用于对流行性感冒进行治疗以及诊断的组合物以及方法技术

本发明专利技术提供了新的人类抗流行性感冒抗体以及相关的组合物和方法，其中所述的抗体与一种基质２蛋白（Ｍ２）同型四聚体的构象抗原决定簇发生了结合。这些抗体被用在流行性感冒感染的诊断以及治疗当中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及对流行性感冒感染的治疗、诊断以及监控。本专利技术更加具体的 涉及到识别流行性感冒基质2蛋白-特异性抗体的方法以及它们的制造和使用。这样的抗 体可以被有效的用在药物组合物中，用于对流行性感冒进行预防以及治疗，并且用于对流 行性感冒的感染进行诊断以及监控。
技术介绍
在美国，流行性感冒病毒每年感染了 5-20%的人群并且导致30000-50000例的死 亡。尽管流行性感冒疫苗是预防感染的首要方法，在美国同样可以利用四种抗病毒药物 金刚烷胺(amantadine)，金刚乙胺(rimantadine)，奥司他韦(oseltamivir)以及扎那米韦 (zanamivir)。到2005年12月为止，仅仅奥司他韦(TAMIFLU )被推荐用来进行A型流行 性感冒的治疗，这是因为所述病毒对金刚烷胺以及金刚乙胺的抗性增强，这种抗性的增强 是由于存在于所述病毒的M2蛋白中的氨基酸取代而产生的。由A型流行性感冒的病毒感染而引发的疾病以其周期性的性质为代表。抗原的漂 变以及漂移使得每年有不同的A型菌株出现。不仅如此，所述的高度致病性的菌株侵入普 遍人群中的威胁加强了对于流行性感冒感染的新的治疗方法的需求。所述的中和抗体的主 要片段指向所述的红血球凝集素以及神经氨糖酸苷酶蛋白的多态性区域。因此，这样的一 种中和性的单克隆抗体大概应当仅仅能够命中一个或者几个菌株。近来的焦点专注于相对 而言不变的基质2(M2)蛋白。一种作用于基质2蛋白(M2)的中和性单克隆抗体可能应当 适合于对所有的A型流行性感冒菌株进行治疗。在一种形成离子通道的同型四聚体中发现了所述的基质2蛋白(Μ》，并且其被认 为能够帮助所述的病毒在进入所述细胞中时脱除外壳。在发生感染之后，可以在所述的细 胞表面上找到丰富的基质2蛋白。随后其被导入到所述的病毒粒子外壳中，在所述的病毒 粒子外壳中仅仅包括全部外壳蛋白的大约2%。所述的基质2蛋白的细胞外结构域(Mk) 很短，所述的氨基末端上的2-M个氨基酸陈列在所述的细胞之外。抗基质2蛋白单克隆抗 体(Anti-M2 MAb)迄今为止已经作用于这种线性序列。因此，它们对于细胞表达的基质2 蛋白不会表现出期望的结合性质，包括在天然的基质2蛋白的构象抗原决定簇上的结合。因此，在本领域存在一种对于新的抗体的长期需求，其中所述的抗体能够与所述 的细胞表达的基质2蛋白以及所述的天然基质2蛋白的构象抗原决定簇进行结合。
技术实现思路
本专利技术提供了完全人类单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体能够特异性的作用于 基质2蛋白的细胞外结构域(Mk)。任选的，所述的抗体是从人类供体的B细胞中分离得 到的。范例性的单克隆抗体包括本专利技术中所描述的8ilO，21B15以及23K12。可以选择的， 所述的单克隆抗体是一种这样的抗体，其与8il0，21B15以及2112在同样的表位上进行结 合。所述的抗体在本专利技术中分别被称为人类基质2蛋白细胞外结构域(huM2e)抗体。所述 的人类基质2蛋白细胞外结构域(huM2e)抗体具有下述性质中的一种或者多种a)在一种 流行性感冒病毒的基质2细胞外结构域(Mk)多肽的细胞外结构域中的表位上进行结合； b)与感染了 A型流行性感冒的细胞进行结合；或者c)与A型流行性感冒病毒进行结合。所述的人类基质2蛋白细胞外结构域(huM2e)抗体结合的表位是一种基质2蛋 白多肽的非线性表位。优选的，所述的表位包括所述的基质2蛋白细胞外结构域(Mk)多 肽的氨基末端区域。更加优选的，所述的表位完全的或者部分的包括所述的氨基酸序列 SLLTEV(序列识别号4 。最为优选的，所述的表位包括存在于所述的基质2蛋白细胞外 结构域(Mk)多肽的位置2、5以及6上的氨基酸，其中所述的编号与序列识别号1中的编 号一致。所述的存在于位置2处的氨基酸是丝氨酸；存在于位置5处的氨基酸是苏氨酸；并 且存在于位置6处的氨基酸是谷氨酸。一种人类基质2蛋白细胞外结构域(huM2e)抗体中含有重链可变区域以及轻链可 变区域，其中所述的重链可变区域中含有序列识别号44或者50中所示的氨基酸序列，并 且所述的轻链可变区域中含有序列识别号46或者52中所示的氨基酸序列。优选的，所述 的三个重链互补决定区域(CDR)中包括一种氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列与下述氨 基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更高的同一性NYYWS(序列识别 号72)，FIYYGGNTKYNPSLKS (序列识别号74)，ASCSGGYCILD (序列识别号76)，SNYMS (序 列识别号:103), VIYSGGSTYYADSVK (序列识别号:105)，CLSRMRGYGLDV (序列识别号:107) (通过Kabat方法进行测定)或者ASCSGGYCILD(序列识别号76) ,CLSRMRGYGLDV(序列识别 号107)，GSSISN(序列识别号109)，FIYYGGNTK (序列识别号:110)，GSSISN(序列识别号 111)，GFTVSSN(序列识别号112)，VIYSGGSTY (序列识别号:113)(通过Chothia方法进行 测定)，并且所述的三个轻链互补决定区域(CDR)中包括一种氨基酸序列，其中所述的氨基 酸序列与下述氨基酸序列具有至少90^^92^^95^^97^^98^^99%或者更高的同一性 RASQNIYKYLN(序列识别号59)，AASGLQS (序列识别号61)，QQSYSPPLT (序列识别号63)， RTSQSISSYLN(序列识别号92) ,AASSLQSGVPSRF(序列识别号94)，QQSYSMPA(序列识别号 96)(通过Kabat方法进行测定)或者RASQNIYKYLN(序列识别号59)，AASGLQS (序列识别 号61)，QQSYSPPLT (序列识别号63)，RTSQSISSYLN(序列识别号92)，AASSLQSGVPSRF (序 列识别号94)，QQSYSMPA (序列识别号96)(通过Chothia方法进行测定)。所述的抗体与 基质2蛋白的细胞外结构域(M2e)进行了结合。所述的基质2蛋白的细胞外结构域(M2e)抗体的重链来自于一种生殖系V(可变 的)基因，例如，所述的免疫球蛋白重链可变区域4(IgHV4)生殖系基因或者免疫球蛋白重 链可变区域3生殖系基因。本专利技术所述的基质2蛋白的细胞外结构域(M2e)抗体包括可变的重链(Vh)区域， 其中所述的重链区域是由人类免疫球蛋白重链可变区域4(IgHV4)生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列进行编码的。免疫球蛋白重链可变区域4生殖系 基因序列在例如 Accession numbers (登录号)L10088、]\C9812、M95114、X56360 以及M95117 中有所表示。免疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列在例如Accessiormumbers (登录 号)X92218、X70208、Z27504、M99679以及AB019437中有所表示。本专利技术所述的基质2蛋 白的细胞外结构域(M2e)抗体包括一个由一种核酸序列编码的重链可变区域，其中所述的 核酸序列与所述的免疫球蛋白重链可变区域4生殖系基因序列或者免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的完全人类单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体具有下述的特征：ａ）与存在于一种流行性感冒病毒的基质２蛋白细胞外结构域（Ｍ２ｅ）多肽的细胞外结构域之中的表位进行结合；ｂ）与感染有Ａ型流行性感冒的细胞进行结合；以及ｃ）与Ａ型流行性感冒病毒进行结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AG格兰德，G金，T考克斯，O奥尔森，J米特查姆，M默勒，
申请(专利权)人：特罗科隆科学有限公司，
类型：发明
国别省市：US