变性梯度凝胶电泳Ｍａｒｋｅｒ的制备方法技术

ＤＧＧＥ电泳Ｍａｒｋｅｒ的制备方法，涉及一种微生物分子生态学常用技术ＤＧＧＥ中分子标记物的制备方法。本发明专利技术所用制备ＤＧＧＥ　Ｍａｒｋｅｒ模板以质粒形式冻干保存，稳定性高，保存时间长，不易丢失，稳定性高，而且用分子克隆技术制备的模板更容易做到定性定量测定，尽可能避免了每批模板之间质量的差异，使生产更加标准化、稳定与高效，另外不同碱基序列等长的ＰＣＲ产物是分别制备，可以等摩尔混合，这样就保证了各片段的一致性，本发明专利技术还具有制作流程简便，周期短，操作简单，成本低，经济实用，适宜于批量生产的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物分子生态学领域，具体地涉及一种变性梯度凝胶电泳Marker 的制备方法。
技术介绍
变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis, DGGE)最早是 由Fisher和Lerman专利技术用于检测DNA突变的技术，1993年Muzyer等首次将DGGE技术应 用于微生物生态学研究，并证实了这种技术在研究自然界微生物群落的遗传多样性和种群 差异方面具有明显的优越性。DGGE是通过核酸信息对微生物群落进行表征，比传统的菌种分离培养技术更快 捷，并可以通过条带切割测序确定细菌种属。由于自然界中只有0.1-1%的微生物通过常 规方法能被培养，所以与传统方法相比DGGE技术能够快速、准确地鉴定在自然生境或人工 生境中的微生物种群，并进行复杂微生物群落结构演替规律、微生物种群动态、基因定位、 表达调控的评价分析。由于DGGE具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点，短短的十年 内，已经成为微生物群落遗传多样性和动态分析的强有力工具，并被广泛用于活性污泥、生 物膜、土壤、底泥、高温热泉、湖泊、海洋等环境样品中的微生物多样性检测和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种变性梯度凝胶电泳Ｍａｒｋｅｒ的制备方法，其特征在于：１）将环境样品浸入无菌水中，洗脱微生物细胞；２）梯度稀释平板法纯化单菌落；３）扩增１６ＳｒＤＮＡ或１８ＳｒＤＮＡ保守基因，要求其扩增片段小于８００ｂｐ；４）ＤＧＧＥ确定ＤＧＧＥ　ＤＮＡＭａｒｋｅｒ的来源菌株；５）在ＤＧＧＥ凝胶上挑选分布间隔较均匀的ＤＮＡ条带，将这些条带所代表的菌株作为Ｍａｒｋｅｒ的来源菌株；６）将上述菌株的１６ＳｒＤＮＡ或１８ＳｒＤＮＡ保守基因克隆入质粒；７）ＰＣＲ扩增质粒重１６ＳｒＤＮＡ或１８ＳｒＤＮＡ保守基因片断，纯化后定量；８）根均需求调整各ＰＣＲ产物浓度，混匀后包装。

【技术特征摘要】
1.一种变性梯度凝胶电泳Marker的制备方法，其特征在于1)将环境样品浸入无菌水中，洗脱微生物细胞；2)梯度稀释平板法纯化单菌落；3)扩增16SrDNA或18SrDNA保守基因，要求其扩增片段小于800bp；4)DGGE确定DGGE DNA Marker的来源菌株；5)在DGGE凝胶上挑选分布间隔较均勻的DNA条带，将这些条带所代表的菌株作为 Marker的来源菌株；6)将上述菌株的16SrDNA或18SrDNA保守基因克隆入质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷立坤，张洪勋，张建云，
申请(专利权)人：青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：95[]