用于检测人乳头瘤病毒的试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测人乳头瘤病毒的试剂。本发明专利技术提供的试剂，包括引物组合物甲；所述引物组合物甲包括序列表的序列１至序列１８所示的ＤＮＡ。所述试剂还可包括引物组合物乙；所述引物组合物乙由序列表的序列２０至序列４３所示的ＤＮＡ组成。所述试剂可用于辅助鉴定人乳头瘤病毒。本发明专利技术提供的试剂可检测出感染女性生殖道的所有ＨＰＶ型别，包括１４种高危型ＨＰＶ和１２种低危型ＨＰＶ。本发明专利技术主要解决了现有的检测方法中不能对感染的ＨＰＶ进行分型，或者因为交叉反应造成的分型不准确的技术问题，从而提供了一种准确、灵敏度高且经济实用的检测方法，适用于临床ＨＰＶ检测和大规模人群ＨＰＶ筛查使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测人乳头瘤病毒的试剂。
技术介绍
国际癌症研究组织(IARC)调查显示宫颈癌是妇女当中第三大常见的恶性肿瘤， 在中国每年约有8万的新发病例和3万的死亡病例。研究表明，人乳头瘤病毒与宫颈癌的 发生密切相关，99%以上的宫颈癌患者当中可检测出HPV的感染。到目前为止已发现了 100 多个型别的HPV，其中感染生殖道的有40多个(de Villiers EM, Fauquet C, Broker TR, Bernard HU, zur Hausen H. Classification of papillomaviruses. Virology. 2004. 324 17-27.)。根据流行病学调查以及分子进化树分析，HPV可分为高危型和低危型，其中高 危型 HPV 包括 15 种(HPV-16,18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82)，低危型 HPV 包括 12 禾中(HPV-6，11，40，42，43，44，54，61，70，72，81，CP6108) (Munoz N, BoxchFX, de Sanjose S,Herrero R,Castellsague KV,Shanh,Snijders PJ,Meijer CJ. Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer. N. Engl. J. Med. 2003. 348 :518_527.)。在宫颈癌患者当中，HPV 16的感染最多，其次是HPV 18，而在中国HPV 58和52这两个型别的感染率相对较高(Clifford GM,GalIusS,Herrero R, Munoz N, Snijders PJ, Vaccarella S, Anh PT, Ferreccio C, Hieu, MatosE, Molano Μ, Rajkumar R,Ronco G,de Sanjose S,Shin HR,Sukvirach S,Thomas JO,Tunsakul S,Meijer CJ, Franceschi S, and the IARC HPV Prevalence Surveys Study Group. Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys :a pooled analysis. Lancet. 2005. 366 :991_998.)。现在最常用的HPV分子检测方法有(i)信号放大法，如美国食品和药物管理局(FDA)通过的第二代杂交捕获技术 (HC2)和Cervista HPV HR。HC2是现在临床上用的最多的一种检测方法，它采用两组特异 的RNA探针与HPV DNA杂交，利用抗体捕获RNA =DNA杂交子并通过结合二抗使杂交信号放 大的方法来检测13种高危型HPV和5种低危型HPV。杂交捕获法敏感性较好，重复性高，缺 点是不能测定具体的HPV型别，同时也存在着高危型HPV探针与一些低危型HPV发生交叉 反应，从而降低了特异性。另外，这种检测成本太高，并不能作为一种筛查方法在发展中国 家得以推广。Cervista HPV HR通过荧光共振能量转移(FRET)的方法使检测信号放大，同 样也不能对HPV进行分型并存在交叉反应。(ii)基于PCR扩增的方法。以聚合酶链式反应(PCR)为基础的检测方法是用 PCR方法先进行目的基因的扩增，然后再用各种方法(如特异探针杂交、酶切图谱鉴定和 质谱)进行分型。杂交法可以很好的对常见的高危型和低危型分型，同时可以检测混合感 染的样品。现在实验室阶段常用的试剂盒大部分都是基于这种方法设计的，如Roche公司 的 Linear Array HPVGenotyping, Innogenetics 幵发的 INNO-LiPa HPV GenotypingJfIHybribio公司的HPVGenoArray Test Kit.这种方法同样也存在着交叉反应的问题，并且只 能检测出针对探针设计的几种常见的高危型和低危型HPV。酶切图谱鉴定是通过一种或几 种限制性内切酶对PCR产物进行酶切，然后进行琼脂糖电泳分析带型，这种方法工作量很 大，并且易受主观因素影响。基质辅助激光解析电离_飞行时间质谱利用型别特异的延伸 引物获得短片段，然后根据延伸产物的荷质比不同将其分型。这种方法需要昂贵的仪器，并 且对实验技术要求很高。病毒检测的金标方法是对全基因组测序，但这在临床上大规模应用是不现实的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测人乳头瘤病毒的试剂。本专利技术提供的用于辅助检测人乳头瘤病毒的试剂，包括引物组合物甲；所述引物 组合物甲包括序列表的序列1至序列18所示的DNA。所述引物组合物甲具体可由序列表的序列1至序列19所示的DNA组成，序列19 所示DNA为测序引物。所述试剂还可包括引物组合物乙；所述引物组合物乙由序列表的序列20至序列 43所示的DNA组成。所述试剂具体可由所述引物组合物甲、所述引物组合物乙和质控引物对组成；所 述质控引物对由序列表的序列44所示DNA和序列表的序列45所示DNA组成。以上任一所述试剂均可用于制备辅助检测人乳头瘤病毒的试剂盒。本专利技术还保护一种制备辅助检测人乳头瘤病毒的试剂盒，包括以上任一所述试 剂。所述试剂还可包括阳性对照和阴性对照。所述阳性对照可为克隆有HPV16全长的 质粒。所述阴性对照可为无菌水和人的外周血DNA。所述试剂可用于辅助鉴定人乳头瘤病毒。所述人乳头瘤病毒为高危型毒株或低危型毒株；所述高危型毒株为HPV-16毒株、 HPV-18 毒株、HPV-31 毒株、HPV-33 毒株、HPV-35 毒株、HPV-39 毒株、HPV-45 毒株、HPV-51 毒 株、HPV-52毒株、HPV-56毒株、HPV-58毒株、HPV-59毒株、HPV-66毒株或HPV-68毒株；所 述低危型毒株为HPV-6毒株、HPV-Il毒株、HPV-40毒株、HPV-42毒株、HPV-43毒株、HPV-44 毒株、HPV-54毒株、HPV-61毒株、HPV-70毒株、HPV-72毒株、HPV-81毒株或CP6108毒株。本专利技术提供了一种人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus, HPV)检测和分型的方 法及试剂盒，可检测出感染女性生殖道的所有HPV型别，包括14种高危型HPV和12种低危 型HPV。本专利技术主要解决了现有的检测方法中不能对感染的HPV进行分型，或者因为交叉反 应造成的分型不准确的技术问题，从而提供了一种准确、灵敏度高且经济实用的检测方法， 适用于临床HPV检测和大规模人群HPV筛查使用。本专利技术提供的试剂可用于检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒，方法如下(1)以待测样本的基因组DNA为模板，用本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于辅助检测人乳头瘤病毒的试剂，包括引物组合物甲；所述引物组合物甲包括序列表的序列１至序列１８所示的ＤＮＡ。

【技术特征摘要】
用于辅助检测人乳头瘤病毒的试剂，包括引物组合物甲；所述引物组合物甲包括序列表的序列1至序列18所示的DNA。2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于所述引物组合物甲由序列表的序列1至序 列19所示的DNA组成。3.如权利要求1或2所述的试剂，其特征在于所述试剂还包括引物组合物乙；所述引 物组合物乙由序列表的序列20至序列43所示的DNA组成。4.如权利要求1至3中任一所述的试剂，其特征在于所述试剂由所述引物组合物甲、 所述引物组合物乙和质控引物对组成；所述质控引物对由序列表的序列44所示DNA和序列 表的序列45所示DNA组成。5.如权利要求1至4中任一所述的试剂，其特征在于所述人乳头瘤病毒为高危型毒 株或低危型毒株；所述高危型毒株为HPV-16毒株、HPV-18毒株、HPV-31毒株、HPV-33毒株、 HPV-35 毒株、HPV-39 毒株、HPV-45 毒株、HPV-51 毒株、HPV-52 毒株、HPV-56 毒株、HPV-58 毒 株、HPV-59毒株、HPV-66毒株或HPV-68毒株；所述低危型毒株为HPV-6毒株、HPV-Il毒株、 HPV-40 毒株、HPV-42 毒株、HPV-43 毒株、HPV-44 毒株、HPV-54 毒株、HPV-61 毒株、HPV-70 毒株、HPV-72毒株、HPV-81毒株或CP6108毒株。6.权利要求1至5中任一所述试剂在制备辅助检测人乳头瘤病毒的试剂盒中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述人乳头瘤病毒为高危型毒株或低危型 毒株；所述高危型毒株为HPV-16毒株、HPV-18毒株、HPV-31毒株、HPV-33毒株、HPV-35毒 株、HPV-39 毒株、HPV-45 毒株、HPV-51 毒株、HPV-52 毒株、HPV-56 毒株、HPV-58 毒株、HPV-59 毒株、HPV-66毒株或HPV-...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱宝利，向阳，杨毅，张瑞芬，蔡玉品，王志云，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]