用精氨酸酶治疗肝炎的药物组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用聚乙二醇修饰的人精氨酸Ⅰ酶治疗肝炎的方法及其制药方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物组合物及其使用方法。具体地说，本专利技术涉及一种能够治疗肝炎的药物组合物。
技术介绍
治疗肝炎的抗病毒药物有很多，目前多用以下几种(1)干扰素是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝、丙肝病毒复制，同时还可以增强自然杀伤细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用并增强抗病毒能力。(2)白细胞介素-2即T细胞生长因子，具有调节免疫、抗病毒、抗肿瘤作用。(3)核苷类化合物如阿昔洛韦是一种合成的无环嘌呤核苷类化合物，可抑制多种脱氧核糖核酸病毒的增殖。(4)阿糖腺苷类体内、体外均证明对乙肝病毒有潜在的作用。经观察用药期间部分患者的脱氧核糖核酸聚合酶阴转，生化和肝组织异常也有好转。(5)其他促肝细胞生长素、胸腺肽、抗乙肝核糖核酸、病毒唑、左旋咪唑、香菇多糖、强力宁及植物血凝素等。然而，以上药物的疗效仍未臻理想，且易引起不良副作用。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个方面提供一种更有效的肝炎治疗药物。具体地说，本专利技术提供一种选择性降低患者体内精氨酸水平的药物来治疗肝炎。本专利技术的另一个方面是提供一种可降解精氨酸的酶(即精氨酸降解酶)在制药方面的应用。在一个优选的实施方案中，本专利技术的精氨酸降解酶是精氨酸酶或精氨酸脱亚胺酶。在一个优选的实施方案中，本专利技术的精氨酸降解酶是一种分离的且基本上纯化的重组精氨酸酶。在一个更优选的实施方案中，本专利技术的精氨酸酶是人精氨酸酶I。在更优选的实施方案中，本专利技术的人精氨酸酶I基本上具有与SEQ ID NO1或SEQ ID NO2基本上相同的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列编码具有与SEQ IDNO3基本上相同的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，本专利技术的重组精氨酸酶的纯度为80-100％。在更优选的实施方案中，本专利技术的重组精氨酸酶的纯度为90-100％。在又一个实施方案中，本专利技术的精氨酸酶经修饰具有足够高的酶活性和稳定性以在患者体内保持3天的“足够的精氨酸剥夺”(adequatearginine deprivation，以下简称AAD)。一个优选的修饰方法是将本专利技术的精氨酸酶氨基末端连接6个组氨酸。另一个优选的修饰为聚乙二醇化(pegylation)以提高所述酶的稳定性使患者发生的免疫反应性最小。在更优选的实施方案中，本专利技术的聚乙二醇化包括透过一个偶联剂将精氨酸酶与至少一个聚乙二醇组份共价结合。在最优选的实施方案中，偶联剂是2，4，6-三氯-s-三嗪(三聚氰氯，CC)或琥珀酰亚胺丙酸(SPA)。经过修饰的精氨酸酶具有至少250I.U./mg的酶活性。更优选的是具有至少300-350I.U./mg的酶活性，最优选的是至少500I.U./mg的酶活性。在另一个实施方案中，所述酶被修饰成在血清或血浆中具有足够稳定性，并有大约至少三日的半衰期。在另一个优选的实施方案中，本专利技术提供的制药应用所制备的药品可用来治疗肝炎。在一个更优选的实施方案中，本专利技术提供的制药应用所制备的药品可用来治疗乙型肝炎。本专利技术的另一方面涉及一种药物组合物，包含一种分离的且基本上纯化的重组精氨酸酶。在一个具体的实施方案中，本专利技术的药物组合物包含的重组精氨酸酶的纯度为80-100％。在一个优选的实施方案中，重组人精氨酸酶是任何一种可降解精氨酸的酶，例如精氨酸脱亚胺酶或人精氨酸酶I。在更优选的实施方案中，所述酶是基本上具有核苷酸序列SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的人精氨酸酶I，其中，所述核苷酸序列编码具有SEQ ID NO3的氨基酸序列。在优选的实施方案中，所述的精氨酸酶具有足够高的酶活性和稳定性已在患者体内保持至少3天AAD。在最优选的实施方案中，所述精氨酸酶还通过聚乙二醇化修饰以改良稳定性使免疫反应最小化。在另一个优选的实施方案中，本专利技术的药物组合物能够降低患者体内精氨酸水平。在一个更优选的实施方案中，本专利技术的可调节肝炎。在一个最优选的实施方案中，本专利技术的药物组合物可以治疗乙型肝炎。在另一个实施方案中，本专利技术的药物组合物进一步被制备成固体、液体、乳状液、悬浮液、微胶粒、或微脂体的形式。在另一个实施方案中，本专利技术的药物组合物的配方是适用于口服或注射的形式。附图说明图1A，1B和1C是人精氨酸酶I的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。图1A是质粒pAB101的EcoRI/MunI至XbaI位点的核苷酸序列(SEQID NO1)。核苷酸(nt)1-6，EcoRI/MunI位点；nt481-486，启动子1的-35区域；nt504-509，启动子1的-10区域；nt544-549，启动子2的-35区域；nt566-571，启动子2的-10区域；nt600-605，核糖体结合位点；nt614-616，起始密码子；nt632-637，NdeI位点；nt1601-1603，终止密码子；nt1997-2002，XbaI位点。图1B是经修饰的人精氨酸酶的编码核苷酸序列(SEQ ID NO2)及其相应编码的氨基酸序列(SEQ ID NO3)。图1A中核苷酸614-1603是修饰的精氨酸酶氨基酸序列的编码区。N末端的6组氨酸(SEQ ID NO4)标记以下划线标示。翻译终止密码子以*标示。图1C是正常人精氨酸酶I的编码核苷酸序列(SEQ ID NO8)及其相应编码的氨基酸序列(SEQ ID NO9)。具体实施方案本专利技术所用术语“聚乙二醇化精氨酸酶”是指通过聚乙二醇化修饰的本专利技术精氨酸酶I(见专利申请WO2004/001048的说明书)，以提高所述酶的稳定性及使免疫反应性最小化。本专利技术所用术语“基本相同”无论是针对DNA的核苷酸序列，RNA的核糖核苷酸序列，还是蛋白质的氨基酸序列，均是指与本专利技术所揭示的实际序列有微小的及非相因而生的序列变化的序列。具有基本相同序列的种类被认为与所揭示序列相等价并包含在所附权利要求范围内。在此方面，“微小的及非相因而生的序列变化”是指与本文所揭示的和/或权利要求的DNA，RNA或蛋白质基本相同的序列与本文揭示的和/或权利要求的序列功能等价。功能等价序列以基本相同的方式起作用，产生与本文所揭示的和权利要求的核酸和氨基酸组合物基本相同的组合物。特别地，功能相等的DNA编码与本文所揭示的那些蛋白质相同的蛋白质，或者编码具有保守氨基酸变化的蛋白质，所述变化如用一个非极性残基取代另一个非极性残基，或者用一个带电残基取代另一个相似带电的残基。这些变化包括本领域技术人员已知的那些基本不改变蛋白质三级结构的变化。术语“足够高的酶活性”是指重组人精氨酸酶的酶比活性为至少250I.U./mg，优选至少300-350I.U./mg，更优选至少500I.U./mg。在一个优选的实施方案中，所述精氨酸酶的比活性为500-600I.U./mg。术语“稳定性”是指所述精氨酸酶在体外的稳定性。更优选地，所述稳定性是指在体内的稳定性。酶活性降低率与分离的纯化的重组人精氨酸酶的血浆稳定性成反比。这种关系可从人精氨酸酶在血浆中的半衰期反映出来。本专利技术所用术语“足够的精氨酸剥夺(AAD)”是指体内精氨酸水平为10μM或低于10μM。本专利技术所用术语“半衰期”是指所述精氨酸酶在体外人血浆中的浓度降至一半所需的时间。所有其他本说明书未提及的技术手段与术语释义等资料本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种精氨酸降解酶在制备治疗肝炎药品中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种精氨酸降解酶在制备治疗肝炎药品中的应用。2.如权利要求1的应用，其中，所述酶是一种分离的且基本上纯化的重组精氨酸酶。3.如权利要求1的应用，其中，所述重组精氨酸酶的纯度为80-100％。4.如权利要求3的应用，其中，所述重组精氨酸酶是人精氨酸酶I。5.如权利要求3的应用，其中，所述重组精氨酸酶是精氨酸脱亚胺酶。6.如权利要求4的应用，其中，所述酶具有与SEQ ID NO1或SEQID NO2基本上相同的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列编码具有与SEQ ID NO3基本上相同的氨基酸序列。7.如权利要求4的应用，其中，所述酶具有至少250I.U/mg的酶活性。8.如权利要求4的应用，其中，所述酶被修饰成在血清或血浆中具有足够稳定性，并有大约至少三日的半衰期。9.如权利要求8的应用，其中，所述修饰为聚乙二醇化。10.如权利要求9的应用，其中，所述聚乙二醇化包括透过一个偶联剂将所述酶与至少一个聚乙二醇组份共价结合。11.如权利要求9的基本上纯化的重组人精氨酸酶，其中，所述偶联剂是2，4，6-三氯-s-三嗪(三聚氰氯，CC)或琥珀酰亚胺丙酸(SPA)。12.如权利要求4的应用，其中所述人精氨酸酶I的氨基末端连接6个组氨酸。13.如权利要求1的应用，其中，所述肝炎为乙型肝炎。14.一种药物组合物，其包含一种精氨酸降解酶。15.如权利要求14的药物组合物，其中，所述精氨酸降解酶是一种分...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑宁民，
申请(专利权)人：康达医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]