本发明专利技术提供了一种细胞周期检查点调控蛋白的应用。本发明专利技术提供的细胞周期检查点调控蛋白为Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｒａｄ９Ａ－Ｓ３８７，其应用为Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｒａｄ９Ａ－Ｓ３８７作为检测肝细胞癌的蛋白质分子标记的应用。Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｒａｄ９Ａ－Ｓ３８７在肝细胞癌的癌细胞和癌旁细胞中存在明显的差异表达，因此，可根据其在肝细胞中的表达量检测患者是否患有肝细胞癌。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体地说，涉及一种细胞周期检查点调控蛋白用作检 测肝细胞癌的蛋白质分子标记的应用。
技术介绍
肝细胞癌是世界范围内第四位常见的恶性肿瘤，也是我国第二位常见恶性肿瘤， 每年大约有250，000名患者死于肝细胞癌。肝细胞癌恶性程度高，容易复发和转移，预后 差，而且早期诊断较困难，往往延误了最佳治疗时期。但由于西方发达国家肝癌的发病率较 低，国际上对肝癌的基础研究仍较为薄弱，而我国是肝癌高发国家，发病率和死亡率呈现上 升趋势，且发病年龄构成年轻化，每年用于肝癌治疗的医疗支出大为增加，肝癌成了严重危 害我国人民生命财产安全的头号敌人，并且是影响社会经济发展的一个重要因素，因此，加 大力度进行我国肝癌的基础研究具有战略意义，而分离和鉴定新的肝癌相关基因是目前肝 癌基础研究中的前沿课题。到目前为止，已有不下20种的基因异常表达被确定与肝癌的发生发展有关，但已 确定的肝癌相关基因在肝癌中的异常表达率并不高，肝癌的发病机制至今仍未阐明，肝癌 的早期诊断率仍有待提高。此外，传统的肝癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因 治疗方法仍没有明显提高肝癌患者的生存率，因而寻找新的肝癌相关基因、尤其是肝癌高 表达基因对于探讨肝癌的发病机制具有重要意义。因此，研究和开发在肝细胞癌中高表达的基因和/或蛋白质具有重要意义，寻找 新的在肝细胞癌中高表达的基因和/或蛋白质也具有迫切需要性。Rad9A ^ S (Cell cycle checkpoint control protein RAD9A, hRAD9A, EC = 3. 1. 11. 2，DNArepair exonuclease Rad9A homolog A)的 NCBI 登录号为 NP_004575， Swissprot 登录号为 Q99638, IPI 号为 IPI00005277. 4 (human3. 28 version)。Rad9A 的一个 主要功能是提高细胞对DNA损伤的抗性并维持基因组的完整性。这与Rad9A参与以下生理 过程有关参与构成Rad9A-Radl-HuSl复合物，调控细胞周期检测点；参与修复DNA损伤， 主要是碱基切除修复(base excision repair)；参与维持端粒的稳定。Rad9A还参与细胞 凋亡DNA损伤促使Rad9A被caspase 3剪切，产生的N端片段从细胞核转移到细胞质，随后 与抗凋亡的Bcl-XL蛋白结合而抑制其功能，从而促进凋亡。另外，Rad9A还具有以下功能 反式激活目标基因、3’ _5’核酸外切酶活性、抑制雄性激素受体的反式激活活性以及参与核 糖核苷酸的合成等(http://www. uniprot. org/uniprot/Q99638)。在 Rad9A 蛋白的 387 位 的丝氨酸残基上发生磷酸化获得的蛋白即为Ph0Sph0-Rad9A-S387。另外，有少量研究显示，Rad9A蛋白与部分癌症相关，如Cheng等在48例乳腺癌 样本中发现有25例乳腺癌样本中Rad9A的mRNA水平显著上调，但没有1例乳腺癌样本 Φ Rad9A ^ mRNA /JC5FII^TiI (The cell cycle checkpoint gene Rad9A is a novel oncogene activatedby llql3 amplification and DNA methylation in breast cancer.Cancer Res 2005,65, (19)，8646-54)；随后，Kebebew 等证实在甲状腺癌中 Rad9A 的 mRNA 水平H著上升(Diagnosticand prognostic value of cell-cycle regulatory genes in malignant thyroid neoplasms. World JSurg 30(5) :767_74) ；Zhu 等发现前列腺癌细胞 系中Rad9A的表达水平较正常的前列腺细胞系显著升高(Rad9A has a functional role in human prostate carcinogenesis. Cancer Res 68(5) : 1267-74) ；Maniwa 等证实 Rad9A 的表达水平在部分非小细胞肺癌样本中显著升高，同时发现Rad9A存在过度磷酸化现象 (Accumulation of hRad9A protein in the nuclei of nonsmall eelllung carcinoma cells. Cancer 103(1) :126_32)。但是到目前为止，现有文献中未见有Rad9A，特别是Ph0Sph0-Rad9A-S387，与肝细 胞癌的相关性的报道。
技术实现思路
通过筛选在人类肝细胞癌组织及相应的癌旁组织中差异表达的蛋白质，本申 请的专利技术人找到了一种在人类肝细胞癌组织及相应的癌旁组织中存在差异表达的蛋白 质(在癌组织中表达上调)，经质谱鉴定为Ph0Sph0-Rad9A-S387。免疫印迹实验证实， Phospho-Rad9A-S387的确在肝细胞癌组织及相应的癌旁组织中存在差异表达(在癌组织 中表达上调)。利用人肝细胞癌细胞株H印G2和人正常肝细胞株L02进行的免疫荧光实验， 证明Ph0Sph0-Rad9A-S387在这两种细胞株间存在差异表达(在人肝细胞癌细胞株H印G2 中表达上调)。通过对62对人肝细胞癌的癌组织与癌旁组织进行的免疫组织化学实验进一 步证实了 Ph0Sph0-Rad9A-S387在人类肝细胞癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达(在 癌组织中表达上调)。基于Ph0Sph0-Rad9A-S387与肝细胞癌的这种相关性，这种蛋白质可以作为一种 蛋白质分子标记物对它的表达量进行检测可以用于检测肝细胞癌。因此，本专利技术的首要目的在于提供Ph0Sph0-Rad9A-S387的一种应用。本专利技术提供的Ph0Sph0-Rad9A-S387的应用为作为用作检测肝细胞癌的分子标记 物。本专利技术的另一个目的在于提供一种Ph0Sph0-Rad9A-S387的抗体的应用。本专利技术提供的Ph0Sph0-Rad9A-S387的抗体的应用，为用于制备检测肝细胞癌的 制剂和/或用于制备检测肝细胞癌的试剂盒。根据本专利技术，抗Ph0Sph0-Rad9A-S387的抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。本专利技术的又一个目的在于提供一种体外检测肝组织中Ph0Sph0-Rad9A-S387的表 达是否异常的方法。本专利技术提供的方法为检测待测肝组织中Ph0Sph0-Rad9A-S387的数量，并与正常 肝组织中的Ph0Sph0-Rad9A-S387的数量进行比较。鉴于到目前为止，还没有Ph0Sph0-Rad9A-S387的表达量与肝细胞癌早期诊断的相 关性报道。因此，本专利技术的这一发现将为肝细胞癌的诊断和/或治疗提供一条全新的途径。附图说明图IA为Ph0Sph0-Rad9A-S387的免疫印迹实验结果，其中，泳道1_6为肝细胞癌组织的检测结果，泳道1’ -6’为与泳道1-6对应的癌旁组织的检测结果。图IB为Rad9A的免疫印迹实验结果，其中，泳道1_6为肝细胞癌组织的检测结本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种细胞周期检查点调控蛋白的应用，所述细胞周期检查点调控蛋白为Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｒａｄ９Ａ－Ｓ３８７，其特征在于，所述应用为用作检测肝细胞癌的蛋白质分子标记。
【技术特征摘要】
一种细胞周期检查点调控蛋白的应用，所述细胞周期检查点调控蛋白为Phospho Rad9A S387，其特征在于，所述应用为用作检测肝细胞癌的蛋白质分子标记。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用作检测肝细胞癌的蛋白质分子标记 是检测这种蛋白质在肝细胞组织中的表达量。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测这种蛋白质在肝细胞组织中的表 达量是检测这种蛋白质在肝细胞组织中是否均存在上调表达。4.一种抗Ph0Sph0-Rad9A-S387的抗体的应用，其特征在于，所述应用为用于制备检测 肝细胞癌的制剂。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抗Ph0Sph0-Rad9A-S387的抗体包括单 克隆抗体和多克隆抗体。6.一种抗Ph0Sph0-Rad...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾嵘，阮宏强，徐孟杰，李辰，武祎，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31
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