一种梯度胶及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种梯度胶及其制备方法，该梯度胶为SDS-PAGE梯度胶，由轻液和重液组成，轻液和重液均由以下成分(以体积百分比计)组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20-35％；A液：15-70％，双蒸水：0-60％，甘油：0-15％，AP：0.15-0.40％，TEMED：0.015-0.04％，且轻液和重液组成成分及含量不同，通过胶液配制、灌胶、清洗、聚合、拆胶、修整和封装制成。本发明专利技术制成的梯度胶外观较好，分辨率高，对样品分子组成的分析更为细致，获得更清晰的样品分子区带且稳定性好，无论是在电场继续作用下，还是存放一定时间后，各区带之间相对位置基本不变。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种凝胶及其制备方法，尤其涉及一种梯度胶及其制备方法。本申请中下列定义是指：轻液：梯度胶中浓度较低的胶液；重液：梯度胶中浓度较高的胶液；凝胶缓冲液(3.5×)：是指将配制的凝胶缓冲液标准液稀释3.5倍制得，本专利技术中其它类似表示意义均相同。
技术介绍
随着泳动距离的增加，单一浓度的凝胶在一些情况下难以发挥较好的作用，无法检测、分离全部样品分子。因此，目前梯度胶已广泛取代了单一浓度的凝胶。样品分子在这种梯度胶中泳动时，起初由于样品分子在孔径比它大的凝胶区域中泳动，各种大小不同的样品分子以各自不同的泳动率在电场中运动；但后来，当样品分子达到凝胶孔径小于样品分子大小的区域中时，样品分子就被凝胶孔限所阻，不同大小的样品分子之间形成稳定的区带，因此，梯度胶对样品分子组成的分析更为细致，获得更清晰的样品分子区带，即使电场在继续作用时，各区带之间也保持相对位置不变。因此，梯度胶不仅能进一步提高凝胶电泳的分辨率，还能在同一凝胶板中同时分离，分析大小相差很大的样品分子。同时，由于这种梯度胶系统中，凝胶的孔径大小成相应的梯度，用这种方法样品分子迁移后也不易再扩散，是一种较好的分析方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种外观、分辨率、重复性和稳定性好的梯度胶。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种梯度胶，所述梯度胶为SDS-PAGE梯度胶，所述SDS-PAGE梯度胶由轻液和重液组成，所述轻液和重液均由以下成分(以体积百分比计)组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20-35％；A液：15-70％，双蒸水：0-60％，甘油：0-15％，AP：0.15-0.40％，TEMED：0.015-0.04％，且所述轻液和重液组成成分及含量不同。在上述的一种梯度胶中，所述凝胶缓冲液是通过将262gBis-Tris溶于去矿物质水配制成1L的标准液，pH为6.2-6.6。在上述的一种梯度胶中，所述A液为30％的Acr-Bis水溶液，其中Acr与Bis的质量比为19:1。在上述的一种梯度胶中，所述梯度胶为4％-20％SDS-PAGE梯度胶。在上述的一种梯度胶中，所述4％-20％SDS-PAGE梯度胶的轻液由以下成分组成：凝胶缓冲液(3.5×)：23mL；A液：14mL，双蒸水：43mL，AP：300μL，TEMED：30μL；重液由以下成分组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20mL；A液：46mL，甘油：4mL，AP：200μL，TEMED：20μL。在上述的一种梯度胶中，所述梯度胶为8％-16％SDS-PAGE梯度胶。在上述的一种梯度胶中，所述8％-16％SDS-PAGE梯度胶的轻液由以下成分组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20mL；A液：15mL，双蒸水：39mL，AP：135μL，TEMED：13μL；重液由以下成分组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20mL；A液：30mL，双蒸水：7.5mL，甘油：7.5mL，AP：135μL，TEMED：13μL。本专利技术另一个目的在于提供上述梯度胶的制备方法，所述制备方法主要包括胶液配制、灌胶、清洗、聚合、拆胶、修整和封装；其中，所述胶液配制是按上述配方配制梯度胶的轻液和重液，其中，TEMED和AP在灌胶前加入，且添加顺序依次为TEMED、AP；所述灌胶的具体过程为：将配制好的梯度胶的轻液、重液置于梯度混合仪的相应容器内，同时打开磁力搅拌器进行搅拌，然后排除灌胶管内气体后当重液和轻液的高度一致时，打开梯度混合仪中间的阀门进行灌胶，液体达到灌胶槽顶部后停止灌胶。本专利技术梯度胶的制备过程中，灌胶前还要进行拼装夹具等准备工作，将胶夹表面的碎屑清理干净，扣紧卡扣，然后将梳子插好，梳子的光滑面朝向板子背面。然后将拼装好的夹具以数个为单位放入灌胶槽，保证有孔道标记的一面(背面)靠近灌胶槽的背面，且所有的胶夹保持同一方向，防止取胶时损坏胶孔。如留有空隙用挡板填充，安装灌胶阀门，确保连接处不漏液，然后加水检测确保灌胶槽不漏液，然后用清水清洗梯度混合仪，保证仪器通畅。本专利技术胶液是由丙烯酰胺聚合形成的高分子，而聚合反应是通过自由基聚合，因此就需要自由基，而本专利技术加入的AP就是作为引发剂产生自由基，TEMED则是催化AP产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。因此，在胶液配置过程中，TEMED和AP必须在灌胶前才加入胶液中，而且必须严格按照先添加TEMED而后添加AP的顺序，以保证聚合效果。本专利技术在灌胶过程中，先使胶液流出3-5滴后再将灌胶管接在灌胶槽阀上，以排除灌胶管内的气体，防止将气泡引入胶内。当重液和轻液的高度达到一致时，打开梯度混合仪中间的阀门进行灌胶，阀门一般控制在55-65度倾斜，当液体达到顶部后关闭，停止灌胶。在灌胶后采用清水清洗仪器，避免管道堵塞。灌胶完成后保证2-3h的聚合时间，聚合时不能移动灌胶槽，以免在胶未聚合前由于移动而影响所形成的梯度。聚合结束后将胶拆下并用清水冲洗干净。然后对胶进行修整，修整前首先进行目测，检查胶体是否有明显缺陷，包括：①、检查胶内是否含有气泡，若有气泡要把气泡赶走；②、检查胶体表面是否有条纹现象(有条纹现象则属于次品)；③、检查胶体下边缘是否完整且平整；④、检查胶板卡口是否干净(若不干净则用水冲洗干净)；⑤、检查胶孔是否在一直线上。胶体都符合要求后，才开始拔梳齿，且在拔梳齿时保证均匀用力，不能拔断，拔出后把气泡赶干净，同时检查胶柱是否完整竖直，切掉突出的胶柱部分，然后进行封装。在上述的一种梯度胶的制备方法中，所述封装是将修整后的梯度胶进行真空封装后置于4-8℃进行保存，且封装时加入300-500μL储存缓冲液。在上述的一种梯度胶的制备方法中，所述储存缓冲液由以下成分(以体积百分比计)组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20-35％；甘油：1-8％，100mmol/L的EDTA：0.1-5％，余量为去矿物质水。与现有技术相比，本专利技术具有以下几个优点：1.本专利技术梯度胶外观较好，表面无残胶，胶柱无倾斜并且所有胶柱的顶端和胶孔的底端都分别在同一水平线上，胶体表面无条纹，胶体底部无缺损。2.本专利技术梯度胶分辨率高，对样品分子组成的分析更为细致，获得更清晰的样品分子区带。3.本专利技术梯度胶稳定性好，无论是在电场继续作用下，还是存放一定时间后，各区带之间相对位置基本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种梯度胶，其特征在于，所述梯度胶为SDS‑PAGE梯度胶，所述SDS‑PAGE梯度胶由轻液和重液组成，所述轻液和重液均由以下成分(以体积百分比计)组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20‑35％；A液：15‑70％，双蒸水：0‑60％，甘油：0‑15％，AP：0.15‑0.40％，TEMED：0.015‑0.04％，且所述轻液和重液组成成分及含量不同。

【技术特征摘要】
1.一种梯度胶，其特征在于，所述梯度胶为SDS-PAGE梯度胶，
所述SDS-PAGE梯度胶由轻液和重液组成，所述轻液和重液均由以
下成分(以体积百分比计)组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20-35％；
A液：15-70％，双蒸水：0-60％，甘油：0-15％，AP：0.15-0.40％，
TEMED：0.015-0.04％，且所述轻液和重液组成成分及含量不同。
2.根据权利要求1所述的一种梯度胶，其特征在于，所述凝胶
缓冲液是通过将262g Bis-Tris溶于去矿物质水配制成1L的标准液，
pH为6.2-6.6。
3.根据权利要求1所述的一种梯度胶，其特征在于，所述A液为
30％的Acr-Bis水溶液，其中Acr与Bis的质量比为19:1。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种梯度胶，其特征在于，所
述梯度胶为4％-20％SDS-PAGE梯度胶。
5.根据权利要求4所述的一种梯度胶，其特征在于，所述
4％-20％SDS-PAGE梯度胶的轻液由以下成分组成：凝胶缓冲液
(3.5×)：23mL；A液：14mL，双蒸水：43mL，AP：300μL，TEMED：
30μL；重液由以下成分组成：凝胶缓冲液(3.5×)：20mL；A液：
46mL，甘油：4mL，AP：200μL，TEMED：20μL。
6.根据权利要求1或2或3所述的一种梯度胶，其特征在于，所
述梯度胶为8％-16％SDS-PAGE梯度胶。
7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑华安，
申请(专利权)人：宁波市鄞州华谦电子有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33