植物线粒体通用表达载体ｐＳＫ－Ｅ－Ｐ／Ｔ构建及启动子活性鉴定制造技术

一种植物线粒体通用表达载体ｐＳＫ－Ｅ－Ｐ／Ｔ构建及启动子活性鉴定。本发明专利技术首次发现黄瓜线粒体质粒ｐＣ３（序列１），在此基础上，通过ＰＣＲ获得黄瓜线粒体基因ｃｏｂ上游启动子序列（序列２）及基因ａｔｐ９下游终止子序列（序列３），构建成植物线粒体通用表达载体ｐＳＫ－Ｅ－Ｐ／Ｔ（序列４），该载体上还带有在大肠杆菌中复制的复制子及Ａｍｐｒ抗性基因，非常方便外源基因的克隆和重组子筛选。经测定启动子－ｌａｃＺ报告基因融合质粒在大肠杆菌中酶活性和荧光显微镜观察ｐＳＫ－Ｅ－ＧＦＰ转化大肠杆菌的绿色荧光，证明表达载体上启动子具有转录活性。本发明专利技术提供了通过线粒体转化途径研究细胞凋亡等与线粒体相关的重要生命科学热点问题的新型分子生物学技术工具。

【技术实现步骤摘要】
植物线粒体通用表达载体pSK-E-P/T构建及启动子活性鉴定
本专利技术属于植物基因工程
，主要涉及植物线粒体通用表达载体PSK-E-P/ T的构建策略和实施，包括载体构建中关键性元件之一的来自“津研四号”品种黄瓜线粒体 质粒PC3序列、基因cob启动子序列和基因atp9终止子序列，以及启动子活性鉴定与相关 方法。
技术介绍
线粒体是植物的重要细胞器，与植物的能量代谢、光呼吸作用、雄性不育和细胞凋 亡等重要生命现象相关。雄性不育(CMS)在开花植物中广泛存在，CMS品系的培育是高等植 物传统杂交育种的关键环节，在农业生产中占有举足轻重的作用。最近的研究显示CMS与 mtDNA和核基因组相互有关，mtDNA的重排或基因变异可导致CMS发生，某些核基因产物如 MshURFlA和RFlB等通过影响mtDNA结构或阻止mtDNA中CMS相关基因的表达恢复育性。 因此，在应用上，可以利用本专利技术的线粒体表达载体载体，将与CMS相关基因导入植物线粒 体中，改变原有植物的线粒体遗传特性，在分子水平培育细胞质雄性不育等杂交育种所需 要的植物重要品系，从根本上改变目前不育系建立中使用的繁琐回交本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
一种黄瓜线粒体质粒pC3，其序列如序列表序列1。2.一种含有权利要求1所述质粒pC3克隆序列的质粒及相关菌株。3.—种黄瓜线粒体基因cob上游启动子995bp序列，如序列表序列2。4.一种黄瓜线粒体基因atp9下游终止子896bp序列，如序列表序列3。5.一种含有权利要求1、3和4所述序列的植物线粒体通用表达载体pS...

【专利技术属性】
技术研发人员：白艳玲，周腊梅，董荣，徐海津，张秀明，乔明强，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12