接骨木及其木脂素类化合物用于抗骨质疏松药物的用途制造技术

本发明专利技术是接骨木（Ｓａｍｂｕｃｕｓ　　Ｗｉｌｌｉａｍｓｉｉ　　Ｈａｎｃｅ）提取物作为抗骨质疏松药物的用途，以及木脂素类化合物、酚酸类化合物作为抗骨质疏松药物的应用。接骨木的茎枝经乙醇加热回流提取得到乙醇浸膏，混悬于水中依次经过氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，氯仿提取物和乙酸乙酯提取物分别通过化学分离手段，得到可用于治疗骨质疏松的木脂素类化合物和酚酸类化合物。其中包括４个新化合物。通过体内、体外实验证明，本发明专利技术对抗骨质疏松有良好的效果，且没有雌激素样的副作用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种民间草药接骨木(Sambucus Williamsii Hance)的提取物作为抗骨质疏松的用途，以及从中分离得到的木脂素类化合物、酚酸类化合物作为抗骨质疏松药物的应用。
技术介绍
骨质疏松是一种代谢性的骨疾病，其特征为骨量下降、骨组织微环境退化，从而导致骨脆性增加，患者易发生骨折，近二十年来被公认为是很严重的公众健康问题。根据世界卫生组织统计，在美国，每年治疗骨质疏松引起的髋骨骨折就要花费100亿美元，与治疗心血管疾病和哮喘的费用相当[3]。而国际骨质疏松基金会(international osteoporosis foundation)的统计，在欧盟，每30秒就会发生一例因骨质疏松引起的骨折[2]。而且随着社会老龄化，预计到2050年全球骨质疏松引发髋骨骨折患者会将从1990年的180万上升到630万，而高发地区也将从现在的欧洲、美洲转移到发展中国家[1，2]。中国是世界人口大国，结合2000年我国第5次人口普查结果，预测我国原发性骨质疏松人数约为9千万[5]。如何有效的预防和治疗骨质疏松已成为全世界共同关注的问题。骨骼是一种不断重生的器官，它由功能不同的细胞、矿化和未矿化的连接组织基质、以及骨髓空穴、血管、微管、空隙组成。骨骼生长成熟后，骨形成与骨吸收形成动态平衡，称为骨重建。在骨内有一个虚拟的单位，被称为BMU(basic multicellular unit)，前部是破骨细胞(osteoclast)，后部是成骨细胞(osteoblast)，中部则是血管、神经和连接组织。BMU在特定的时间和部位形成之后，即向着骨内需要代谢的部位移动。破骨细胞即可附着在骨上，通过酸化和蛋白质消化作用将旧骨吸收。随着BMU向前推进，成骨细胞将代替破骨细胞附着在这个部位上，分泌骨基质，最终钙化形成新骨[6]。骨质疏松的发病机理比较复杂，且受到体内多种水平的调控。在正常的情况下，骨骼维持在健康的水平。一旦骨重建动态平衡被打破，骨吸收超过了骨形成，即形成了骨质疏松。传统的中医理论认为“五脏所主，肾主骨”；“肾者，其充在骨”，肾精充足，则骨髓生化有源，骨得髓的滋养而坚固有力。骨质疏松症，中年得病老年成疾。由于肾虚，肾精不足，精不生髓而日久骨失所养，则骨质稀疏，出现骨痹、骨萎。《内经》中明确提出以补肾法疗之。中医的肾涉及到人体内分泌、神经、免疫、代谢等多个体内功能系统，现代医学研究表明肾虚者下丘脑-垂体-性腺轴功能减退，因此性激素水平下降，进而引起骨功能下降，单位体积内骨组织含量减少，发生骨质疏松[4]。而补肾益气的中药提高了机体内分泌腺的机能，改善了下丘脑-垂体-性腺轴的功能，增加了体内性激素，调整了内环境，起到了延缓骨质疏松的发生和发展作用。虽然体内实验证明中药治疗骨质疏松的确有效，且副作用较少，但是由于中药成份复杂，指标成份、活性成份不明确，作用机制研究较少，治疗靶点难以确认，目前很难被国际社会接受。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中草药接骨木提取物，用科学的工艺做成制剂，使之可以有效治疗骨质疏松。通过检测中药提取物对各种生化指标、骨组织形态学指标、骨力学指标以及调控骨代谢和矿物质代谢的基因表达的影响，初步确定这种中药提取物治疗骨质疏松的机理和作用靶点。同时采用现代化学分离手段分离这种中药提取物，以体外成骨样UMR 106细胞和具有雌激素受体的MCF-7细胞检测化合物的抗骨质疏松活性，确定这种中药提取物治疗骨质疏松的物质基础。为预防和治疗骨质疏松提供了新的途径。接骨木为中国民间用草药，忍冬科植物接骨木Sambucus williamsii Hance的茎枝，本植物的根及根皮(接骨木根)、叶(接骨木叶)、花朵(接骨木花)均供药用。主要功用有祛风、活血、治风湿筋骨疼痛。对接骨木的化学研究和抗骨质疏松活性少见报道，无专利申请。这一目的是这样实现的接骨木Sambucus williamsii Hance的茎枝适当粉碎，用60％乙醇回流提取2次，减压蒸去溶剂，得到乙醇浸膏。或者也可用纯乙醇、纯甲醇代替60％乙醇提取，所得提取物成分相似。所得浸膏可以制成口服剂、片剂、胶囊剂等剂型。乙醇浸膏混悬于水中，用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，得到氯仿提取物，乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物。其中乙酸甲酯、乙酸丁酯可以代替乙酸乙酯，异丙醇可以代替正丁醇。氯仿提取物和乙酸乙酯提取物经硅胶柱层析、分子筛层析、反相柱层析和高效液相制备后，得到12个木脂素类化合物，4个酚酸类化合物(包括其衍生物)。其中化合物11、化合物20、化合物34和化合物35是这次专利技术中得到的新化合物，用于抗骨质疏松的用途。本专利技术对骨质疏松有很好的治疗效果，是副作用较小的天然药物。四附图说明附图是本次专利技术从接骨木乙醇浸膏中分离得到的化合物的结构式。其中化合物11、化合物20、化合物34和化合物35是本次专利技术得到的新化合物。五具体实施例方式实施例1接骨木(Sambucus Williamsii Hance)的茎枝30公斤，经粉碎后用8倍量60％乙醇加热回流提取2次，每次2小时。合并提取液，减压蒸去溶剂，得乙醇浸膏900克。此项提取也可用纯乙醇、纯甲醇代替60％乙醇。乙醇浸膏350克用于实施例2。乙醇浸膏550克混悬于4000毫升水中分别以等体积氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压蒸去溶剂，得氯仿提取物100克，乙酸乙酯提取物30克，正丁醇提取物70克，水提取物330克。乙酸甲酯、乙酸丁酯可以代替乙酸乙酯，异丙醇可以代替正丁醇。也可以直接用乙酸乙酯萃取乙醇浸膏水混悬液，再用正丁醇萃取。这种方法时氯仿萃取项可以省略。氯仿提取物和乙酸乙酯提取物经进一步化学分离，鉴定了其中主要的化学成分。这些化合物的结构和抗骨质疏松活性将在下面的实施例中阐述。实施例2说明从实施例1得到的接骨木乙醇浸膏的体内生物活性实验结果。将3月龄的雌性SD大鼠随机分为5组，4组卵巢摘除组和1组假手术组。卵巢摘除组(OVX)的大鼠乙醚麻醉后摘除双侧卵巢，假手术组(Sham)的大鼠同样用乙醚麻醉，但不摘除卵巢，只剪去少许卵巢外侧的脂肪。手术后一个月，将接骨木乙醇浸膏溶解于蒸馏水中配成600mg/ml和300mg/ml两个浓度，将阳性对照药17β-雌二醇混悬于蒸馏水中，分别灌胃给药。模型对照组和假手术组给予同容量的蒸馏水。持续给药3个月，每周测定大鼠体重。在处死之前，将大鼠放入代谢笼中，收集24小时内的尿液，测定尿中钙、肌酐以及脱氧吡啶酚(DPD)的含量。腹主动脉取血后，摘除大鼠子宫，迅速称重。测定血清Ca含量，碱性磷酸酶活性(ALP)以及骨钙素含量，计算子宫脏器系数比。取出大鼠的左侧胫骨和股骨，剔除肌肉和软骨，采用周围骨定量CT(pQCT)技术测定胫骨骨密度，同时用三点弯曲试验考察股骨的强度。以下是实施例3的实验结果1)实验组别 体重(g)模型对照组(OVX) 333±8阳性对照组(OVX+E2)292±8接骨木乙醇浸膏(OVX+300mg/kg/d)338±11接骨木乙醇浸膏(OVX+600mg/kg/d)336±11假手术组(Sham)301±11实验组别 子宫系数比(mg/g)模型对照组(OVX) 0.32±0.03阳性对照组(OVX+E2)1.18±0.15接骨木乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种民间用药接骨木提取物在制备用于防治骨质疏松症的制剂中的应用。其特征在于将一种民间用药接骨木的茎枝经适当粉碎后用适当溶剂回流提取，除去溶剂后得提取物，用于抗骨质疏松的用途。

【技术特征摘要】
1.一种民间用药接骨木提取物在制备用于防治骨质疏松症的制剂中的应用。其特征在于将一种民间用药接骨木的茎枝经适当粉碎后用适当溶剂回流提取，除去溶剂后得提取物，用于抗骨质疏松的用途。2.从接骨木中分离得到的木脂素类化合物、酚酸类在制备用于防治骨质疏松症的制剂中的应用。其特征在于将一种民间用药接骨木的茎枝经适当粉碎后用溶剂回流提取，除去溶剂后得提取物。经水混悬，分别用不同极性的有机溶剂萃取。萃取后的提取物经硅胶柱层析、分子筛层析、反相柱层析和高效液相制备后，得到12个木脂素类化合物和4个酚酸类化合物。其中4个是这次发明中得到的新化合物，用于抗骨质疏松的用途。3.权力要求1所述的接骨木，其特征在于接骨木的茎枝经适当粉碎后用60％乙醇8倍量两次回流提取，每次2小时，减压浓缩除去溶剂得接骨木乙醇浸膏。提取溶剂还可以用纯乙醇或纯甲醇代替60％乙醇。4.权力要求2所述的木脂素类化合物，其特征在于其基本结构单元是苯丙基，即C6-C3单位。权力要求6和7所述的木脂素类化合物由n个C6-C3单位通过不同的方式连接而成(1＜n＜5)，连接位置在支链C3单位上。不同的连接方式可以形成平面结构相同，立体构型不同的异构体。5.权力要求2所述的木脂素类化合物，其特征在于通过两个C3单位或一个基本结构的C3单位与另一个基本结构的C6单位以不同的形式进行连接，形成以下四种具有抗骨质疏松活性的木脂素。...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚新生，黄文秀，王乃利，杨序娟，解芳，张岩，
申请(专利权)人：深圳中药及天然药物研究中心，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]