粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)中和抗体制造技术

所述发明专利技术提供一种粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)中和人类单克隆抗体，1783J22，及其制造和应用的方法。所述单克隆抗体进一步的特点在于其结合来自不同种族的粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)蛋白质抗原决定簇的能力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求2009年4月23日递交的临时申请USSN 61/172,120和2009年8月18日递交的USSN 61/234,946的权利。这些申请的内容分别通过引证全部并入本文。
本专利技术主要涉及免疫学和医学领域。具体地说，该专利技术涉及包括粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)中和的人类单克隆抗体1783J22的组合物，以及制造和使用这种抗体的方法。
技术介绍
血液细胞形成的控制大部分是通过一群相互作用的糖蛋白来调节的，这种相互作用的糖蛋白被命名为菌落刺激因子(CSFs)。粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)是一种可溶性分泌糖蛋白，它是一种有效的免疫调节性细胞因子，已知能够促进由体液引起的免疫性和细胞调节的免疫性的发展和持续时间。粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)还在很多人类疾病的发生和发展中发挥作用，例如，癌症、炎症性疾病和自身免疫疾病、和退行性疾病。因此，对于能够对抗或者抑制粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)活性的治疗性组合物和方法领域存在长期的需要。尽管人们已经付出很多努力去生产对粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)具有特异性的抗体，例如，通过制备多克隆抗体和单克隆抗体，但是，没有人已经成功的创造出能够有效抑制GM-CSF活性的治疗有效的人类抗体组合物。本专利技术提供了用于抑制或者中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)活性的组合物和方法，并且，因此，成功的解决了在该领域的长期需要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种分离的人类单克隆抗体，这种分离的人类单克隆抗体能够特异性结合并中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)。本专利技术的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)单克隆抗体是通过一种方法获得的，这种方法包括(a)从供体外周血液单核细胞(PBMC)样品中筛选记忆B细胞，用于中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)的活性，和(b)从中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)的记忆B细胞培养基中强行回收单克隆抗体。选择性地，该方法进一步包括培养一种能够表达从所述B细胞中分离出来的抗体和分离抗体的固定化B细胞克隆株。本专利技术提供了一种分离的全人类单克隆抗体，其中，这种单克隆抗体具有下列特征：(a)与粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)蛋白质的抗原决定簇特异性结合；和(b)体外中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)生物活性。在一些实施方案中，这些抗体从来自人类供体的B细胞中分离出来。在一些实施方案中，其中，这些抗体与一种治疗剂或者可检测的标记物可操作的相连。在一些实施方案中，所述抗原决定簇是线性的、非线性的、或者是不连续的。例如，所述抗原决定簇是一种线性的氨基酸多肽或者一种能够反映粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)蛋白质天然构想的折叠多肽。作为选择，所述抗原决定簇是一种构象性的或者非连续的抗原决定簇，这种抗原决定簇只有当粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)抗体是折叠、排列为同型二聚体的时候才能够被识别，或者当粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)氨基酸序列的不连续部分维持一种特定的三维形式，使用一种附属结构来模仿天然表面(举例来说举例来说，通过使用一种夹片(CLIP))时，才能够被识别。这种抗原决定簇是能够与本专利技术抗体结合的免疫原性多肽或者糖肽。在一种优选的实施方案中，该抗体是1783J22。作为选择，或者另外，该抗体是1783J22抗体的同型克隆。举例来说，所述同型克隆包括不同的重链核酸序列和轻链核酸序列，这种不同的重链核酸序列或者轻链核酸序列会产生与1783J22抗体一致的重链氨基酸序列或者轻链氨基酸序列。在本专利技术的其他方面，同型克隆的重链和轻链的氨基酸序列与1783J22抗体重链或者轻链的氨基酸序列具有70％、75％、80％、85％、90％、95％95％、100％或者在此范围内任意百分比的一致性。本专利技术提供了一种抗体，这种抗体能够与1783J22结合相同的抗原决定簇。本专利技术提供了一种分离的全人类单克隆抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)抗体抗体或其碎片，其中所述抗体包括一种可变重链(VH)区域，这种可变重链(VH)区域包括CDR1和和CDR2，其中该区域是通过人类IGHV3-23VH生殖系序列编码编码的，或者使通过与IGHV3-23VH生殖系基因序列同源的核酸序列编码的。在一些实施方案中，与IGHV3-23VH生殖系基因序列同源的核酸序列与IGHV3-23VH生殖系基因序列具有至少90％的同源性。这些抗体进一步包括一种可变轻链(VL)区域，这种可变轻链区域是通过人类IGKV1-16VL生殖系基因序列编码的，或者是通过与人类IGKV1-16VL生殖系基因序列同源的序列编码的。在一些实施方案中，与IGKV1-16VL生殖系基因序列同源的核酸序列与IGKV1-16VL生殖系基因序列具有至少90％的同源性。本专利技术提供了一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的重链和含有三个CDRs的轻链，所述重链的三个CDRs包括从由氨基酸序列FPFHKYTMT(SEQ ID NO：8)、VSGVNGKTYYSPSVRG(SEQ ID NO：9)和GPGGHLHYYYGLDV(SEQ ID NO：10)所组成的组中选择出来的氨基酸序列，所述轻链的三个CDRs包括从由氨基酸序列RASQAINNYVA(SEQ ID NO：14)、GASNLQP(SEQ ID NO：15)和QNYFGYPLT(SEQ ID NO：16)所组成的组中选择出来的氨基酸序列。本专利技术还提供了一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CSF)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的重链和含有三个CDRs的轻链，所述重链的三个CDRs包括从由氨基酸序列GFPFHKYTMT(SEQ ID NO：11)、VSGVNGKTY(SEQ ID NO：12)和GPGGHLHYYYGLDV(SEQ ID NO：10)所组成的组中选择出来的氨基酸序列，所述轻链的三个CDRs本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.04.23 US 61/172,120;2009.08.18 US 61/234,9461.一种分离的全人类单克隆抗体，其中，所述单克隆抗体具有
下列特性：
(a)特异性结合粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(G
M-CSF)蛋白质的抗原决定簇；以及
(b)体外中和粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-
CSF)的生物活性。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是从一种来源于
人类供体的B细胞分离出来的。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗原决定簇是线性，
非线性的，或者是不连续的。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是1783J22。
5.一种与1783J22结合相同抗原决定簇的抗体。
6.一种分离的全人类单克隆抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺
激因子(GM-CSF)抗体或其片段，其中，所述抗体包括一
种可变重链区域(VH)，这种可变重链(VH)区域包括CD
R1和CDR2，其中，所述区域是由人类IGHV3-23VH生
殖系序列编码的，或者是由与所述VH生殖系基因序列的核
酸序列编码的。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述的与IGHV3-23V
H生殖系序列同源的核酸序列与IGHV3-23VH生殖系序
列至少90％是相同的。
8.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体进一步包括一种
可变轻链(VL)区域，这种可变轻链(VL)区域是由人类I
GKV1-16VL生殖系基因序列所编码的，或者是由与所述
VL生殖系基因序列同源的核酸序列所编码的。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述的与IGKV1-16VL
生殖系序列同源的核酸序列与所述IGKV1-16VL生殖系
序列至少90％是相同的。
10.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-
CSF)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的重链和
含有三个CDRs的轻链，所述重链的三个CDRs包括从由氨
基酸序列FPFHKYTMT(SEQ ID NO：8)、VSGVNGKTY
YSPSVRG(SEQ ID NO：9)和GPGGHLHYYYGLDV(S
EQ ID NO：10)所组成的组中选择出来的氨基酸序列，所
述轻链的三个CDRs包括从由氨基酸序列RASQAINNYVA
(SEQ ID NO：14)、GASNLQP(SEQ ID NO：15)和Q
NYFGYPLT(SEQ ID NO：16)所组成的组中选择出来的
氨基酸序列。
11.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CS
F)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的重链和含
有三个CDRs的轻链，所述重链的三个CDRs包括从由氨基
酸序列GFPFHKYTMT(SEQ ID NO：11)、VSGVNGKTY
(SEQ ID NO：12)和GPGGHLHYYYGLDV(SEQ ID 
NO：10)所组成的组中选择出来的氨基酸序列，所述轻链
的三个CDRs包括从由氨基酸序列RASQAINNYVA(SEQ I
D NO：14)、GASNLQP(SEQ ID NO：15)和QNYFGY
PLT(SEQ ID NO：16)所组成的组中选择出来的氨基酸序
列。
12.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-
CSF)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的重链，
所述重链的三个CDRs包括从由氨基酸序列FPFHKYTMT(S
EQ ID NO：8)、VSGVNGKTYYSPSVRG(SEQ ID NO：
9)、GPGGHLHYYYGLDV  (SEQ ID NO：10)、GFPFH
KYTMT(SEQ ID NO：11)、和VSGVNGKTY(SEQ ID 
NO：12)所组成的组中选择出来的氨基酸序列，其中，所
述的抗体结合粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-
CSF)。
13.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CS
F)抗体，其中，所述抗体具有含有三个CDRs的轻链，所
述轻链的三个CDRs包括从由氨基酸序列RASQAINNYVA
(SEQ ID NO：14)、GASNLQP(SEQ ID NO：15)和Q
NYFGYPLT(SEQ ID NO：16)所组成的组中选择出来的
氨基酸序列，其中，所述的抗体结合粒性白血细胞-巨噬细胞
菌落-刺激因子(GM-CSF)。
14.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-
CSF)抗体，其中，所述抗体抗体包括一种VH CDR1区域、
一种VH CDR2区域、一种VH CDR3区域、一种VL CDR
1区域、一种VL CDR2区域和一种VL CDR3区域。其中，
所述VH CDR1区域包括FPFHKYTMT(SEQ ID NO：8)
的氨基酸序列；所述VH CDR2区域包括VSGVNGKTYYSP
SVRG(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列；所述VH CDR3
区域包括GPGGHLHYYYGLDV(SEQ ID NO：10)的氨
基酸序列；所述VL CDR1区域包括RASQAINNYVA(SEQ 
ID NO：14)的氨基酸序列；所述VL CDR2区域包括G
ASNLQP(SEQ ID NO：15)的氨基酸序列；并且，所述V
L CDR3区域包括QNYFGYPLT(SEQ ID NO：16)的氨
基酸序列。
15.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌落-刺激因子(GM-CS
F)抗体，其中，所述抗体抗体包括一种VH CDR1区域、
一种VH CDR2区域、一种VH CDR3区域、一种VL CDR
1区域、一种VL CDR2区域和一种VL CDR3区域。其中，
所述VH CDR1区域包括GFPFHKYTMT(SEQ ID NO：1
1)的氨基酸序列；所述VH CDR2区域包括VSGVNGKTY
(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列；所述VH CDR3区域
包括GPGGHLHYYYGLDV(SEQ ID NO：10)的氨基酸
序列；所述VL CDR1区域包括RASQAINNYVA(SEQ ID 
NO：14)的氨基酸序列；所述VL CDR2区域包括GASNL
QP(SEQ ID NO：15)的氨基酸序列；并且，所述VL C
DR3区域包括QNYFGYPLT(SEQ ID NO：16)的氨基酸
序列。
16.一种分离的抗粒性白血细胞-巨噬细胞菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宝瑛，S·弗雷，A·G·格兰德，T·C·考克斯，
申请(专利权)人：特罗科隆科学有限公司，
类型：发明
国别省市：