牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途制造技术

本发明专利技术公开了牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。牛角瓜通过乙醇提取，用石油醚进行萃取，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂（Ｄ１０１）柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇部位，经实验证明，提取所得到的甲醇部位具有抗肿瘤细胞的作用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药用植物新的医疗用途，尤其是牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中 的新用途，属于中药、天然药物领域。
技术介绍
牛角瓜[Ca/ofra; 'g7'gafra (L.) Dryand ex Ait. f.]为萝摩禾斗(Asclepiadaceae)牛角瓜属 (Cfl/Wra/^)植物。别名五狗卧花、羊浸树、断胲草。牛角瓜属植物全世界共有6个种，分 布于东南亚。我国产牛角瓜和白花牛角瓜2种，分布于海南、云南、广东和广西等地，生长 于低海拔向阳山坡、旷野和海边。牛角瓜根、茎、叶、果各部及白色汁液均有大毒和强烈的 刺激性，食少量能引起呕吐和下泻，食大量则会发生严重的腹痛及肠炎，以致死亡，妊娠的 人畜中毒引起流产。牛角瓜入药可用作发汗剂、除痰剂、驱虫剂、驱风剂和强心剂，用于治 疗湿疹、麻疯病、梅毒、象皮病、哮喘等病症。目前，已从牛角瓜植物中分离出50余种化合物，其中强心苷类化合物为主要的化学成分 (《现代本草纲目》(上巻)，2001年版)。至今文献报道多为牛角瓜强心苷类化合物在抗肿瘤 等方面的研究和应用(《Journal of Natural Product》，2006， 69: 1249;《Chemical Pharmaceutical Bulletin》，1998， 46: 528)，公开专利PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING USCHARIDIN OR ITS ANALOGUES(US 6342490 Bl)涉及强心苷抗肿瘤活性的研究，一 种治疗癌症的强心苷类化合物及其制备方法(专利CNI414010A)涉及强心苷类化合物提取 新工艺等。癌症是一组可影响身体任何部位的100多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和 肿瘤。癌症是全世界一个主要死亡原因。在2005年全世界5800万死亡总数中，癌症占所有 死亡的760万(或13%)。导致癌症总死亡率的主要癌症种类为肺(130万死亡/年)，胃(约 100万死亡/年)，肝(662 000死亡/年)，结肠(655 000死亡/年)，乳腺(502 000死亡/年)。 目前的治疗手段为临床用药从单一药物治疗过渡到多药联合化疗，但是，绝大多数的治疗仅 能延长生命而不能根除病症，伴随治疗产生的许多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得 患者的免疫系统受到损害。目前从天然药物中寻找抗肿瘤药物是研究的热门课题。 一些中草 药的提取物如延命素(《云南植物研究》，2006， 28: 95)、牡荆苷(《热带亚热带植物学报》， 2008， 16: 51)、亚油酸(《上海医学》，1994， 17: 635)等具有抗肿瘤的活性，其化学结构 包括二萜、黄酮苷、有机酸等。大蒜、蘑菇、灵芝和人参等已被许多国家用于癌症治疗。本专利技术所述的牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，至今尚未见文献报道和 专利公开。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供牛角瓜新的医疗用途，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的 用途。本专利技术的内容是牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，所述用途特征在于1、 牛角瓜提取物可通过下述步骤获得牛角瓜干燥根，适当粉碎后用8-11倍量95%乙醇室温浸 泡提取3次，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取 物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液经过滤后上大孔吸附 树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓縮得到甲醇浸膏B。浸膏 A、 B干燥即得牛角瓜提取物A、牛角瓜提取物B; 2、牛角瓜提取物B和/或牛角瓜95。/。乙醇 提取物，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸 剂、口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。牛角瓜提取物B经薄层层析，用强心苷显色剂显色，显示牛角瓜提取物B含有强心苷类 化合物。本专利技术的牛角瓜提取物B，经体外活性筛选，统计处理结果显示有较好的抗肿瘤活性。 为了进一步验证牛角瓜及其提取物在治疗肿瘤方面的功效，对牛角瓜提取物B进行了 100例 病人初步的临床疗效观察，结果表明牛角瓜提取物B是有效的。由牛角瓜提取物B的体外活 性筛选和病人初步临床疗效观察结果，可以合理推导牛角瓜及其提取物可用于制备抗肿瘤药 物，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途。本专利技术的有益效果是提供了牛角瓜在民间通常用于制备治疗湿疹、麻疯病等药物以外的 新的医疗用途，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途，并采用不同的溶媒萃取 得到牛角瓜提取物B，牛角瓜提取物B添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成 口服和注射药物制剂。下面是牛角瓜提取物B的体外活性筛选和病人初步临床疗效观察试验及其结果。一、体外活性筛选 试验方法采用MTT法测试了牛角瓜提取物B对人体的胃癌细胞SGC-7901、慢性骨髓性白血病细 胞K562、人口腔表皮癌细胞KB、骨纤维肉瘤HT-1080、骨肉瘤(G-292、 KHOS/NP)、前列腺癌LNCap、胃腺癌(KKLS、 MKN-28、 MKN-45)等细胞株的体外抑瘤活性(结果见附表1)。活 性测试方法如下实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和 8个不同浓度(0.8， 1.6， 3.2, 6.3, 12.5， 25， 50， 100 )的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数 生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置 于5%(:02、湿度90%以上、37'C培养箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续 培养3 d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5 mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS) 50 ^L， 37 'C反应4 h后，将细胞培养液吸出， 每孔加入100 pL DMSQ将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570 nm 波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。用药组平均A值生长抑制率(％) =(1-)xl00%阴性对照组平均A值以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50%时样品的浓度(1<:5())，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。实验结果.-附表1样品对SGC-7901、 K562等肿瘤细胞株的毒性作用Cell lineHuman originIC50(//g/ml)牛角瓜提取物BSGC-7卯1Gastric cancer7.0K562Chronic myelogenous leukemia3.3KBOral epidermoid carcinoma0.16HT-1080Fibrosarcoma0.20G-292Osteosarcoma0.29KHOS/NPOsteosarcoma0.033LNCapProstate adenocarcinoma0.70KKLSGastric adenocarcinoma0.14MKN-28Gastric adenocarcinoma0.23MKN-45Gastric adenocarcinoma0.43注毒性值IC5fl,即药物对细胞杀灭50%时的浓度值。IC5本文档来自技高网...

【技术保护点】
牛角瓜在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于所述牛角瓜为萝藦科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）牛角瓜属（Ｃａｌｏｔｒｏｐｉｓ）植物牛角瓜（Ｃａｌｏｔｒｏｐｉｓ　ｇｉｇａｎｔｅａ），药用全株。

【技术特征摘要】
1、牛角瓜在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于所述牛角瓜为萝藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜属(Calotropis)植物牛角瓜(Calotropis gigantea)，药用全株。2、 牛角瓜提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于牛角瓜提取物可通过下述步 骤获得牛角瓜干燥根，适当粉碎后用8-11倍量^5%乙醇室温浸泡提取3次，也可渗漉提取，将 提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油 醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴好富，王祝年，王茂媛，梅文莉，吴娇，曾艳波，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]