本发明专利技术公开了一种抗禽网状内皮组织增生症病毒ｇｐ９０蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的禽网状内皮组织增生症病毒ｇｐ９０蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗ｇｐ９０蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其微生物保藏号是：ＣＧＭＣＣ ＮＯ４１４３；该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体能与ＨＬＪ０７Ｉ毒株发生反应，而与禽类其它相关病原不发生反应。本发明专利技术单克隆抗体可用于检测禽网状内皮组织增生症病毒，为建立一种快速、简易、准确的网状内皮组织增生症病毒诊断方法及其免疫机制研究、免疫功能检测等方面提供了物质基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单克隆抗体，尤其涉及抗禽网状内皮组织增生症gp90蛋白的单克隆 抗体以及分泌该抗gp90蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本专利技术还涉及单克隆抗体在建 立检测有关禽网状内皮组织增生症病毒方法中的应用，属于禽网状内皮组织增生症病毒的 检测领域。
技术介绍
禽网状内皮组织增生症是由禽网状内皮组织增生症病毒 (Retieuloendotheliosis Viruse, REV)群引起的火鸡、鸡、鸭、鹤鹑和鹅等以淋巴-网状 细胞增生为特征的一组综合症(Witter R L, Fadly A Μ. Reticuloendoetheliosis. In Disease of Poultry,Ilth edn，2003，517-535. Edited by Y M Saif，H J Barnes, J R Glisson, et al.Ames，IA, USA :Iowa State Press.)，包括急性网状细胞肿瘤形成、生长抑 制综合症、淋巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成。REV的自然宿主有鸡、火鸡、鸭、鹅、日本 鹌鹑等，其中火鸡最易感染。REV —般感染低日龄鸡，特别是新孵出的雏鸡及胚胎，感染后 引起严重的免疫抑制或免疫耐受。而高日龄鸡免疫系统发育完善，感染后一般不出现或仅 出现一过性病毒血症。Bagus t等研究证明，REV可以直接或间接传播(Bagust T，Grimes Τ, Dennet D, et al. Infection studies on a reticloendotheIiosis contaminant of a commercial marek' s diseasevaccine. Aust Vet J, 1979, 55 :153-157.)。石if究结果表明， 污染REV的商业禽用疫苗也是其传播的一个重要因素，通过给鸡接种REV污染的马立克氏 病疫苗、禽痘疫苗，亦可引起人工传播(McDougall JiShilleto RiBiggs P M. Experimental infection of chickens with an Australian strain of retieuloendotheliosis virus in the turkey. Avian Pathol，1981，10 :163-169 ；Brunovskis P，Velicer L The Marek’s disease virus unique short region :alpha herpes virus homologs,fowlpox virus homologs，and Marek' s disease virus-specific genes.Virology,1995,206 324-338 ；Theodros T，Willie M. Detection of specific retieuloendotheliosis virus sequence and protein from REV-integrated fowlpox virus strains. Journal of virological Methods，2003，110 :99-104.)。另外，REV与鸡痘病毒和马立克氏病毒重 组现象的发生，也必将成为造成REV临床发病率增高的一个重要因素(Kim T，Tripathy N. Reticuloendoetheliosis virus integration in the fowl poxvirus genome :not a recent event. Avian Dis，2001，45 :663-669 ；Cui Z，Zhuang Q，Xu X，et al. Molecular and biological characterization of a Marek' s disease virus field strain with retieuloendotheliosis virus LTR insert.virus genes，2010，40 :236-43)。禽网状内皮组织增生症病毒属于正反转录病毒亚科Y反转录病毒属的成员， 其核酸是单股正链线性RNA(ssRNA)的二聚体，即其基因组核酸是双倍体正股RNA，完全 复制 REV 的基因组大约为 8. 3kb (Barbosa Τ, Zavala G，Cheng S, et al. Full genomesequence and some biological peoperties of reticuloendotheliosis virus strain APC-566isolated from endangered Attwater s prairie chickens. Virus Res,2007, 124 :68-77 ；Lin C, Chen C, Wang C, et al. Isolation, identification and complete genome sequence of an avian reticuloendotheliosis virus isolated from geese. Veterinary Microbiology, 2009,136 (3-4) :246-249.)，不完全复制型(或缺陷型)T 株 的基因组仅有约 5. 7kb (Cohen Μ, Rein R, Stephens C, et al. Baboon endogenous virus genome.III. non-Molecular cloning and structural characterization of defective viral genomes from the DNA of ababoon cell strain. Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A, 1981,78 :5207-5211.), REV全基因组编码相应蛋白的顺反子图谱是5' -pl2-ppl8/pp2 0-p30-pl0-pol-gp90-gp20-p2 (E) -3 ‘，这些蛋白成熟后根据其功能又可分为酶蛋白、囊 膜蛋白和核心蛋白。囊膜蛋白(env)是糖蛋白，包括erw基因编码的2个糖蛋白gp90和 gp20两条肽链，较小的gp20贯穿病毒的囊膜，称为穿膜蛋白(TM)，较大的gp90通过二硫 键和氢键与TM相连，暴露于囊膜之外，称之为表面蛋白(SU)，TM和SU是env基因编码的 前体蛋白经水解后产生的(Tsai W, Copeland T, Oroszlan S, et al. Purification and chemical and immunological charaterization of avian reticuloendotheliosis virus gag-gene-encoded structural proteins. Virology, 1985,140 :289-312.)。其中，gp90 作 为病毒的囊膜外糖蛋白，其C-末端表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株分泌抗禽网状内皮组织增生症病毒（Ｒｅｔｉｅｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ Ｖｉｒｕｓｅ）ｇｐ９０蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其微生物保藏号是：ＣＧＭＣＣ Ｎ０ ４１４３。
【技术特征摘要】
1.一株分泌抗禽网状内皮组织增生症病毒(Retieuloendotheliosis Viruse) gp90蛋 白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其微生物保藏号是CGMCC NO 4143。2.由权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：王云峰，石星明，赵妍，王玫，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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