治疗病毒感染的方法及其药物技术

本发明专利技术涉及治疗病毒感染的方法及其中所用的药物。更特别地，本发明专利技术涉及治疗肝炎病毒或免疫缺陷病毒感染的方法以及其中所用的核酸、疫苗、融合蛋白、载体或细胞。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药
，具体而言，本专利技术涉及治疗病毒感染 的方法及其中所用的药物。更特别地，本专利技术涉及治疗肝炎病毒或免疫缺 陷病毒感染的方法以及其中所用的核酸、疫苗、融合蛋白、载体或细胞。
技术介绍
治疗或预防病毒感染是当前医学研究的重要而热门的课题。其中，病 毒的免疫耐受性为治疗或预防病毒感染带来了很大的困难。免疫耐受性以病毒的持续存在、B细胞和T细胞产生抗体和细胞免疫的能力下降或消 失为特征，使得病毒可有效的逃逸机体免疫，引起免疫耐受，使人体的免 疫机制不再对抗原产生免疫应答，使病毒在体内长期存在。例如，乙型肝炎病毒(HBV)是最典型的免疫耐受性病毒，染病母亲 所产90%新生儿成为病毒携带者，部分成人HBV患者也会形成乙肝的慢 性感染。HBV的持续性感染和抗原的过量表达以及病毒的变异往往导致 患者体内持续的病毒复制、胸腺中病毒特异的与免疫调节相关的Thl类 细胞被克隆剔除、外周血和肝脏中与病毒清除和感染细胞裂解相关的 CTL反应能力下降、消失或者克隆剔除。HBV的持续性感染以及与之相 关的肝硬化和肝癌对患者对社会造成了极大的经济和社会压力。HBV的 主要结构抗原包括表面抗原S，(包括糖基化的大抗原S1S2S，中抗原S2S 和小抗原S)和核心蛋白C，此外还有聚合酶P和调节蛋白e和x。 S和 C抗原可以引起中和抗体的产生。核心蛋白C相对保守，它产生的特异 的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对病毒清除具有重要意义。然而对HBV 来说，e抗原的大量表达能够使得Thl类细胞受到抑制，表面抗原的大量 表达使得免疫系统枯竭(exhausted)。丙型肝炎病毒(HCV)的免疫耐受机制与HBV不同，HCV多为低水平感染，不易产生活跃的免疫应答，此外HCV基因极易产生变异，造成免疫逃逸，产生持续性感染和免疫耐受。HCV多蛋白N末端191个氨基 酸为核心蛋白,是病毒核衣壳的主要成分。核心蛋白的N末端富含碱性氨 基酸且高度保守。核心蛋白后是病毒的包膜蛋白E1， E2，是高度糖基化 的I型跨膜蛋白。在所有HCV蛋白中，E2的保守性最弱，是免疫反应的 主要目标。大多数的HCV非结构蛋白(NS2-NS5B)为病毒基因组复制 所必需。HCV是一种高度变异的病毒，这种变异使得HCV在感染者体内 形成复杂多样的HCV准种群，有可能对机体抗病毒免疫应答产生影响。 免疫逃避株的形成则可能与病毒持续感染有关。免疫逃避的两种可能机 制(l)HCV对IFN应答的主动拮抗作用，如HCVNS3/4丝氨酸蛋白酶 可以阻断干扰素调节因子3的磷酸化和活性；E2和NS5蛋白能够抑制 RNA依赖性蛋白激酶的功能，从而影响IFN的抗病毒效应。(2) HCV蛋 白上B淋巴细胞或者T淋巴细胞抗原表位在机体免疫力下发生被动变异， 从而逃避适应性免疫应答的攻击。免疫缺陷病毒的典型代表是人免疫缺陷病毒(HIV)。 HIV通过感染 CD4T细胞，导致CD4+T淋巴细胞数量不断下降。另外，HIV感染还引 起B-细胞功能失调和NK细胞的细胞毒功能下降，使具有免疫功能的树 突状细胞(DC)的数量在血液中和组织中的分布和数量改变。HIV感染 还可引起中枢神经系统以及胃肠道等器官产生病变。由于免疫功能下降， 患者并发各种癌症和传染病的可能性大增，并最终导致获得性免疫缺陷综 合征(AIDS)。 HIV的结构基因包括gag (P55、 P17、 P24)、 Pol和env。 Pol基因编码聚合酶前体蛋白(P34)，经切割形成蛋白酶、整合酶、逆转 录酶、核糖核酸酶H，均为病毒增殖所必需。env基因编码约863个氨基 酸的前体蛋白，经糖基化形成gp160， gpl20和gp41。 gpl20含有中和抗 原决定簇，已证明HIV中和抗原表位在gpl20V3环上，V3环区是囊膜 蛋白的重要功能区，在病毒与细胞融合中起重要作用。gpl20与跨膜蛋白 gp41以非共价键相连。gp41参与靶细胞融合，促使病毒侵染细胞。实验 表明gp41亦有较强抗原性，能诱导产生抗体反应。HIV的调控基因至少 包括Tat、 Rev、 Nef、 Vif、 Vpu、 Vpr。 HIV的免疫治疗应该建立阻断病 毒持续侵染CD4+T细胞的机制，抑制感染细胞内部HIV的持续复制并产生中和抗体和CTL反应。为了治疗或预防病毒感染，人们已经开发了多种治疗或预防病毒感染的疫苗。例如，对于HBV， HBV的预防性表面抗原疫苗得到了广泛的应 用并在很大程度上降低了 HBV的感染，但此种疫苗却不能治疗HBV的 慢性感染。传统治疗HBV感染的方法包括a-IFN以及化学药物，它们在 控制病毒的复制方面具有重要的作用，但是却不能有效地清除病毒 (Seegerand Mason 2000)。单一策略的DNA疫苗虽然因为能够诱发细胞和 体液免疫而受到重视，但是DNA疫苗在小动物实验中的结果却不能在大 动物身上实现(Payette et al. 2006; Zhao et al. 2006)。随着对HBV以及其诱发疾病研究的深入，已经有部分的临床实验采用化学药物和蛋白疫苗结合 的综合性疗法，虽取得了一定的成果(Yang, Lee etal. 2006)，但传统药物 在克服病毒变异造成的免疫逃逸、降低病毒复制和恢复机体的CTL反应 能力方面还没有乐观的报道。至今尚无被批准的HBV治疗性疫苗问世。 对于HCV， HCV引起的丙型肝炎，其感染的慢性化率高达60-80%， 并导致肝硬化和肝癌。HCV主要通过输血传染，血液的严格检查可控制 HCV新感染的发生率，根据上述情况，HCV的疫苗研究主要是针对治疗 性疫苗的研究。由于HCV基因高度可变，又缺乏合适的细胞培养系统和 小动物模型，有效的重组疫苗研发受到阻碍.尽管如此，基因疫苗，多肽 和蛋白质疫苗，基于DC细胞的疫苗和类病毒颗粒疫苗等研究都被广泛关 注(Manns etal. 2001 )。丙型肝炎的实验疫苗起步时，不外乎传统意义上 的疫苗策略，即寻找特异的抗原成分，来免疫宿主以期获得中和性或保护 性抗体。在研究中，以重组E1/E2蛋白免疫猩猩能诱导高滴度抗膜蛋白 (anti-envelope)抗体产生但只能保护动物免受低价病毒侵害(Foms etal, 1998;Zhoueta1. 2000; Lee etal 1998)。基因疫苗于1992年首先报道，近 来发展迅速，该技术将编码抗原的DNA直接注射到宿主肌肉或皮内，能 诱导特异性体液免疫以及更广谱的细胞免疫应答，HCV全基因组序列的 测序使得HCV基因疫苗的研究逐步深入(Jiao et al. 2004)，但重组DNA 疫苗的应用同样受到载体特征的限制。HCV疫苗面临的挑战，仍然是病 毒蛋白的高变性，尤其是包膜蛋白的变异更为主要，而与HCV相关的LDL 蛋白又使得大部分病毒颗粒具有不可中和性，成为疫苗研究的挑战。由于HCV中和抗体的弱保护活性、病毒的高度变异性以及机体免疫功能的破坏，单一策略的疫苗研究思路在HCV的免疫治疗中不能产生重要的治疗 作用(Inchauspe et al. 2003)。 HCV临床研究的现状迫切需要人们确立一种 按照病毒侵染过程和机体免疫反应为特征的综合性治疗策略。对于HIV，自20世纪80年代初发现艾滋病之后，人们本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗病毒感染的方法，其包括，ａ）给药抑制病毒复制的核酸，通过ＲＮＡ干涉来抑制病毒复制，所述核酸包含编码ＲＮＡ干涉序列的核酸序列；和ｂ）给药引发针对病毒的免疫应答的疫苗，由此清除病毒，所述疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列。

【技术特征摘要】
1.治疗病毒感染的方法，其包括，a)给药抑制病毒复制的核酸，通过RNA干涉来抑制病毒复制，所述核酸包含编码RNA干涉序列的核酸序列；和b)给药引发针对病毒的免疫应答的疫苗，由此清除病毒，所述疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列。2. 前述权利要求之任一所述的方法，其中病毒是肝炎病毒，优选是 HBV。3. 前述权利要求之任一所述的方法，其中病毒是免疫缺陷病毒，优选是mv-i。4. 权利要求3所述的方法，其中可进一步包括给药阻断病毒侵染细胞 的融合蛋白来阻断病毒侵染细胞，所述融合蛋白包含HR1和至少两个 HR2。5. 前述权利要求之任一所述的方法，其中抑制病毒复制的核酸包含编 码RNA干涉序列的单链正义核酸序列及其反义序列，所述正义核酸序列 及其反义序列通过接头核酸相连。6. 前述权利要求之任一所述的方法，其中引发针对病毒的免疫应答的 疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列，并包含非特异性 免疫刺激蛋白或编码其的核酸序列。7. 抑制病毒复制的核酸和引发针对病毒的免疫应答的疫苗的组合在 制备治疗病毒感染的药物中的应用，其中所述核酸包含编码RNA干涉序 列的核酸序列，所述疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序 列。8. 前述权利要求之任一所述的应用，其中病毒是肝炎病毒，优选是 HBV。9. 前述权利要求之任一所述的应用，其中病毒是免疫缺陷病毒，优选是mv-i。10. 权利要求9所述的应用，其中组合中可进一步包括阻断病毒侵染细胞的融合蛋白，所述融合蛋白包含HR1和至少两个HR2。11. 前述权利要求之任一所述的应用，其中抑制病毒复制的核酸包含 编码RNA干涉序列的单链正义核酸序列及其反义序列，所述正义核酸序 列及其反义序列通过接头核酸相连。12. 前述权利要求之任一所述的应用，其中引发针对病毒的免疫应答 的疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列，并包含非特异 性免疫刺激蛋白或编码其的核酸序列。13. —种治疗病毒感染的药物组合物，其包括抑制病毒复制的核酸和 引发针对病毒的免疫应答的疫苗，其中所述核酸包含编码RNA干涉序列 的核酸序列，所述疫苗包含病毒抗原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列。14. 前述权利要求之任一所述的药物组合物，其可进一步包括阻断病 毒侵染细胞的融合蛋白，所述融合蛋白包含HR1和至少两个HR2。15. —种治疗病毒感染的药品，其包括，a) 装有抑制病毒复制的核酸的容器，所述核酸包含编码RNA干涉序 列的核酸序列；和b) 装有引发针对病毒的免疫应答的疫苗的容器，所述疫苗包含病毒抗 原、病毒抗原表位或编码其的核酸序列。16. 前述权利要求之任一所述的药品，其可进一步包括阻断病毒侵染 细胞的融合蛋白的容器，所述融合蛋白包含HR1和至少两个HR2。17. 前述权利要求之任一所述的药品，其可进一步包括标签。18. —种抑制病毒复制的核酸，其包含编码RNA干涉序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：田波，张玉霞，刘长梅，高福，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]