一种水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集方法技术

本发明专利技术涉及的是一种水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集方法。本发明专利技术按照以下步骤进行：向大体积水样中投加无机金属盐混凝剂，经过搅拌混凝沉淀，将沉淀的矾花收集于一个小体积容器内，再向其中投加酸液使矾花溶解，经离心后，去掉上清液，即实现了富集水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的目的。本发明专利技术有效地解决了原有隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊富集方法中的隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊富集率低且不稳定、操作要求高、过滤设备和耗材价格昂贵的问题。本发明专利技术不需要昂贵的仪器设备、药品，极大地减少了资金投入，该方法操作简单容易掌握，省时省力，降低了富集水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的成本，并提高了富集率，是一种为后续的免疫磁分离、免疫荧光标记显微镜计数、PCR定性检测、纳米探针基因芯片检测及Real-time?PCR定量检测等步骤提供了前期工作的新方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测
的方法，尤其是一种混凝富集水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的方法，属于水质安全

技术介绍
微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)和蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia) 目前被认为是最重要的两种水传肠道病原微生物。隐孢子虫以卵囊(Oocyst)的形式存在于水中，半数感染量为132个活卵囊，致病量一般为10个活卵囊；而贾第鞭毛虫以孢囊 (Cyst)的形态存在于水中，致病剂量一般为10 25个活孢囊。饮用了含有“两虫”(微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫)的水可引起消化道感染，伴有腹痛、腹泻、发热等症状。“两虫” 的介水传播会引发严重的公共安全事件。目前国际上对因“两虫”感染引发的肠道疾病尚无有效的治疗方法。“两虫”对饮用水安全构成严重威胁，已经引起了包括我国在内的世界各国的关注，在2006年我国新颁布的《生活饮用水卫生标准GB 5749-2006》中明确规定饮用水中“两虫”的水平应为每10升水中小于1个卵囊或孢囊。美国国家环保总局(USEPA)制定并发布的1623方法是目前国际上最常用的“两虫”检测标准方法，该方法首先通过过滤作用截留水中的两虫，随后使用洗涤液将截留在滤囊表面的“两虫”洗涤，随后采用免疫磁分离、DAPI染色及微分干涉显微镜观察计数等方法进行定量测定。该方法在洗脱滤囊的过程中造成“两虫”的损失，使得隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集率低，研究表明隐孢子虫卵囊和贾第虫孢囊的回收率经常只有20% 30%的较低水平。该方法存在着操作要求高、过滤设备和耗材(如专用滤囊等)价格昂贵， 以及两虫富集率低且不稳定等问题。因此，有必要开发一种操作简单，省时省力，能降低富集水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的成本的方法，提高“两虫”的富集率，为后续的免疫磁分离、免疫荧光标记显微镜计数、PCR定性检测、纳米探针基因芯片检测及Real-time PCR定量检测等步骤提供良好的保证。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种简便、快速、高效的水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集方法。本方法的步骤如下(1)向水样中投加10 100mg/l无机金属盐混凝剂；(2)搅拌后沉淀，弃去上清液，将沉淀的矾花收集；(3)向矾花中投加酸液使矾花溶解；(4)溶液经离心后，弃去上清液即可。所述的无机金属盐混凝剂为氯化铝、硫酸铝、氯化铁、硫酸铁、聚合氯化铝、聚合氯化铁和聚合氯化铝铁。所述的酸液为盐酸、硫酸。本专利技术所采用的金属盐类混凝剂在水中充分水解形成溶解性聚合物，进而压缩与水体中带负电的粘土胶体、带负电荷功能团的有机聚合电解质(如腐殖酸和富里酸)的双电层，使水中胶体脱稳聚合；“两虫”颗粒略带负电荷，可被金属氢氧化物沉淀物网捕，随絮体一同沉淀。该过程将水中的“两虫”转移至体积较小的絮体沉淀物中，实现了“两虫”的初步富集。而后向收集后的含有两虫的矾花溶液中添加酸液，使得以金属氢氧化物为主的矾花发生酸碱中和反应，从而使得矾花溶解，“两虫”得以再次释放至小体积的溶液中。再用离心机对经过大比例浓缩后的溶液离心，从而达到高效富集“两虫”的目的。本专利技术的优点和积极效果本专利技术无需昂贵的仪器设备、药品，极大地减少了资金投入。该方法操作简单，省时省力，降低了富集水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的成本，并提高了富集率，是一种为后续的免疫磁分离、免疫荧光标记显微镜计数、PCR定性检测、纳米探针基因芯片检测及Real-time PCR定量检测等步骤提供了前期工作的新方法。具体实施例方式以下结合具体的实施例对本专利技术的技术方案进一步详细描述。实施例1以自来水为水样，使用聚合氯化铝(PAC)和聚合氯化铝铁(PAFC)为混凝剂，对投加入水样中的隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊进行混凝富集。自来水样量为1L，分别投加隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊，使水中含隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊约1000个，水样pH值为9. 0 ；PAC投加量为30mg/L、PAFC投加量为20mg/L，搅拌条件为快速搅拌180r/ min2min,再慢速搅拌40r/min 15min,反应结束后静置30min。随后弃去上清液，将沉淀的矾花收集，向所收集的矾花中投加ImL 1. Omol/L的盐酸，搅拌使矾花溶解。将该溶液在10000转/分钟条件下离心10分钟，随后将上层清液吸出，保留离心管底部沉淀物，即实现了水中“两虫”的富集。表1给出了本专利技术对自来水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集率。表1本专利技术对自来水中隐孢子虫卵囊及贾第鞭毛虫孢囊的富集率混凝剂PAC jPAFC两虫隐孢子虫卵囊贾第鞭毛虫孢囊隐孢子虫卵囊贾第鞭毛虫孢囊富集率92.9%73.8%73.8%78.6%实施例2以厦门市杏林湾水库水为样品，使用硫酸铝、硫酸铁、氯化铁、PAC、PAFC为混凝剂， 对投加入水样中量为10000个/L的两虫的替代指示物(荧光微球，分为Φ6.0μπι，用于模拟隐孢子虫卵囊和Φ 10. 0 μ m，用于模拟蓝氏贾第虫孢囊，购至美国Polysciences公司)进行混凝富集。富集方法同实施例1。表2给出了实例2中本专利技术对地表水中隐孢子虫微球和贾第鞭毛虫微球的富集率。表2不同混凝剂对地表水中投加的隐孢子虫微球和贾第鞭毛虫微球的富集率本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集方法，其特征在于方法的步骤如下：（１）向水样中投加１０～１００ｍｇ／ｌ无机金属盐混凝剂；（２）搅拌后沉淀，弃去上清液，将沉淀的矾花收集；（３）向矾花中投加酸液使矾花溶解；（４）溶液经离心后，弃去上清液即可。

【技术特征摘要】
1.一种水中隐孢子虫卵囊和贾第鞭毛虫孢囊的富集方法，其特征在于方法的步骤如下(1)向水样中投加10 100mg/l无机金属盐混凝剂；(2)搅拌后沉淀，弃去上清液，将沉淀的矾花收集；(3)向矾花中投加酸液使矾花溶解；(4)溶液经离心后，弃去上清液即可。2.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：于鑫，张会宁，古励，魏博，刘冰，张舒婷，邬卓颖，许金丽，
申请(专利权)人：中国科学院城市环境研究所，
类型：发明
国别省市：92