在高浓度蛋白质溶液中减少或防止液-液相分离的方法技术

本发明专利技术描述了在蛋白质溶液中以高浓度配制蛋白质的方法，其中该蛋白质溶液缺乏或具有减少的液－液相分离。这类蛋白质溶液是基本澄清和基本均匀的。另外，提供了使用液－液相分离浓缩和纯化蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及蛋白质制剂的领域。
技术介绍
来自生物技术的蛋白质和肽药物的可得性为大量疾病的治疗和预防创 造了新的选择。基于蛋白质的疗法，特别是基于单克隆抗体的疗法，已经 成为治疗疾病如癌症、变应性疾病、哞喘和类风湿性关节炎的一种重要方 法。基于抗体的疗法一般以常规的间期施用给患者，并需要通过注射进行 若干mg/kg的给药(dosing)。皮下注射是这些疗法的一个优选的施用途径。 因为皮下注射使用的体积小(常为1.5 mL)，所以对于高剂量抗体疗法而言， 该施用途径需要高浓度的蛋白质制剂。使用高浓度蛋白质溶液中的一个挑战是高于特定蛋白质浓度的蛋白质 溶液中乳光(即混浊)的发生。该现象能够造成不均匀的溶液并影响蛋白质 溶液的加工。另外，溶液的乳光可具有消极的商业后果。因此，期望获得 澄清的蛋白质溶液，使得在加工期间操作简便且最终药物产品有更吸引人 的外观。因此，存在开发下述方法的需要，所述方法用于获得不是乳光的(即混浊的)高浓度蛋白质溶液。专利技术概述本专利技术涉及配制高浓度蛋白质溶液的方法。更明确地，本专利技术涉及减 少或防止以高蛋白质浓度配制的蛋白质溶液的液-液相分离的方法。因此， 本专利技术一般提供高浓度蛋白质溶液，其具有减少的乳光并因此视觉上(visibly)是澄清的。如本文中所述，视觉上澄清的溶液有助于加工期间操作 的简便，并且作为商业化的产品更加吸引人。另外，本专利技术提供了使用蛋 白质溶液的液-液相分离浓缩和纯化蛋白质的方法。本专利技术 一方面提供了测定蛋白质浓度的方法，在该浓度下再配制 (reformulate)在显示液-液相分离的蛋白质溶液中的蛋白质以便减少或防 止蛋白质溶液中的液-液相分离。更明确地，减少和/或防止液-液相分离的 方法包括将溶液维持或调节至期望的温度。例如， 一种方法包括允许显示 液-液相分离的蛋白质溶液经历液-液相分离成为上部和下部液相。然后测 量已经历了液-液相分离的蛋白质溶液的上部和下部相中蛋白质的浓度。大 于蛋， 质。期望温度下的液-液相分离。在某些实施方案中，期望温度下在蛋白质溶液 中配制蛋白质的蛋白质浓度被选择为比下部相中蛋白质浓度高约0.5 %到 约40%。在其他实施方案中，期望温度下在蛋白质溶液中配制蛋白质的蛋 白质浓度被选择为比下部相中蛋白质浓度高约0.5%到约5%、约5%到约 10%、约10%到约20%、约20%到约30%、约30%到约40%、约5%到 约20%、约5%到约30%,或约5%到约40%。在本专利技术的其他方面中，下述方法包括构建蛋白质溶液的相分离曲线 和选择在期望的温度下处于相分离曲线以外的浓度，所述方法用于测定下 述蛋白质浓度，在该浓度下再配制在显示液-液相分离的蛋白质溶液中的蛋 白质，以便减少或防止在期望的温度下蛋白质溶液中的液-液相分离。在期 望的温度下处于相分离曲线外的浓度允许再配制在蛋白质溶液中的蛋白质以便减少或防止在期望的温度下蛋白质溶液中的液-液相分离。在该方面的 某些实施方案中，通过绘制两个或多个不同温度下蛋白质溶液的处于平衡 中的两种共存液相的浓度构建相分离曲线，所述温度下该蛋白质溶液显示 液-液相分离。在某些实施方案中，两个或更多不同温度中至少一个是期望 的温度。在本专利技术的另一方面中，下述方法包括提供至少第一蛋白质溶液，其 具有一种蛋白质浓度和笫 一温度，在该温度下第 一蛋白质溶液显示液-液相 分离，)，和至少第二蛋白质溶液，其处于第一蛋白质溶液的浓度下并具有 第二温度，在该温度下第二蛋白质溶液显示液-液相分离，所述方法用于确 定浓度，在该浓度下在蛋白质溶液中配制蛋白质以减少或防止在期望的温 度下蛋白质溶液中的液-液相分离。这些方法还涉及允许第一和第二蛋白质 溶液经历液-液相分离成为上部和下部相。测量第一和第二蛋白质溶液的上 部和下部相中蛋白质的浓度并用于构建相分离曲线。该相分离曲线指定了在第一和第二温度下第一和第二蛋白质溶液的处于平衡中的上部和下部相 的浓度。在期望的温度下处于相分离曲线外的蛋白质浓度被选择用于在蛋 白质溶液中配制蛋白质，以便减少或防止在期望的温度下蛋白质溶液中的 液-液相分离。在该方面的某些实施方案中，允许第三蛋白质溶液经历液-液相分离，且在构建相分离曲线时包括其上层和下层的浓度，所述第三蛋 白质溶液具有与第一蛋白质溶液相同的蛋白质浓度和第三温度。在其他实 施方案中，允许第四蛋白质溶液经历液-液相分离，且在构建相分离曲线时 包括其上层和下层的浓度，所述第四蛋白质溶液具有与第一蛋白质溶液相 同的蛋白质浓度和第四温度。在另一实施方案中，允许第五蛋白质溶液经 历液-液相分离，且在构建相分离曲线时包括其上层和下层的浓度，所述第 五蛋白质溶液具有与笫一蛋白质溶液相同的蛋白质浓度和第五温度。通过 本文的教导能够明白，使用本文所述方法构建相分离曲线时可包括其他蛋 白质溶液。在本专利技术的另一方面，下述方法包括提供第一浓度下第一蛋白质溶液 中的蛋白质、提供第二浓度下第二蛋白质溶液中的蛋白质和提供第三浓度9下第三蛋白质溶液中的蛋白质，其中第一、笫二和第三蛋白质溶液处于第 一、第二和第三溶液不显示液-液相分离的温度下，所述方法用于确定浓度，在该浓度下在蛋白质溶液中配制蛋白质以便减少或防止在期望的温度下蛋 白质溶液中的液-液相分离。该方法还包括将第一、第二和第三溶液冷却至 第一、第二和第三溶液的浊点温度，并通过针对第一、第二和第三浓度绘 制第一、第二和第三蛋白质溶液的浊点温度构建相分离曲线。在期望的温 度下处于相分离曲线外的浓度被确定为下述浓度，在该浓度下在蛋白质溶 液中配制蛋白质以便减少或防止在期望的温度下蛋白质溶液中的液-液相 分离。在本专利技术的另一方面中，用于在蛋白质溶液中配制蛋白质的下述方法 包括在下述浓度下在蛋白质溶液中配制蛋白质，所述方法中蛋白质溶液在 期望的温度下不显示液-液相分离，所述浓度处于在期望的温度下蛋白质溶 液的相分离曲线外。还在本专利技术的另一方面中，用于再配制在下述蛋白质溶液中蛋白质的 下述方法包括对显示液-液相分离的蛋白质溶液进行液-液相分离成为上部 和下部液相，所述蛋白质溶液在期望的温度下显示液-液相分离，所述方法 中再配制的蛋白质溶液在期望的温度下不显示液-液相分离。然后测量蛋白 质溶液的上部和下部相的浓度。在下述浓度下再配制在溶液中的蛋白质， 所述浓度高于蛋白质溶液下部相的浓度。这减少或防止在期望的温度下再 配制的蛋白质溶液中的液-液相分离。在本专利技术的又一方面中，在蛋白质溶液中配制蛋白质使得该蛋白质溶液在期望的浓度下不显示液-液相分离的方法包括在如下温度下储存蛋白 质溶液，所述温度高于发生液-液相分离的温度并且处于蛋白质溶液的相分 离曲线外。在本专利技术的另一方面，从在期望的温度下显示液-液相分离的蛋白质溶 液获得在期望的温度下不显示液-液相分离的蛋白质溶液的方法包括允许 显示液-液相分离的蛋白质溶液在期望的温度下经历分离成为上部和下部 相。取出蛋白质溶液的下部相。该下部相是在期望的温度下不显示液-液相分离的蛋白质溶液。本专利技术还提供了从显示液-液相分离的较低浓度蛋白质溶液获得较高浓度蛋白质溶液的方法。该方法一般包括允许原始的蛋白质溶液分离成为 上部和下部相，并将下部相与上部相分离。下部相是下述蛋白质溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
确定浓度的方法，在该浓度下再配制在显示液－液相分离的蛋白质溶液中的蛋白质以便减少或防止在期望的温度下该蛋白质溶液的液－液相分离，该方法包括：　（ａ）允许显示液－液相分离的蛋白质溶液经历液－液相分离成为上部和下部液相；　（ｂ）测量 已经历了液－液相分离的蛋白质溶液中上部和下部相中蛋白质的浓度；和　（ｃ）选择大于下部相蛋白质浓度的蛋白质浓度用于再配制蛋白质，以便减少或防止在所述期望的温度下蛋白质溶液中的液－液相分离。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：李黎，A坎托尔，NW沃恩，
申请(专利权)人：惠氏公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]