使用脐带血细胞治疗脑损伤制造技术

本发明专利技术涉及使用脐带血细胞进行慢性卒中、创伤性脑损伤和神经退行性病症的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用脐带血细胞治疗脑损伤相关申请本申请要求2008年3月观日提交的专利技术名称为使用脐带血细胞治疗脑损伤的美 国临时申请系列号61/072，173的优先权，其全部内容通过引用合并入本文。专利
本专利技术涉及脐带血细胞用于治疗脑损伤的用途。专利技术背景卒中一般是指阻断或减少对整个脑或部分脑的血液供给的任何事件。其在美国是 导致死亡的第三大病因和成人失能(adultdisability)的首要病因。卒中每年影响大约75 万人。三分之一的卒中患者在卒中发生后的一周内死亡。在存活的患者当中，相当大比例 的患者遗留下中度至严重的失能，包括但不限于面瘫、肢体瘫痪或全身瘫痪。已对治疗与卒中相关的慢性症状作了各种努力。最近，已报导使用G-CSF动员的 外周血细胞来治疗急性和慢性卒中症状。然而仍然存在对适合于大部分群体(包括对于自 体动员细胞疗法可能不合适的受试者)的治疗形式的需要。专利技术概述本专利技术在其广义上提供了使用脐带血细胞治疗脑损伤的方法。特别重要的是使用 脐带血细胞治疗慢性卒中和神经退行性疾病。本专利技术已令人惊讶地发现，当将脐带血细胞 施用入慢性卒中受试者的脑实质时，可逆转受试者经历的至少一些与卒中相关的失能。因此，在一个方面，本专利技术提供了治疗患有脑组织损伤的受试者的方法，其包括以 有效地治疗脑组织损伤的量给有此需要的人受试者的脑实质内施用富集了 CD34+、CD133+ 或⑶34+/⑶133+脐带血细胞的分离的脐带血细胞群体。在另一个方面，本专利技术提供了治疗慢性卒中的方法，其包括以有效地治疗卒中的 量将富集了⑶34+、⑶133+或⑶34+/⑶133+脐带血细胞的分离的脐带血细胞群体实质内施 用入已患有卒中的人受试者的脑，其中在卒中后7天以后施用所述分离的群体。在一个实 施方案中，在卒中后超过1个月施用群体。在另一个实施方案中，在卒中后超过3个月施用 群体。在另一个实施方案中，在卒中后超过6个月施用群体。在另一个实施方案中，在卒中 后超过1年施用群体。在另一个方面，本专利技术提供了治疗由创伤性脑损伤引起的脑组织损伤的方法。更 具体地，在一个实施方案中，本专利技术提供了通过将富集了⑶34+、⑶133+或⑶34+/⑶133+细 胞的分离的脐带血细胞群体施用入患有由创伤性脑损伤引起的脑组织损伤的受试者的脑 实质来治疗脑组织损伤的方法。此类脑损伤包括在创伤性脑损伤发生后存在数月(例如， 至少一个月)或数年的脑损伤。因此，可在创伤性脑损伤发生后超过1个月，超过3个月， 超过6个月，超过1年，或更长时间以后治疗受试者(即，可给受试者施用细胞)。在另一个方面，本专利技术提供了治疗患有神经退行性病症的受试者的方法，其包括 以有效地治疗神经退行性病症的量将富集了 CD34+或CD133+脐带血细胞的分离的群体实 质内施用入有此需要的人受试者的脑。神经退行性病症可以是但不限于帕金森病、阿尔茨5海默病、多发性硬化、亨廷顿病、匹克病、小脑变性和肌萎缩侧索硬化(ALS)。在一个实施方案中，在脑组织损伤发生或最早观察到这样的损伤后超过1个月施 用分离的群体。在另一个实施方案中，在脑组织损伤发生或最早观察到这样的损伤后超过6 个月施用分离的群体。在另一个实施方案中，在脑组织损伤发生或最早观察到这样的损伤 后超过1年施用分离的群体。各种实施方案适用于上述方面，并且在下文中引述此类实施方案。在一个实施方案中，群体富集了 CD34+脐带血细胞。在一个相关的实施方案中，群 体包括为至少75%⑶34+，或为至少90%⑶34+的单个核细胞。在另一个实施方案中，群体富集了⑶133+脐带血细胞。在一个相关实施方案中， 群体包括为至少75%⑶133+或为至少90%⑶133+的单个核细胞。在一个实施方案中，群体富集了⑶34+/⑶133+脐带血细胞。在相关实施方案中， 群体包括为至少75%⑶34+/⑶133+或为至少90%⑶34+/⑶133+的单个核细胞。在一个实施方案中，受试者至少60岁。在一个实施方案中，给受试者施用至少2X106个细胞。在另一个实施方案中，给 受试者施用至少5 X IO6个细胞。在另一个实施方案中，给受试者施用至少8 X IO6个细胞。在一个实施方案中，将群体施用至沿着受损的皮质脊髓束的3个位点。在一个实施方案中，群体来源于单个脐带血单位。在另一个实施方案中，群体来源 于多个脐带血单位。在一些相关的实施方案中，在6个组织相容性标志物中，群体与受试者 共有少于4个所述标志物。在另一个实施方案中，群体与受试者共有6个组织相容性标志 物中的至少4个。在本文中将更详细地描述本专利技术的这些和其他方面以及实施方案。附图概述附图无意按比例绘制。在不同图中举例说明的各相同或几乎相同的组分由相同的 数字代表。为了清楚起见，在每一幅附图中可能没有标出每一个组分。图IA是举例说明进行的模型研究的实验设计的示意图。图IB是一系列显示富集了⑶34和⑶133的细胞群体的表型的图。图2是显示两个实验组和一个对照组中身体摆动的恢复作为时间的函数的图。图3A是显示两个实验组和一个对照组中垂直运动作为时间的函数的图。图;3B是显示两个实验组和一个对照组中垂直运动的次数作为时间的函数的图。图3C是显示两个实验组和一个对照组中垂直运动时间作为时间的函数的图。图4是显示两个实验组和一个对照组中握力的百分比的图。图5是对照和实验动物中大鼠脑的PET影像。图6是显示针对GFAP或Neu-N (绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片 的照片。图7是显示针对MAP-2或vWF (绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片 的图像。图8A和8B是显示针对NG2(绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片的 图像。图9是显示针对A2B5(绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片的图像。附图说明图10是显示针对CNP酶(绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片的图像。图11是显示针对层粘连蛋白(绿色)和双苯甲亚胺(蓝色)染色的脑组织切片 的图像。图12显示来自慢性卒中动物的脑组织切片的MRI-T2扫描和普鲁士蓝染色。在慢 性卒中动物中观察到皮质梗塞(Corticalinfarction)。在注射后7天在右基底节区中观察 到了注射的干细胞。这些细胞沿着神经纤维迁移至梗塞区，其大小在移植后14天减小。图13A和B显示注射的染料沿着再生皮层脊髓束的运输的示意图和实际显微照 片。专利技术详述本专利技术部分基于一项重大的和令人惊讶的发现即脐带血细胞可逆转与慢性卒中 相关的症状。这是令人吃惊的，因为迄今卒中的许多效应一直被认为是不可逆的或一直未 能通过使用其他治疗改善。本专利技术涉及在卒中发生后甚至数年使用脐带血细胞对慢性卒中 受试者进行的治疗。本专利技术也部分地基于如下发现即必须将脐带血细胞施用入脑的实质。本专利技术的 各个方面和实施方案提供了将细胞更特别地放置至因卒中而损伤的脑的区域内。脐带血细 胞向此类受试者的全身性施用未曾引起任何治疗益处。本专利技术还部分基于如下发现即表达一个或多个早期造血标志物例如⑶34和 CD133的脐带血细胞特别适用于治疗慢性卒中。因此，本专利技术提供了包括将具有造血祖细胞 表型的脐带血细胞施用入慢性卒中受试者的脑实质的方法。具有造血祖细胞表型的细胞是 表达⑶34或⑶133或两者的细胞。如本文中所使用的，卒中本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗慢性卒中的方法，其包括　　将富集了ＣＤ３４↑［＋］、ＣＤ１３３↑［＋］或ＣＤ３４↑［＋］／ＣＤ１３３↑［＋］细胞的分离的脐带血细胞群体实质内施用至已经历卒中的人受试者的脑，其中在卒中后超过７天施用所述分离的脐带血细胞群体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2008-3-28 61/072,1731.用于治疗慢性卒中的方法，其包括将富集了⑶34+、⑶133+或⑶347⑶133+细胞的分离的脐带血细胞群体实质内施用至 已经历卒中的人受试者的脑，其中在卒中后超过7天施用所述分离的脐带血细胞群体。2.权利要求1的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体富集了CD34+脐带血细胞。3.权利要求1的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体富集了CD133+脐带血细胞。4.权利要求1的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体富集了CD34+/CD133+脐带血细胞。5.权利要求1或2的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少75%⑶34+的 单个核细胞。6.权利要求1或2的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少90%⑶34+的 单个核细胞。7.权利要求1或3的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少75%⑶133+ 的单个核细胞。8.权利要求1或3的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少90%⑶133+ 的单个核细胞。9.权利要求1或4的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少75%⑶34+/ ⑶133+的单个核细胞。10.权利要求1或4的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体包含为至少90%⑶34+/ ⑶133+的单个核细胞。11.权利要求1的方法，其中所述受试者至少60岁。12.权利要求1、2、3或4的方法，其中给所述受试者施用至少2XIO6个细胞。13.权利要求1、2、3或4的方法，其中给所述受试者施用至少5XIO6个细胞。14.权利要求1、2、3或4的方法，其中给所述受试者施用至少8XIO6个细胞。15.权利要求1、2、3或4的方法，其中在卒中后超过1个月施用所述分离的脐带血细胞 群体。16.权利要求1、2、3或4的方法，其中在卒中后超过6个月施用所述分离的脐带血细胞 群体。17.权利要求1、2、3或4的方法，其中在卒中后超过1年施用所述分离的脐带血细胞群体。18.权利要求1、2、3或4的方法，其中将所述分离的脐带血细胞群体沿着受损的皮质脊 髓束施用至3个位点。19.权利要求1、2、3或4的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体来源于单个脐带血单位。20.权利要求1、2、3或4的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体来源于多个脐带血单位。21.权利要求1、2、3或4的方法，其中在6个组织相容性标志物中，所述分离的脐带血 细胞群体与所述受试者共有少于4个所述组织相容性标志物。22.权利要求1、2、3或4的方法，其中所述分离的脐带血细胞群体与所述受试者共有6 个组织相容性标志物中的至少4个。23.用于治疗脑组织损伤的方法，其包括将富集了⑶34+、⑶133+或⑶34+/⑶133+脐带血细胞的分离的脐带血细胞群体实质内 施用至已经历脑组织损伤的人受试者的脑。24....

【专利技术属性】
技术研发人员：SZ林，WC徐，H李，
申请(专利权)人：永生细胞生技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]