用于调控细胞存活的方法技术

本说明书公开了多种增强或保持血小板的生存能力或寿命期的方法，该方法包括施用对细胞凋亡进行负调控的制剂。本说明书还公开了降低血小板的存活、寿命期或生存能力的方法，该方法包括施用有效量的能够增强细胞凋亡的制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及信息的实际应用，所述的信息是关于血小板调节领域中的细胞凋亡的调节。具体而言，本专利技术涉及Bcl-2家族的成员、 它们的调节剂、以及更宽泛而言的能够有效调控细胞凋亡的药理学 制剂。本专利技术提供了新的靶标、方法和制剂以用于调控与血小板或 其前体有关的相互作用。具体而言，本专利技术思考了在治疗或预防与 遗传性或获得性血小板增多或血小板减少(例如但不限于血管病或 出血疾病)有关的状况时使用的方法和制剂。本专利技术进一步涉及制 备和储存血液和血液衍生物的方法和制剂、以及调控尤其是血小板 更新率、止血、凝块形成、组织重塑和痊愈的方法。
技术介绍
在本叙述内容的结尾处收集了在本说明书中作者所引用的出 版物的目录详情。的信息)或者引用任何已知的事物，不能并且不应该成为承认或者 以任何方式提示，这些现有的出版物(或者由该出版物所得到的信 息)或者已知的事物形成了本说明书所涉及的致力领域中的一部分 公知常识。血小板是在血液中循环的巨核细胞的无核小碎片，并且主要参 与诸如血液凝结和伤口痊愈之类的功能。血小板由巨核细胞产生， 其中所述的巨核细胞为在骨髓和脾中发育形成的大型多倍体细胞。 巨核细胞脱落下血小板，从而进入到血流中，血小板循环大约10天 (人)(Leeksma a/. ， Nature, 〃J: 552-553， 1955 )，然后被主 要存在于肝和脾中的网内皮系统破坏。与所有谱系的血细胞类似，数量呈稳定状态的成熟血小板是血小板生成和破坏之间达到平衡的 结果。在正常个体中，对这些细胞的增殖、分化、存活和清除的精 确控制确保了动态平衡的保持，并减小了出血(由血小板数量减少 造成)或血栓症(由血小板过量生成造成)的可能性。如果这种精确的平衡被扰乱，血小板减少或血小板数量低会随 之发生。由于血小板减少会导致潜在的致命性出血事件，所以在临 床上，特别是在血液病和肿瘤实践中，血小板减少是常见问题。血 小板减少可以先天发生，并伴有多种已经定义的遗传性紊乱(Drachman， Blood， 390-398, 2004)，但是在临床上所见的大部 分的血小板减少是由其他原因所导致的结果。对于进行癌症化疗的 患者而言，血小板减少是主要的问题。与细胞毒性药物有关的血小 板减少的急性事件除了将患者置于紧急的危险之中外，其还可以迫 使修改剂量或治疗撤除，因此会减弱治疗效力。此外，在骨髓增生 异常综合症(MDS)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)和慢性肝病中还 经常遭遇血小板减少，并且血小板减少与病毒感染(特别是AIDS) 有关(Kuter ， Blood，歲3457-3469， 2002)。在这些更慢性疾病中，血小板减少可能是由于缺陷性血小板的产生或升高的血小 板破坏所导致，而这通常是自体免疫应答的结果。针对血小板数量 低的治疗方法包括血小板输注和潜在地施用血小板生成素。血小板介导的血栓症是导致血管疾病(例如心血管疾病、脑血 管疾病、和外周血管疾病)的主要机制。控制血小板的水平或活性 是抗血栓症治疗的必要部分。诸如阿司匹林、非甾体抗炎剂、P-内 酰胺抗生素、奎納定、钓通道阻断剂、噻氯匹定、氯吡格雷和阿昔 单抗之类的抗血小板剂被用于治疗心肌梗塞和缺血性卒中、或者它 们随后的并发症，但是需要更有效且更安全的药物。在患有诸如骨 髓增生疾病、慢性肺部阻塞性疾病和原发性血小板增多之类状况的 受试对象中，观察到趋血栓阻塞性状态。在过去20年，已经相当详细地对细胞凋亡的分子调节进行了 表征(Marsden e人，A画.Rev. Immunol., W: 71-105， 2003)。细胞凋亡是由天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶(半胱氨酸天冬氨酸 蛋白酶)家族执行的。在健康细胞中，许多半胱氨酸天冬氨酸蛋白 酶以非活性形式存在，并响应于诱导细胞凋亡的两个主要信号传导 途径而活化。其中第一个途径是由发育指令、细胞因子撤除和其他应激刺激诱导的，并且由Bcl-2蛋白质家族调节，其中所述的Bcl-2 蛋白质家族包括促细胞凋亡成员(例如Bax、 Hrk、 Bim)和促存活成员 (例如Bcl-2、Bcl-xJ 。第二个细胞凋亡途径涉及与死亡受体(例如Fas) 结合的配体，从而使得死亡诱导性信号传导复合体形成。Bcl-2蛋白质家族在调节发育程序性及应激诱导性细胞死亡中 起到中心作用(Adams, Genes Dev., J7: 2481-2495， 2003; Danial a7. ， Cell, L 6: 205-219， 2004)。所述家族中与Bcl-2最密切相关 的并且包括Bc卜Xl (Boise eta/.， Cell, 74:597-608， 1993)、 Bc卜w、 Mcl-l和Al在内的一个亚类促进了特定细胞的存活。该亚类蛋白质 保持细胞存活，直至其活性通过与远系相关的促细胞凋亡唯BH3域 蛋白质(例如Bim、 Bad或Bid)的直接结合而被中和为止(Huang ef a/， Cell,旭839-842， 2000)。虽然可能的是，诸如Bc卜XL之类的 促存活蛋白质控制了第二类促细胞调亡家族成员(即，多结构域蛋 白质Bax和Bak)的作用，但是这些蛋白质的精确的生物化学作用是 有争议的(Adams, 2003 Danial e厶，2004 (卿ra); Willisand Adams, Curr. Opin. Cell. Biol. ， 77:617-625, 2005 )。所述蛋 白质在介导细胞凋亡中可能通过以下过程来起到实质作用(Cheng W a人，Mol. Cell.,《705-711， 2001; Lindsten a厶，Mol. Cell., 沃1389—1399， 2000; Rathmel 1 a7. ， Nature Immunology, 932-939， 2002; Zong a/. ， Genes Dev., 1481—1486， 2001)，所述的过 程为破坏诸如线粒体外膜之类的细胞内膜，由此促进诸如细胞色素C (其通常被隔离在细胞器中)之类的促细胞凋亡形成因子释放到细 胞质中，从而促进了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的活性(Green e纟a厶， Science, JOi: 626-629， 2004; Greenefa/. ， Science, ^7:1309-1311， 1998; Yang a/. ， Science, iVJ: 1129—1132， 1997)。我们对血小板数量的分子控制的理解是不完全的，并且遗传性血小板减少的许多情况尚不能解释(Drachman， 2004 (s叩ra))。已 经假定，对循环血小板数量的主要生理学控制为通过网状内皮系统 进行的血小板的产生和血小板的破坏。在这种设想下，循环系统中 的血小板存活已经被认为是代谢能力(即，血小板对其前体巨核细 胞的需要)的函数，并且在血小板的水平和活性的调控中，细胞死 亡机制在传统上被认为起到较少的作用或者不起作用。专利技术概述在本说明书的全文中，除非总有说明，应将术语包括/包含 理解为是指涵盖了给定元素或整体、或者多个元素或整体的组，但 不排除任何其他元素或整体、或者多个元素或整体的组。核苷酸和氨基酸序列通过序列标识符序号(SEQ ID N0本文档来自技高网...

【技术保护点】
增强或保持血小板的生存能力或寿命期的方法，该方法包括施用有效量的对细胞凋亡进行负调控的制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU 2006-8-11 2006904386;AU 2007-3-20 2007901452;US1.增强或保持血小板的生存能力或寿命期的方法，该方法包括施用有效量的对细胞凋亡进行负调控的制剂。2. 权利要求1所述的方法，其中所述的制剂增大细胞中 Bcl-xL: Bak的比例。3. 权利要求1所述的方法，其中所述的制剂为Bc卜&介导的细 胞凋亡途径的激动剂。4. 权利要求1所述的方法，其中所述的制剂为Bcl-x^的激动剂。5. 权利要求1所述的方法， 的拮抗剂。6. 权利要求1所述的方法， 活性的下游效应子的拮抗剂。7. 权利要求1所述的方法， 制剂的吸收或细胞活性。8. 权利要求1所述的方法，9. 权利要求8所述的方法， 板的血液产 品。其中所述的制剂为Bak和/或Bax其中所述的制剂为Bak和/或Bax其中所述的制剂抑制细胞凋亡诱导其中离体施用所述的制剂。 其中将所述的制剂施用于含有血小10.权利要求9所述的方法，其中所述的血液产品为全血或血 、板制备物。11. 权利要求l所述的方法，其中体内施用所述的制剂。12. 权利要求1所述的方法，其中将所述的制剂施用给患血小 板减少的受试对象，或者处于形成血小板减少的危险中的受试对象。13. 权利要求12所述的方法，其中所述的受试对象正在接受化疗。14. 治疗或预防受试对象血小板减少的方法，该方法包括鉴定 患血小板减少的受试对象或者处于血小板减少危险中的受试对象； 以及向所鉴定的受试对象施用能够对血小板的细胞凋亡进行负调控 的制剂。15. 权利要求13所述的方法，其中所述的制剂增大血小板中 Bc卜xj Bak的比例。16. 权利要求14所述的方法，其中所述的制剂为Bel-XL介导的 细胞凋亡途径的激动剂。17. 权利要求14所述的方法，其中所述的制剂为Bel-xt的激动剂。18. 权利要求14所述的方法，其中所述的制剂为Bak和/或Bax 的拮抗剂。19. 权利要求18所述的方法，其中所述的制剂为Bcl-XL或其变 体或其模拟物的Bak结合部分，或者Bel-XL或其变体或其模拟物的 Bak结合部分，或者Bcl-xt或其变体或其纟莫拟物的Bak和Bax结合部20. 权利要求18所述的方法，其中所述的制剂为基因沉默制剂21. 权利要求14所述的方法，其中所述的制剂为Bak和/或Bax 活性的下游效应器的拮抗剂。22. 权利要求14所述的方法，其中所述的制剂抑制血小板中细 胞凋亡诱导制剂的吸收或细胞活性。23. 降低血小板存活、寿命期或生存能力的方法，该方法包括施 用有效量的增强细胞凋亡的制剂。24. 权利要求23所述的方法，其中所述的制剂为Bcl-XL介导的 细胞凋亡途径的拮抗剂。25. 权利要求23所述的方法，其中所述的制剂为Bcl-xt多肽活 性的拮抗剂。26. 权利要求23所述的方法，其中所述的制剂为Bak多肽活性 的激动剂，或者Bax多肽活性的激动剂，或者Bak和Bax多肽活性 的激动剂。27. 权利要求23所述的方法，其中所述的制剂为Bak和/或Bax 活性的下游效应器的激动剂。28. 权利要求23所述的方法，其中所述的制剂为IAP拮抗剂。29. 权利要求24所述的方法，其中所述的拮抗剂为BH3结构域模拟物或基因沉默制剂。30. 权利要求25所述的方法，其中所述的制剂为小分子、抑 制性RNA、抗体、适体、肽、拟肽物质、或者限制性肽。31. 权利要求23所述的方法，其中体内施用所述的制剂。32. 权利要求23所述的方法，其中离体施用所述的制剂。33. 权利要求31或32所述的方法，其中向在施用前经过血小 板增多测试的受试对象施用所述制剂。34. 权利要求23所述的方法，该方法包括在损献血液或血小板 之前，使用血小板细胞凋亡增强制剂来处理血液或血小板捐献者， 以减小所捐献的血液或血小板中血小板的平均年龄。35. 治疗或预防受试对象中血小板增多的方法，该方法包括鉴 定患血小板增多的受试对象或者处于血小板增多危险中的受试对 象；以及向所鉴定的受试对象施用能够促进血小板的细胞凋亡的制 剂。36. 权利要求35所述的方法，其中所述的制剂为Bcl-x^介导的 细胞凋亡途径的拮抗剂。37. 权利要求35所述的方法，其中所述的制剂为Bc1-Xl的拮抗剂。38. 权利要求35所述的方法，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：BT奇勒，DCS黄，KD玛森，AW罗伯特，MR卡皮尼利，
申请(专利权)人：沃尔特及伊莱萨霍尔医学研究院，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]