包含能向人或动物消化道释放氧化氮的丙酸杆菌的可吸收组合物制造技术

本发明专利技术涉及丙酸杆菌用于产生一种食物组合物或一种可吸收的食用或药用组合物的用途，这些组合物能在人或动物的消化道中释放生理上显著量的氧化氮。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种可吸收的普通食物组合物或一种可吸收的食用或药用组合物，它包含能向人或动物的消化道中释放生理上显著量的氧化氮的丙酸杆菌。几十年来，完全忽视了氧化氮是一种对于生命和维持生命必需的成分；因此，直到4或5年前，研究人员仍几乎未注意在医药、营养或生理学中与该氧化物的存在相关的益处。只是最近，才把大量的生理学功能归因于氧化氮，并提出一种假说，即该气体可广泛参与多样的功能如控制动脉压、巨噬细胞的非特异细胞毒功能、血小板聚集和神经传递或控制消化道的运动性。从这种假设开始，涉及氧化氮的研究迅速增多，并且该气体的重要性能够得到证实。已知氧化氮是一种非常不稳定的气体(在生物系统中半寿期少于5秒)，它是由一组被称为NO合酶(NOS)的酶通过人或动物体内的生物合成从L-精氨酸产生的，NOS存在两种主要类型，即，一方面是尤其在内皮细胞、血小板和神经元中表达的组成型NOS，以及另一方面主要由免疫系统的某些细胞(尤其是巨噬细胞和多形核白细胞)、血管平滑肌和内皮细胞表达的诱导型NOS。应当指出，诱导型NOS的NO产量比组成型NOS的NO产量高几个数量级，但是无论如何，此产量都仍然是相对较低的。现在，假如氧化氮有上述有益的作用，所希望的是能够提高产量，特别是通过使用食物代谢的天然途径提高产量。然而，至今尚未提出达到这种结果的方法。本专利技术的目的是填补这一空白。根据本专利技术，实现所希望的目标是可能的，因为令人惊奇地观察到一种特殊类型的细菌丙酸杆菌能产生氧化氮，并且在这些细菌中，某些种和这些种中的某些株可大量产生氧化氮。尽管丙酸杆菌不属于通常经基于牛奶的甜食或其它发酵乳制品引入体内的乳酸菌或双歧杆菌的组群，但几个世纪以来它仍存在于人的食物中实际上，正是这些细菌在被称为“瑞士多孔干酪(emmental)”的干酪的加工过程中产生空孔，这种干酪成熟后包含大约109个细胞/克的丙酸杆菌。应当指出，这些细菌的发酵尤其产生丙酸、乙酸和二氧化碳。上述发现是更加令人吃惊的，因为能证实通常用于农业食品部分的乳酸菌、双歧杆菌和/或酵母不产生一氧化碳。因此本专利技术涉及丙酸杆菌产生一种可吸收的普通食物组合物或一种可吸收的食用或药用组合物的应用，这种组合物能向人或动物的消化道内释放生理上显著量的氧化氮。根据本专利技术，这种组合物能由一种精细的制剂组成，并且/或能以液体形式(尤其是发酵的液体)、以干燥形式或以适中的含湿量的形式存在。然而更具体地，应当指出，不背离本专利技术的范围该组合物可以是-特殊制剂的形式，它是根据其唯一的生理学目的而调整的，即能释放生理上显著量的氧化氮的丙酸杆菌的摄食，-或者是精细的食物制剂的形式，平行地，它具有另一种更严格的能量或功能目的；在后一种情况中，能将丙酸杆菌加入或掺入食物本身中，特别是干酪、食用纤维如谷物片或发酵的牛奶、甜食奶油、蛋糕和/或滋补饮料等等中。根据本专利技术，能以生物质的形式或以能原处繁殖的发酵剂的形式引入丙酸杆菌。当将其脱水时，该组合物方便地为单个组分的形式，它包含需要被定期吸收的细菌剂量。这些组分能直接摄食或在一种液体中预先稀释；它们可以以便于吸收的形式包装片剂、颗粒粉末的小袋、液体，等等。已经证实，这种浓缩的干燥丙酸杆菌制剂在+4℃贮存一年后，浓度下降少于一个Log单位。经验显示，能或不能耐受胃的明胶胶囊是一种特别便利的包装类型。根据本专利技术的另一个特征，每种单个组分包含大量的细菌，优选地超过109个的细菌。多种实验(概述于下)证实了丙酸杆菌不同株在其培养中产生NO的相当特殊的能力，方法是首先间接测定亚硝酸盐离子NO2[sic]，然后直接在厌氧培养基中进行质谱分析。在这些实验中，第一阶段研究在富含精氨酸及缺乏硝酸盐(50μM)的培养基中的亚硝酸盐浓度，认识到在观察的NO产生中精氨酸不是决定因素。第二阶段，研究补充硝酸盐的培养基。后一种情况中获得的结果显示了氧化氮产生的依赖硝酸盐的性质。1-比较性预试验在补充酵母提取物(10g/l)的重建的牛奶培养基(100ml)存在下，培养不同细菌株(酸乳酪种菌、双歧杆菌、乳杆菌)，然后在37℃温育。经一定时间测定亚硝酸盐的积累。在以下条件下进行这些预试验·在37℃温育0、4、7或10小时，·3个重复样本，·用Bran-Luebbe系统进行亚硝酸盐的测定。基于所分析的提取物的性质，随后进行样品的纯化步骤，方法是离心两次(2×10分钟，4℃，15,000转/分)，随后在Miniprep 10柱(MW＞10kD的蛋白质滞留)上进行超滤，然后将样品通过Waters C18树脂(55-105μm)部分纯化。第一阶段，对标准亚硝酸盐样品(附图说明图1)试验了该方法，然后对温育7小时的乳杆菌培养提取物试验该方法，此提取物中添加或以其它方式加入已知量的亚硝酸盐(图2)。图1显示在Bran-Luebbe自动分析线中获得的以下比色分布图1)温育10小时后的双歧杆菌培养基，2)标准亚硝酸盐溶液，3)相同的经超滤的溶液，4)经超滤且通过C18树脂的相同溶液。图2显示在Bran-Luebbe自动分析线中获得的以下比色分布图(1)37℃温育10小时后的乳杆菌培养基，(2)、(3)含410μg亚硝酸盐/l的标准溶液，(4)、(5)37℃温育10小时后的乳杆菌培养基，其中加入了已知量的亚硝酸盐，以便获得含820μg/l亚硝酸盐的溶液。通过离心-超滤及通过C18树脂在上述条件下纯化这些样品。根据这些试验，不论各温育时间(0、4、7或10小时)，用酸乳酪种菌、双歧杆菌或乳杆菌都未能检测到亚硝酸盐的积累。2-丙酸杆菌培养物的亚硝酸盐积累的证明预先用比色测定法(Boehringer试剂盒)研究在YEL培养基制剂中硝酸盐或亚硝酸盐的可能的存在于是能证明在该培养基(大约50-100μM的浓度)中明显量的硝酸盐的存在，这些硝酸盐可能来源于用于该培养基制造的酵母提取物；另一方面，证实该YEL培养基完全不含亚硝酸盐。检测了丙酸杆菌培养物(每100ml YEL培养基中1g冻干品)。这些试验在以下条件下进行·在30℃温育24、48或72小时，·24小时温育3个重复样本，·经煮沸终止温育，·经离心及使提取物通过C18树脂对产物的纯化，·通过Bran-Luebbe系统的分析测定培养基中的亚硝酸盐。测定丙酸杆菌积累的亚硝酸盐，以建立YEL培养基中亚硝酸盐积累为细菌温育时间的函数的动力学。图3一方面显示产生的亚硝酸盐量的变化(μg/100ml培养物)为温育时间(小时)的函数(□)，另一方面显示浊度的变化(λ＝650nm处的吸光度)也为温育时间的函数(○)。该图显示亚硝酸盐的量在24小时时最大，然后在温育48小时和72小时后显著降低。可以合理地认为，这种降低是由于亚硝酸盐还原酶使亚硝酸盐还原为NO、N2O或其它化合物引起的。根据本专利技术，能证明NO2的积累依赖于使用的丙酸杆菌的种或株。通过以下概述的试验证实了这种情况3-对于4种不同丙酸杆菌种的9个株，培养基中亚硝酸盐积累的证明和对比根据本试验，研究了费氏丙酸杆菌(P.freudenreichii)种的P20、P23、2408、2410、2500和2501株，以及分别属于特氏丙酸杆菌(P.thoenii)、丙酸丙酸杆菌(P.acidipropionici)和詹氏丙酸杆菌(P.jenseni本文档来自技高网...

【技术保护点】
丙酸杆菌产生一种可吸收的普通食物组合物或一种可吸收的食用或药用组合物的用途，该组合物能向人或动物的消化道中释放生理上显著量的氧化氮。

【技术特征摘要】
FR 1996-12-24 96/15977;FR 1997-1-28 97/008851.丙酸杆菌产生一种可吸收的普通食物组合物或一种可吸收的食用或药用组合物的用途，该组合物能向人或动物的消化道中释放生理上显著量的氧化氮。2.根据权利要求1的用途，其特征在于该组合物由干燥的制剂组成。3.根据权利要求2的用途，其特征在于该组合物为单个组分的形式，包含需要定期吸收的细菌剂量。4.根据权利要求3的用途，其特征在于每一单个组分中包含超过109个细菌。5.根据权利要求1的用途，其特征在于该组合物由发酵的或非发酵的液体制剂组成。6.根据权利要求1的用途，其特征在于该组合物是一种精细的制剂，丙酸杆菌被加入或掺入到食物如干酪或食用纤维中。7.可吸收的食用或药用组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：ED卢梭，CG勒格兰德，MH勒格兰德，N罗兰德，
申请(专利权)人：斯坦达实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]