氧化性应激因子的水平降低制造技术

本发明专利技术涉及一种细菌菌株在生产用于使氧化应激因子水平降低的药物中的应用，所述菌株优选乳杆菌属或丙酸杆菌属中可在肠道中产生增加量的丙酸的菌种，所述因子如哺乳动物包括人体内的ＩＬ－６、反应性氧属（ＲＯＳ）、以及粘附分子。所述药物可用于预防和／或治疗慢性炎性疾病如风湿性疾病和牛皮癣。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一或多种细菌菌株在降低哺乳动物包括人体内氧化性应激因子(oxidative stress factors)水平中的应用。
技术介绍
氧化性应激因子是主要导致机体内氧化强化状态(prooxidant)的多种分子的常用术语。所述分子，如IL-1、IL-6、ROS(反应性氧属)、IL-8、8-异前列腺素(isoprostaglandin)、VCAM(脉管细胞粘附分子)以及ICAM(细胞内粘附分子)在前炎性和炎性状态下水平升高。所述氧化性应激因子也称为炎性标志物，但后者还包括所谓的二级分子，其由所述氧化性应激因子启动，如急性期蛋白。与其它氧化性应激因子一样，ROS由单核细胞和淋巴细胞产生。其特有水平的正常产生可以维持体内内环境的自稳。氧化性应激因子的水平升高是急性和慢性炎症的典型症状。在慢性炎症中，老化的不断加深带来动脉硬化症和癌症的危险。慢性炎性状态可以由例如吸烟过度或病毒和细菌的慢性感染引起。另一组慢性炎性疾病包括自身免疫病如风湿性疾病和牛皮癣。慢性炎性病人目前接受抗生素、高剂量维生素或其它药物的治疗。抗生素的使用由于某些原因应予以避免，药物的使用常常带来不必要的负作用。风湿性疾病则使用例如有效而昂贵的布洛芬(ibuprofen)治疗，它有胃部负作用。对牛皮癣病人而言目前尚无对症药物。现有技术以Otsuka制药有限公司的名义申请的EP 0649603A1涉及一种抗氧化食物，其包括内含天然含镁物质(如茶叶)之食物经由微生物如植物乳杆菌发酵而产生的产物。选择上述细菌是由于其催化活性以及超氧化物歧化酶样活性，它们在机体内产生抗氧化活性，但仅在镁存在时有作用。Nenonen,MT.等，英国风湿病学杂志，1998年3月，37(3)，第274-81页描述了未煮过的富含乳杆菌的绝对素食食物对类风湿病人的影响。有一半的病人出现诸如恶心和腹泻等副作用，并因此中止了实验，但另一半病人的症状得到不同程度的缓解。据推测每天食用乳杆菌可能还有利于针对性地测定类风湿性关节炎。Seikenkai的US 4,314,995涉及一种对患有传染病所致感染或炎症的病人进行治疗的方法，其包括给与至少一种乳杆菌，其有不同于已知乳杆菌的营养需求，即它具有在一种特异性低营养培养基中生长的能力。该专利技术提到了5种不同的乳杆菌菌株。国际食品微生物学杂志，42(1998)29-38，公开了每天摄入400ml含燕麦的刺玫果(rose-hip)饮料(由微生态制剂植物乳杆菌发酵产生)达3周后，短链脂肪酸(SCFA)乙酸和丙酸的粪便中总浓度有显著增长。这种据称与基础饮食无关的增长可解释为所摄入的微生态调节菌株导致的SCFA产生，或解释为该菌株对结肠中其他SCFA生产菌株的刺激或抑制。专利技术详述本专利技术涉及一种于肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株的应用，其用于制备可降低哺乳动物包括人类中氧化性应激反应水平的药物。本专利技术尤其涉及一种于肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株的应用，其用于制备可降低哺乳动物包括人类中IL-6、ROS、以及单核细胞对内皮细胞之粘附因子的水平的药物。氧化性应激因子，如白细胞介素1和白细胞介素6等细胞因子、ROS、以及单核细胞对内皮细胞之粘附分子的高水平是前炎性和炎性状态的特征。于肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株优选乳杆菌属或丙酸杆菌属的一种菌株。根据本专利技术的一个优选实施方案，所述细菌菌株是植物乳杆菌。植物乳杆菌的优选菌株是植物乳杆菌299v，其已保藏在DSM，德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen von Zellkulturen GmbH,Braunschweig，德国，录入号DSM9843)。本专利技术还涉及一种于肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株的应用，其用于制备可预防和/或治疗慢性炎性疾病的药物。可根据本专利技术治疗的慢性炎性或前炎性疾病可由不同细菌如肺炎衣原体和幽门螺杆菌，或毒性物质如烟碱所诱导。例如已证实，连续1个月每天摄入400ml由植物乳杆菌DSM9843(5×107cfu/ml)发酵产生的含燕麦之刺玫果饮料Pro Viva后，抗幽门螺杆菌的抗体量减少。根据本专利技术的一个优选应用是用于预防和/或治疗自身免疫病如类风湿性疾病和牛皮癣。附图简述附图说明图1显示用发酵的燕麦粥处理后，单核细胞对内皮细胞之粘附的减少。图2显示用发酵的燕麦粥处理后，单核细胞对受刺激的内皮细胞的粘附的减少。图3显示用发酵的燕麦粥处理之前和之后，单核细胞中ROS的产生。实验以下实验旨在测定给与能在肠道中产生增加量丙酸之微生态调节菌株对已有上述因子之水平升高的受试者血液中氧化性应激因子水平的影响。连续3周或6周每人每天给与25ml浓燕麦粥，其用植物乳杆菌DSM9843(含1×109cfu/ml)发酵产生。方法外周血单核细胞(PBMC)PBMC经密度梯度离心从加了肝素的血液中分离。所述血液用PBS稀释。将25ml稀释的血液迅速加在15ml Ficoll-Paque液面上，离心(1900rpm,40分钟，22℃)。将混合的单核细胞层吸出并用PBS洗涤。计数分离出的PBMC，并分为两部分。其一用于测定细胞内ROS的产生，另一用于粘附试验。单核细胞制剂由约30％单核细胞和70％淋巴细胞组成。内皮细胞的分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用胶原酶消化脐带而得到，如Jaffe,E.A.等，来源于脐静脉的人内皮细胞的培养，临床研究杂志，1973；52:2745-2756所述。简言之，用PBS灌注脐带静脉以除去血细胞，充之以0.1％胶原酶(Ⅰa型)，于37℃C静置10分钟。在内皮细胞(EC)悬浮液中添加FBS，胎牛血清，并于1200rpm离心10分钟。于37℃,5％CO2的一定湿度空气环境中，在M-199培养基中培养EC。该培养基还包含100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素，2.5μg/ml两性霉素B,20mM HEPES,20％FBS和50μg/ml内皮细胞生长添加剂(ECGS)。HUVEC在包被了明胶的25cm2烧瓶中培养。每2天更换一次培养基，直至细胞融合(3-5天)。HUVEC纯度用coble-stone形态学(常用于静息态EC和Ⅷ因子的染色)评估。用0.01％胰酶/EDTA使融合的HUVEC脱壁，所述胰酶/EDTA用FBS拮抗。试验1．对ROS产生的影响在该试验中，向6名因吸烟过度而具有高水平反应性氧属ROS的健康志愿者给与由植物乳杆菌DSM9843发酵产生的浓燕麦粥，评估该给药的影响。平均年龄是32岁，体重指数为26.6kg/m2。每人每天给与25ml，共3周。收集6个志愿者的血液。如上述经Gradisol L密度梯度离心分离外周血单核细胞(PBMC)。对细胞氧化的分析是基于反应性氧属(ROS)介导的转化反应，该转化反应将以2,7’-二氯荧光素二乙酸酯的形式装载于细胞中的非荧光性2,7’-二氯荧光素(DCFH)转化为荧光性DCF，其中该DCF的荧光发射能力增强，反映出氧化压力增加。将新鲜分离的、包含约30％单核细胞和70％淋巴细胞的PBMC重新悬浮于磷酸盐缓冲液(PBS)，然后与20μM2’,7-二氯荧光素在37℃避光保温30分钟。然后用PBS洗涤细胞。荧光基团2’,7-二氯荧光素(由其非荧光性前体通过过氧化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用，其为能在肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株在制备能降低哺乳动物包括人之氧化性应激因子水平的药物中的应用。

【技术特征摘要】
SE 1998-10-1 9803334-3;SE 1999-2-4 9900371-71．一种应用，其为能在肠道中产生增加量丙酸之细菌菌株在制备能降低哺乳动物包括人之氧化性应激因子水平的药物中的应用。2．权利要求1的应用，其中所述细菌菌株是乳杆菌属或丙酸杆菌属的菌株。3．权利要求1或2的应用，其中所述细菌菌株是植物乳杆菌。4．植物乳杆菌299v，保...

【专利技术属性】
技术研发人员：马雷克纳鲁泽威茨，
申请(专利权)人：普罗比公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]