本发明专利技术关于喜树碱衍生物ＮＳＣ６０６９８５在制备治疗急性白血病药物中的应用。纳摩尔浓度的ＮＳＣ６０６９８５能够诱导白血病细胞系ＮＢ４和Ｕ９３７细胞凋亡。在凋亡诱导方面，ＮＳＣ６０６９８能迅速诱导线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）崩塌及ｃａｓｐａｓｅ－３活化。ＮＳＣ６０６９８诱导的蛋白激酶Ｃδ（ＰＫＣδ）的水解激活在这些过程中发挥了关键和启动效应。ＰＫＣδ特异抑制剂ｒｏｔｔｌｅｒｉｎ能够完全抑制ＮＳＣ６０６９８５诱导的线粒体ΔΨｍ崩塌和ｃａｓｐａｓｅ－３活化，而ｃａｓｐａｓｅ－３特异的抑制剂Ｚ－ＤＥＶＤ－ｆｍｋ仅仅部分削弱ＰＫＣδ的活化及细胞的凋亡。ＮＳＣ６０６９８５显著抑制急性髓性白血病病人新鲜骨髓造血祖细胞的克隆形成能力。故ＮＳＣ６０６９８５是治疗白血病的潜在作用药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗髓性白血病药物中的应用。具体地说，关于纳摩尔浓度的喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗急性和慢性髓性白血病药物中的应用。
技术介绍
髓性白血病包括急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML)，属于异质性的恶性血液肿瘤，也是发生在成人的最普遍的白血病。据资料记载，仅2003年就有大约11000个美国人被诊断为AML，其中大约75％的病人最终由于该病死亡(Iovino CS and Camacho LH.2003)。在过去的20年间，对于这一恶性肿瘤在生物学、分子和细胞遗传学方面的认识有了显著进步。同时，对于AML病人的治疗也有长足的进步。尤其是全反式维甲酸(ATRA)和蒽环类化合物的联合化疗应用，以及最近Tallman等人报道的与三氧化二砷的联合使用，使得急性早幼粒细胞性白血病(APL)这一含特异的t(15；17)染色体易位的特殊AML亚型可以被治愈。由于阿糖胞苷和含蒽环类化合物化疗的应用以及先进的支持治疗，使得其它AML的预后也逐渐得以改善，并使75-80％的AML病人得到临床缓解。不幸的是，大部分病人都会复发并罹患不可治愈的疾病(Kimby et al，2001；Voliotis D and DiehlV，2002)，尽管他们中有些可能通过昂贵的干细胞移植得以救治(Frankel Aeet al，2001)。此外，年纪大的AML患者进行强化化疗的效果并不理想(Hamblin，1995)。因此有必要开发新的药物治疗这类疾病。由于凋亡是多细胞动物用于排除有害细胞的机制，并在发育、免疫系统成熟、组织稳态和衰老中起着重要作用，这使得用新的药物诱导细胞凋亡成为一种相当可行的方法(Parmar S et al，2004)。喜树碱是一种从喜树(Camptotheca acuminata)中分离出来的生物碱，它是一种针对细胞核内拓扑异构酶I(Top I)的一种很有前景的抗肿瘤药物(Bomgaars et al，2001)。由于严重的和不可预知的副作用，最初对于喜树碱的临床研究不得不终止。基于对其作用机制更详细的理解和化学处理使之溶解度增加，喜树碱已经进入了开发化学治疗肿瘤药物的前沿(Pizzolato and Saltz，2003)。尤其是两种水溶性喜树碱衍生物最近已经被美国食品药品管理局批准应用于临床分别是用于卵巢癌或小细胞肺癌二线治疗的topotecan，和用于治疗对5-氟尿嘧啶耐受的结直肠癌或在首次治疗中结合5-氟尿嘧啶治疗转移性结直肠癌的irinotecan(Bomgaars et al，2001)。喜树碱衍生物治疗AML的临床潜力也有研究。1996年Rowinsky等人报道topotecan单独作用对于AML病人具有强烈的抗白血病活性。最近，topotecan结合etoposide、cytarabine或cyclophosphamide作为首选救治AML的治疗方案正受到研究，并取得了一些有效的结果。基于对该类药物的酶活性抑制、抗增殖、毒性和药物特性的认识，促进了进一步研究新型的拓扑异构酶I抑制剂，例如DX-8951f，一种水溶性hexacyclic喜树碱衍生物。它具有强烈的抑制拓扑异构酶I的活性，并在SCID小鼠AML模型中显示出具有更好的抗白血病活性(Nomoto T，1995)。另外，OSI-211，一种低清除率的，单层脂质体形式的水溶性喜树碱衍生物，也被发现具有强烈的前临床抗白血病活性(Tomkinson et al，2003)。虽然目前关于喜树碱衍生物的研究很多，但迄今为止，还没有关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗急性白血病药物中的应用的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗髓性白血病药物中的新用途，即在制药中新应用。实际上，本专利技术关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的应用，关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗急性单核细胞白血病药物中的应用，关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗急性粒细胞白血病部分分化型病药物中的应用，关于喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗慢性粒细胞白血病(CML)药物中的应用。本专利技术的技术要点是1)细胞培养和处理急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞(由Michael Lannotte博士提供)、急性单核细胞白血病U937细胞及慢性髓性白血病K562细胞(来自于中国上海生命科学研究院细胞库)均在37℃、5％CO2-95％空气湿度条件下，含10％的热灭活胎牛血清(FCS，Hyclone，Logan，UT)的RPMI-1640培养基中进行培养。实验细胞以2-5×105个细胞/毫升的密度接种培养，并在有/无PKCδ特异抑制剂rottelin和caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk的情况下与所需浓度NSC606985一起进行孵育。2)通过流式细胞计数分析核DNA含量分布、线粒体跨膜电位，annexin-V，DNA凝胶电泳，Western blots实验，我们从形态学、亚G1细胞、DNA梯状片段和annexin V+/PI-染色都可证实喜树碱衍生物NSC606985可以诱导NB4和U937细胞凋亡。纳摩尔浓度即可产生这种效应。尽管低浓度的NSC606985不能诱导K562细胞系死亡，但它可对其产生强烈的增殖抑制效应。3)AML病人身上获得骨髓细胞培养在得到书面同意的情况下，从四位AML病人身上获得骨髓(BM)，其中包括两名M3(急性早幼粒细胞白血病)病人，1名M2(急性粒细胞白血病部分分化型)病人和1名M5(急性单核细胞白血病)病人(根据法-美-英分类法)。单核细胞用Ficoll-Paque(AmershamPharmacia，Uppsala，Sweden)分离并悬浮于Iscove′s重建的Dulbecco′s培养基(IMDM；Gibco BRL，Gaithersburg，ML)。我们使用CFU-GM和BFU-E检测到，NSC606985对于4例AML病人体内提取的新鲜骨髓细胞具有抑制克隆形成能力。本专利技术优点在于本专利技术对喜树碱衍生物NSC606985发掘了新的医疗用途，开阔了一个新的应用领域。本专利技术喜树碱衍生物NSC606985药理作用强，预示着很好的药用前景。本专利技术喜树碱衍生物NSC606985可以诱导NB4和U937细胞凋亡纳摩尔浓度即可产生这种效应。尽管低浓度的NSC606985不能诱导K562细胞系死亡，但它可对其产生强烈的增殖抑制效应。此外，凋亡诱导或增殖抑制浓度的NSC606985能显著甚至完全抑制受试的四例AML病人新鲜造血祖细胞的克隆形成活性。这些结果提示NSC606985具有治疗白血病的前景。附图说明图1是NSC606985以纳摩尔浓度诱导NB4调亡示意图。图1A是NSC606985的化学结构式。图1B是NB4细胞用指示浓度的NSC606985处理24、48小时，用台盼兰拒染实验检测其生长抑制率(左)及活率(右)。所有数据均为三次实验的平均值±S.D示意图。图1C是NB4经NSC606985处理指示的时间，收集至载玻片，经瑞氏染液染色后用显微镜观察形态，空心箭头指示的是调本文档来自技高网...
【技术保护点】
喜树碱衍生物ＮＳＣ６０６９８５在制备治疗髓性白血病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.喜树碱衍生物NSC606985在制备治疗髓性白血病药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于髓性白血病是急性髓性白血病。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于髓性白血病是慢性髓性白血病。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于急性髓性白血病是急性早幼粒细胞白血病。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于急性髓性白血病是急性单核细胞白血病。6.如权利要求2所述的应用，其特征在于急性髓性白...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈国强，朱院山，宋满根，
申请(专利权)人：上海第二医科大学附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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