含０．５－１．５％吐温－８０的无菌ＰＢＳ缓冲液５－１０ｍＬ，缓冲液ｐＨ是７．３５至７．４０，将超声波细胞破碎仪的变幅杆插入液面以下０．５－１．３ｃｍ，其中，处理功率８０－１２０Ｗ，处理时间１０－２０ｓ，温度为室温，将菌悬液充分吸出，置于离心管中，滴入染色剂５００－１０００μＬ，染色３－５ｍｉｎ后，收集于灭菌注射器中，过滤，将菌体富集于...

【技术特征摘要】
1、一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法，其特征在于将内径为1.60-1.96cm的橡胶圈下沿直接与平坦的设备表面接触，橡胶圈上再放置一个与其内径相同的圆柱形硬塑料管，人工向下压塑料管，使橡胶圈、设备表面和硬塑料管形成一个密闭的可以盛装液体的容器，向容器内部注入含0.5-1.5％吐温-80的无菌PBS缓冲液5-10mL，缓冲液pH是7.35至7.40，将超声波细胞破碎仪的变幅杆插入液面以下0.5-1.3cm，其中，处理功率80-120W，处理时间10-20s，温度为室温，将菌悬液充分吸出，置于离心管中，滴入染色剂500-1000μL，染色3-5min后，收集于灭菌注射器中，过滤，将菌体富集于黑色的聚碳酸酯膜上，用无菌PB...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩北忠，刘彤，李春雷，陈晶瑜，杨葆华，
申请(专利权)人：韩北忠，刘彤，李春雷，陈晶瑜，杨葆华，
类型：发明
国别省市：11