含蛋白质的水质溶液制造技术

含蛋白质的水质溶液，其中借助于向该溶液中加入一种阴离子聚合物或其盐而可在接近该种蛋白质的等电点的ｐＨ条件下将该蛋白质溶解并达到高浓度。应用此方法可制备具生理活性蛋白质的药物配制剂。（*该技术在2010年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含有蛋白质的水溶液、增高蛋白质浓度的方法以及一种蛋白质配制剂，还涉及应用生理活性蛋白质制备临床用药物所用的技术。在应用蛋白质作为均质组分的场合中，将蛋白质溶解于一种溶剂中是十分重要的。例如，在把一定量的蛋白质从含有该蛋白质的组合物中分离的场合，或在分析所制造的蛋白质的场合，必须保证含有该蛋白质的组合物是均质的。此外，当把蛋白质溶解在水中并作为例如注射液来给药时，该蛋白质必须是完全溶解的。一般，蛋白质在水质溶剂中的溶解度受该蛋白质表面存在的亲水或疏水性残基的很大影响，也受蛋白质上的电荷很大影响。当由于在蛋白质表面存在疏水性残基而使该蛋白质只是微溶之时，借助于加入表面活性剂是不可能增高其溶解度的。另方面，当水质溶剂的pH值接近于要溶解的蛋白质的容易发生等电沉淀作用的等电点时，则借助增高该水质溶剂中盐的浓度和离子强度而增高该蛋白质的溶解度。在此情况下，表面活性剂并不能使该蛋白质的溶解度增高。此外，当水质溶剂的pH值接近于蛋白质的等电点并且盐的浓度很低时，所溶解的蛋白质只能达到较低浓度。因此，为了使溶解的蛋白质达到较高浓度，通常采用的方法可以是使所用的pH值远离其等电点，或者是增高盐的浓度。但是，在某些情况下，要求不增高盐的浓度并在在靠近等电点的条件下使溶解的蛋白质达到足够高的浓度。实例之一是在患者需要保持盐的摄取量尽可能低的条件下、以近于中性pH的溶液形式将等电点接近中性pH的生理活性蛋白质为患者给药。在此情况下，唯一可行的办法是使用低浓度的蛋白质，或者不可避免地使患者摄取盐，这是在药物活性蛋白质制剂方面亟需解决的重要实际问题。本专利技术的目的是提供一种高浓度的蛋白质水质溶液。另一目的是提供一种将蛋白质溶解在水质溶液中达到高浓度的方法。另一目的是提供一种具优良溶解性的蛋白质制剂。在配制含蛋白质的浓溶液方面，本专利技术者首次发现当一种蛋白质在适当的pH结合于一种离子交换物质时，该蛋白质与该离子交换物质的结合在盐浓度低时即易发生，还发现因此而可借助于用阴离子残基未取代用于溶解疏水性蛋白质的表面活性剂的疏水性残基而使蛋白质溶解，所依据的是与使用表面活性剂时相同的作用机制。基于上述的发现，本专利技术者在进一步的深入研究中，还确定了阴离子聚合物或阴离子聚合物的盐类能产生有利的如上述的效应，从而完成了本专利技术。本专利技术提供一种含蛋白质的水质溶液，其中共存有一种阴离子聚合物或它的盐，提供一种方法使含蛋白质和阴离子聚合物或其盐的水质溶液的蛋白质浓度增高，以及提供含有蛋白质和一种阴离子聚合物或其盐的制剂。在JPLO236730/1986中披露了一种药物制剂，其中含有一种糖化物即一种类型的阴离子聚合物，例如多硫酸化或多磺化的糖，还含有t-PA(组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂)。但其中所披露内容与本专利技术的技术构思是根本不同的，本专利技术是要增高蛋白质的溶解度。本专利技术提供一种含蛋白质的水质溶液，其中的蛋白质浓度提高到采用常规技术从来未能达到的高浓度，特别是所提供的含蛋白质水质溶液中盐的浓度低，pH值接近其等电点。按常规方式，为了在接近蛋白质等电点的pH条件下溶解蛋白质，必须(1)显著降低蛋白质浓度，或(2)显著增高盐的浓度。当需要将生理活性的蛋白质以溶液形式在近于该蛋白质等电点的pH值为限制摄取盐的患者给药时，用如此制备的蛋白质溶液是十分不方便的。为了使蛋白质溶解同时不增高盐的浓度，必须选择远离该蛋白质等电点的pH值，即使所选pH值并不适于药物用途例如注射或其他非肠道给药方式，也要那样作。按本专利技术则与前不同，可在不增高盐浓度和近于该蛋白质等电点的pH值条件下使蛋白质溶解，于是可以提供盐浓度低和pH接近蛋白质等电点的含该蛋白质的水质溶液。与常规技术相比，本专利技术提供了具优越性的技术。本专利技术特别适用于制备盐浓度低和等电点接近中性的生理活性蛋白质的注射液。用于本专利技术的蛋白质实例包括物化简单的蛋白质、结合蛋白质和诱导蛋白质，以及具有较多疏水性基团的蛋白质。本专利技术特别适用于诸如球蛋白或t-PA等蛋白质，这些蛋白质在接近其等电点的pH条件下溶解度大大降低，实例为等电点远离极酸条件的蛋白质，一般为pH＝4或更高，更多是pH＝5或更高。这些蛋白质可以从自然生物体提取而得，利用化学合成或应用基因重组体DNA技术从各种培养物获得。如上述所得的蛋白质可以在修饰之后应用。这些蛋白质的实例包括γ-球蛋白，例如免疫球蛋白A、G和E，乳球蛋白，尿激酶(Urokinase)，前尿激酶(Prourokinaes)以及组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂(t-PA)。本专利技术特别适用于具生理活性的蛋白质。这些蛋白质可以单独使用，或使用两种或多种蛋白质的混合物，或不同类型蛋白质的混合物。用于本专利技术的阴离子聚合物的阴离子残基例如有羧基、羧甲基、硫酸根以及磷酸根。该等阴离子聚合物的主链例如有糖类如糖醇、纤维素、直链淀粉、氨基酸以及核酸的碱，优选的是分子量为1000至1000000的阴离子聚合物。具有阴离子残基和聚合物主链的阴离子聚合物例如有羧甲基离子交换物质，如羧甲基直链淀粉和羧甲基纤维素;酸性多糖如精氨酸;硫酸粘多糖如硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸软骨素 A、硫酸软骨素 B、硫酸软骨素 C、硫酸软骨素 D、硫酸软骨素 E、肝素、硫酸角质、硫酸角质素以及硫酸类肝素，酸性多氨基酸如多L-谷氨酸以及核酸。这些阴离子聚合物的盐类可以有钠盐、钾盐、钙盐等等。这些阴离子聚合物可以单独使用或者两种或多种组合使用。阴离子聚合物或其盐的优选用量为准备要溶解的蛋白质的1/40(重量/重量)或更多，更好是1/10(重量/重量)或更多，以及100或少于100。若所用阴离子聚合物的量不足，可能达不到所要求的蛋白质溶解量;若其用量过多，可溶解的蛋白质相对量减少，使含蛋白质水质溶液不能有效应用。由于阴离子聚合物及其盐的阴离子残基类型、交换阳离子的能力、分子量等等都互不相同，阴离子聚合物及其盐的用量可以根据要配制的蛋白质的物理性质来决定。按本专利技术的含蛋白质水质溶液中该蛋白质的浓度是根据要溶解的那种蛋白质的溶解度而定，并且每种蛋白质各有其独特情况，所以不能一般性规定;但一般可以得到蛋白质浓度0.1毫克1/毫升或更高的水质溶液，因为其溶解度，特别是在近于其等电点的pH值范围的溶解度，要比常规的含相同蛋白质的水质溶液所达到的溶解度高得多。当然，本专利技术并不排除蛋白质浓度低于此浓度的溶液。实际上，按本专利技术，即使在稀溶液中也不会发生蛋白质沉淀。按本专利技术，通常可以制备蛋白质浓度约0.01至10毫克/毫升的蛋白质水质溶液。在本专利技术中，该水质溶液的pH值范围并无特别限定。但是，本专利技术的特征在于在靠近该蛋白质等电点的pH条件下可以在不增高盐浓度的情况下使蛋白质溶解度增高;鉴于蛋白质的等电点大多在弱酸至碱性pH范围，所以当该水质溶液是在弱酸性、中性、弱碱性或碱性pH时，本专利技术是特别有价值的。特别是，该水质溶液的pH值最好在距离该蛋白质的等电点-2至+2范围内，更好是在-1至+1范围内。在本专利技术中，准备配制用的蛋白质的等电点是用电泳法测定的。此外，有一些蛋白质在用电泳法测定时等电点时常不是集中在一个点，而是某一pH范围的带，在此情况下由此pH范围代表其等电点。再者，如果是多于两种的具不同等电点的蛋白质的混合物，由覆盖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水质溶液，其中包含一种蛋白质和一种阴离子聚合物或该聚合物的一种盐。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：岛崎幸雄，川嶋伸広，吉冈美纪，田中康仁，田中亮，酒井喜代志，石割久博，
申请(专利权)人：三井化学株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]