本发明专利技术公开了一种小核酸及其在制备抑制单纯疱疹病毒(HSV)和人类乳头瘤病毒（HPV）病毒的药物中的应用。该小核酸是双链核酸，其正义链序列为序列表中序列5，其反义链序列为序列表中序列6。该小核酸可制成温度敏感型凝胶制剂。用所述小核酸温度敏感型凝胶制剂注入（或喷入）阴道或口腔等不规则腔道，能抑制上述腔道和宫颈上皮细胞中宿主B2M基因的表达和或外来的HPV?E7的表达，从而能用于抑制HSV-1病毒的人类乳头瘤病毒（HPV）感染和/或治疗HVP所致宫颈癌前病变。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种小核酸及其温度敏感型凝胶制剂以及它们在制备抑制单纯疱疹病毒(HSV)和人类乳头瘤病毒(HPV)病毒所致疾病的药物中的应用。
技术介绍
单纯疱疹病毒(HSV)感染是导致口腔及生殖器黏膜疱疹和溃疡的常见因素。人群对HSV普遍易感，HSV-I感染率约达80 90%，HSV-2感染率也高达22% -40%。HSV-I主要造成口腔炎和嘴唇的疱疹，而HSV-2多通过性活动传播，造成生殖器疱疹，越来越多的研究发现，HSV-I也能导致生殖器疾病，而且是导致生殖器疾病更为常见的原因。病毒可潜伏在感染部位附近的神经节中而终生带毒。间歇性的有症状激活给病人造成痛苦，而无症状排毒则造成病毒的传播。HSV诱导的体液和细胞免疫能影响复发疾病的严重程度，但不足以清除病毒，目前研制的疫苗对HSV-2感染没有保护性，而对HSV-I的保护率不足60%，目前治疗HSV感染采用口服核苷类药物治疗，如阿昔洛韦与泛昔洛韦，能抑制病毒的合成，但有可能造成神经系统，消化系统及全身的不良反应。研发局部使用的治疗单纯疱疹病毒所致的口腔及生殖器病变的小核酸温度敏感型凝胶制剂，能避免口服核苷类药物的副作用。人类乳头瘤病毒(HPV)感染是世界范围内最常见的性传播感染，高危HPV与宫颈癌的发生密切相关。HPV为双链DNA病毒，由两个编码区和一个非编码调节区构成。编码区为早期基因区(E区)和晚期基因区(L区)。E区有6个基因，包括E1，E2，E4，E5，E6和E7，其中与宫颈癌关系密切的为E6和E7基因。目前已经确认的HPV近200型，宫颈癌的发生主要与15种高危型HPV的感染有关。其中HPV16U8型引起的宫颈癌占总病例的70%(1-2)。而HPV58型在我国华南地区较为流行。世界卫生组织的统计资料表明，宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第二，全球每年约有46. 6万妇女被诊断为宫颈癌，约有28. 8万患者死亡。我国每年宫颈癌的新增病例约13. 5万，死亡病例约有3-5万人。有效控制HPV感染，及时发现和治疗宫颈癌前病变是降低宫颈癌发病率和死亡率的关键所在，但目前还没有能有效清除HPV感染并治疗宫颈癌前病的药物。 由于上述两种情况时常同时发生，研发能同时针对上述两种病毒感染所致疾病的制剂将有良好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术提供一种小核酸及其在制备治疗单纯疱疹病毒(HSV)和人类乳头瘤病毒(HPV)病毒所致病变的药物中的应用。本专利技术所提供的小核酸为双链核酸，名称为siB2M，其正义链序列为序列表中序列5 (5’ GAAUGGAGAGAGAAUUGAA3’)，其反义链序列为序列表中序列6(5，UUCAAUUCUCUCUCCAUUC3，)。所述双链核酸经过2'氟代、2'甲氧基、硫代或2'脱氧化学修饰；优选的，所述双链核酸的在U和C碱基上采用2,甲氧基或2,氟代修饰。也可将所述双链核酸进行胆固醇修饰，方法是只对双链中的正义链进行5 ’端胆固醇修饰，同时对的正义链所有的C碱基采用2，甲氧基修饰。上述小核酸可作为主要活性成分用于制备治疗单纯疱疹病毒和/或人类乳头瘤病毒所致疾病的药物，特别是用于制备治疗HSV所致的口腔及生殖器病变和/或人类乳头瘤病毒HPV的感染和HPV所致宫颈癌病变的药物。 上述药物中，还包括选自下述I) -4)中的一种或两种以上的小核酸I)双链核酸，名称为siHPV16E7，其正义链序列为序列表中序列I (5’CUACUGUUAUGAGCAAUUATT3’)，其反义链序列为序列表中序列2(5，UAAUUGCUCAUAACAGUAGTT3')；2)双链核酸，名称为siHPV18E7，其正义链序列为序列表中序列3 (5’CCUUCUAUGUCACGAGCAATT3’)，其反义链序列为序列表中序列4(5，UUGCUCGUGACAUAGAAGGTT3，)；3)双链核酸，名称为siHPV58E7，其正义链序列为序列表中序列7 (5’CCCAACGCUAAGAGAAUAUTT3’)，其反义链序列为序列表中序列8(5’AUAUUCUCUUAGCGUUGGGTT3’ )；4)双链RNA，名称为HSV-I siICP27，其正义链序列为序列表中序列9 (5’GGACAUUGCAUCCUUCGUGTT3’)，其反义链序列为序列表中序列10(5，CACGAAGGAUGCAA腳CCTT3，)。所述双链核酸为化学合成(苏州吉玛)，可以进行2'氟代(2' -F),2 /甲氧基(2' -OMe)、硫代(PS)和2'脱氧(2' -deoxy)化学修饰，优选的修饰方法为2 ‘-O-Me修饰，即在所有的U和C两个碱基上采用2’ -O-Me修饰，A和G用普通未经修饰的。本专利技术提供的上述小核酸可以制备成抑制单纯疱疹病毒(HSV)和人类乳头瘤病毒(HPV)病毒的药物，具体可制备成小核酸温度敏感型凝胶制剂，该凝胶制剂包括温度敏感型凝胶和上述小核酸。所述温度敏感型凝胶为选自泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、聚乙二醇-PLGA嵌段共聚物、纤维素衍生物和胶原蛋白中的一种或两种以上任意组合；所述泊洛沙姆188的浓度为50-350mg/ml，所述泊洛沙姆407的浓度为100-500mg/ml，所述聚乙二醇-PLGA嵌段共聚物的浓度为100-350mg/ml，所述纤维素衍生物的浓度为l-300mg/ml。所述的纤维素衍生物选自甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素中的一种或两种以上任意组合。所述胶原蛋白的浓度为50-100mg/ml，所述胶原蛋白选用鱼皮和/或猪皮提取的胶原蛋白。所述温度敏感型凝胶以水为溶剂。所述小核酸温度敏感型凝胶制剂中还包括药学常用的辅料，如增溶剂，、矫味剂；所述小核酸温度敏感型凝胶中包括浓度为30-650mg/ml的增溶剂；所述增溶剂为选自乙醇、丙二醇、聚乙二醇、环糊精类、十二烷基硫酸钠和聚山梨酯类中的一种或两种以上任意组合，其中乙醇的浓度可为50-350mg/ml,丙二醇的浓度可为50-350mg/ml,聚乙二醇的浓度可为100-350mg/ml,环糊精类的浓度可为10-360mg/ml,十二烧基硫酸钠的浓度可为5-50mg/ml，聚山梨酯类的浓度可为5-50mg/ml ;所述聚乙二醇为选自PEG300、PEG400和PEG600中的一种或两种以上任意组合；所述环糊精类为选自α-环糊精、β-环糊精、羟丙基-β -环糊精、羟乙基-β -环糊精、二甲基-β -环糊精中的一种或两种以上任意组合；所述聚山梨酯类为选自吐温-80，吐温-60，吐温-85，吐温-40，吐温-20的一种或两种以上任意组合。为了改善所述温度敏感型凝胶的口味，所述温度敏感型凝胶中包括浓度为O. l-550mg/ml的矫味剂；所述矫味剂为选自鹿糖，山梨醇、甘露醇、木糖醇、丙二醇、甘油、薄荷油、薄荷脑、桔子香精和香蕉香精中一种或一种以上任意组合。所述小核酸温度敏感型凝胶的pH值为5. 0-9. O ；pH调节用试剂可为三乙醇胺和/或氢氧化钠和/或氢氧化钾。上述试剂均可从Sigma等试剂公司购买。上述小核酸温度敏感型凝胶制剂中，还可以包含其它药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”应当与本专利技术药物组合物中的凝胶和双链核酸分子相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物在本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种小核酸，是双链核酸，其正义链序列为序列表中序列5，其反义链序列为序列表中序列6。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张雅鸥，王纠，何杰，谢伟东，许乃寒，李颖，张佩琢，苏宏瑞，万刚，吕青，卢锦华，柳忠义，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，深圳南粤药业有限公司，苏州吉玛基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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