雷藤氯内酯醇的制备方法及抗生育用途技术

本发明专利技术提供化合物雷藤氯内酯醇的制备方法与抗生育用途。其方法为，将中药雷公藤提取物或雷公藤多甙溶解在有机溶剂中进行层析，再以有机溶剂进行洗脱，然后结晶。所得到的雷藤氯内酯醇具有显著的雄性抗生育功效、没有明显的毒副作用。其抗生育作用是明确和可逆的，停药一段时间后可恢复生育功能，是一种有前景的雄性抗生育化合物。（*该技术在2009年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及雷藤氯内酯醇的制备方法及抗生育用途。在现有技术中，中药雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook.f.)主要分布于中国华东、中南各省，其根部可用于治疗类风湿性关节炎等炎性、变应性和自身免疫性疾病。本申请人在1982年从雷公藤中提取的组分雷公藤多甙具有明显的抗炎、免疫抑制和抗生育作用。对雷公藤提取物的研究尚有待进一步深入，以制备出新的药用化合物。目前已有的雄性抗生育药物棉酚，有一定的毒副作用在抗生育剂量下，全部服药者均可引起血钾降低，其中1-10%在服药半年内可发生低血钾症及瘫痪;1/4服药者生育力改变为不可逆;可引起30%服药者不同程度肾小管损害，病理亦有同样表现。在国际上已基本否定其作为雄性抗生育药物的应用。因此，寻找、研制新的雄性抗生育药物成为当务之急。雷公藤多甙(含雷藤氯内酯醇)用类风湿性关节炎治疗量的1/4-1/3，临床尚未发现明显副作用，动物实验在光镜、电镜下均未见病理改变;回顾性研究约200例，停药后生育力都能恢复。本专利技术的目的是以雷公藤或雷公藤多甙为原料，分离出新的、具有雄性抗生育作用的化合物，在抗生育剂量下，它应没有明显的毒副作用，其制备方法应简单、实用。以上目的是这样实现的将雷公藤多甙或雷公藤乙醇提取物溶解在有机溶剂(例如氯仿、乙醇等)中，然后进行层析，以有机溶剂或复合有机溶剂(例如氯仿，乙醇-氯仿，丙酮-氯仿，环己烷-丙酮等)进行洗脱。TLC检查，收集合并含有雷藤氯内酯醇的组分，然后结晶，即可得到雷藤氯内酯醇。以上层析与结晶工作可分别作两次或两次以上，以提高其纯度。这样得到的雷藤氯内酯醇为无色针状结晶;熔点256-258℃;Kedde′s反应呈紫红色;易溶于10%乙醇氯仿;溶于甲醇、乙醇、氯仿，不溶于水。其化学结构由下述结构式表示 MS m/z(%)396(M+，0.88)，378(0.42)，361(1.88)，343(34.91)，273(17.06)，247(39.04)，229(17.33)，149(26)，121(23)，105(32)，71(100)。IR γKBr cm-13530(羟基)，1751，1673(α，β-不饱和γ-内酯)。UVλMeOHmax217.8nm.1HNMR(400MC，CDCL3)δppm0.89(3H，d，J＝6.97Hz，16-H3);1.00(3H，d，J＝6.60Hz，17-H3);1.12(3H，S，20-H3);1.27，1.61(2H，1-H2);1.98(1H，t，6β-H);2.17，2.32(2H，2-H2);2.20(1H，m，6α-H);2.56(1H，sept，15-H);2.75(1H，d(d)5-H);3.12(1H，d，J14.12＝1.46Hz，14-H);3.45(1H，d，J7.6α＝5.86Hz，7-H);3.90(1H，d，J＝5.13Hz，11-H);4.26(1H，d(d)，J12.11＝5.13Hz，J12.14＝1.46Hz，12-H);4.74(2H，m，19-H2)。13CNMR(400MC，DMSO-d6)δppm13.27(q，C20);15.17(q，C16);15.38(q，C17);17.01(t，C2);23.26(t，C6);28.98(d，C15);30.41(t，C1);35.74(s，C10);39.88(d，C5);57.66(d，C11);59.08(d，C12);61.31(d，C7);70.47(t，C19);76.24(d，C14);125.27(s，C3);161.20(s，C4);174.19(s，C18);60.51，70.02，76.58(C8，C9，C13)。用X-射线单晶衍射法也证明了该化合物的结构。药理结果用本方法所得的雷藤氯内酯醇具有雄性抗生育用途。结果如下1、初筛昆明种健康雄性小鼠，28.8±0.8克，每组10只，每日灌胃给药0.3，0.15，0.075mg/kg一次，连续32天，第26天与正常成年雌性小鼠1∶1合笼，第33天解剖雄鼠，取一侧输精管全长，用0.5ml生理盐水冲洗精子于试管内，在白细胞计数板上观察精子活力及作精子相对计数，并摘取睾丸称重，取睾丸附睾作病理标本。合笼后8天解剖雌鼠观察胚胎数(活胎及吸收胎)。睾丸、附睾病理检查Bouin液固定，石腊包埋，PAS-苏木素染色，光镜检查，按改良Dym法对生殖细胞作半定量估计法评分，算出给药组与对照组曲精管内各期生精细胞的正常百分比，0相当于对照值，1为对照值的60-90%，2为30-60%，3为＜30%。结果表明三个给药组使睾丸减重，精子计数显著减少及活力显著降低，呈量效关系，并皆导致不育(见表1)。生殖细胞评分与对照组比均出现不同程度异常(见表2)。表1 药物对小鼠生殖参数的影响 (X±SE)组别睾丸重量精子活力(％) 精子总数胚胎数(mg/kg) (mg/100g) 活动死亡(万／条输精管) 活胎吸收胎0.3 145.85.7 94.3 3.00 0±6.8±3.1 ±3.0 ±1.40.15 273.324.1 75.9 3.7 0 0±33.9 ±6.5 ±6.1 ±1.10.075 392.234.8 65.2 13.4 0 0±55.1 ±5.6 ±5.3 ±3.7对照 660.180.9 19.1 439.9 8.7 0.39±33.8 ±2.0 ±2.0 ±86.4 ±2.3 ±0.33表2、药物对小鼠生殖细胞的影响 (X±SE)组别 生殖细胞类型总计(mg/kg) 精原细胞 精母细胞 精子细胞 精子细胞(1-8期) (9-19期)0.3 2.8 3 3 3 11.8±0.2 ±0 ±0 ±0 ±0.10.15 1.9 2.2 2.2 2.4 8.6±0.2 ±0.3 ±0.3 ±0.3 ±0.10.075 0.6 1.3 1.2 1.6 4.7±0.2 ±0.4 ±0.4 ±0.4 ±0.2对照 0 0 0 0 02、复筛雄性成熟SD大鼠，每日经口灌服雷藤氯酯醇0.05mg/kg，每周6次，6-7周后交配试验表明所有大鼠均不育，附睾尾精子密度和活率明显下降(表3)。此剂量对体重，性行为、血清睾酮、各种副性腺重量均无明显影响，睾丸组织学除少数管腔见脱落精子细胞以及上皮排列稍有紊乱外，无明显改变。附睾上皮正常，管腔见中等量的脱落变态期精子细胞。心、肝、脾、胃、肺、肾等身体脏器组织学均正常。对照一切如常。共进行两批实验，每批20鼠(给药及对照各半)，结果基本一致。还表明，雷藤氯内酯醇对大鼠外周淋巴细胞微核发生率无明显影响。表3 雷藤氯内酯醇对大鼠生育的影响 (X±S.D.)组别 附睾尾精子 交配雌鼠(n) 密度106/ml 活率% 怀孕率活胎仔/孕鼠死胎仔/孕鼠对照 104±22 84±3 10/10 12.6±2.6 0(10)给药 14±6＊ 6.5±5.3＊ 0/10＊ 0＊ 0(10)＊ P＜0.001，与对照组相比。在作为人类抗生育药物使用时，可口服或注射本文档来自技高网...

【技术保护点】
雷藤氯内酯醇的制备方法，其特征是对雷公藤多甙或直接用乙醇提取雷公藤原料后的提取物进行层析分离，以有机溶剂或复合有机溶剂进行洗脱，收集合并含有雷藤氯内酯醇的组分，然后结晶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕余，郑家润，马鹏程，张崇璞，陈，钱绍祯，许烨，张正行，盛龙生，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]