提供一种用于免疫比浊法的测定试剂，该测定试剂可以抑制不溶性载体颗粒量和单克隆抗体量，提高对于低浓度范围的测定对象的测定灵敏度，能够在宽浓度范围对测定对象进行测定，并且，还能够应用于试验片等待测物分析用具。所述测定试剂包含平均粒径不同的２种不溶性载体颗粒群，其构成为：其中一种不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体，另一种不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。优选前者为平均粒径小的不溶性载体颗粒群，后者为平均粒径大的不溶性载体颗粒群。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及测定试剂、使用其的免疫比浊法和待测物分析用具。
技术介绍
一直以来，作为临床检查中的免疫学测定方法，使用酶免疫分析法(EIA法)、免疫比浊法等。其中，使用胶乳颗粒作为 不溶性载体颗粒的免疫比浊法，由于改良了测定灵敏度(例如， 参照专利文献l ~ 4),并且能够利用自动分析仪器，因此近年来 被广泛〗吏用。所述使用胶乳颗粒的免疫比浊法也被称作胶乳凝集免疫比 浊法。该方法是利用以下方式的测定方法使用负载有测定对 象的抗体的胶乳颗粒，所述一皮负载的抗体与待测物中的测定对 象(抗原)发生抗原抗体反应，从而所述胶乳颗粒凝集。所述 待测物中的测定对象中具有例如j象在体内发生炎症反应等时血 液中所出现的C反应性蛋白(CRP)那样的、以4艮宽的浓度范围 存在于血液中的物质。因此，所述使用胶乳颗粒的免疫比浊法， 除了前述的提高灵敏度之外，还被要求能够在很宽的浓度范围 内对所述测定对象进行定量。因此，提出了例如下述专利文献 1 ~ 4中所记载的那样的使用2种胶乳颗粒的方法。专利文献l中公开了 一种使用附加有不同量的同 一抗原或 同一抗体的、平均粒径不同的2种胶乳颗粒的方法。另外，专利 文献2中公开了以下方法将抗体或抗原致敏后的、平均粒径不 同的2种以上的胶乳颗粒混合，并照射特定波长的光。另外，专 利文献3中公开了 一种使用固定有单克隆抗体的、平均粒径不同的2种胶乳颗粒的方法。此外，专利文献4中公开了 一种方法，该方法中使用了将分别用不同的单克隆抗体致敏而成的2种抗体致敏胶乳颗粒以特定比例混合后的物质。专利文献l:日本特7>昭63 - 14783号7>净艮专利文献2:日本专利第2588174号公报专利文献3;曰本净争开2005 _ 106609号7>寺艮专利文献4:日本专利第3598701号乂>净艮
技术实现思路
然而，如所述专利文献l ~ 3中所公开的那样的、使用平均粒径不同的2种l交乳颗4立的免疫比浊法，例如如下所述，难以确保测定对象(抗原)的可测定的浓度范围和测定灵敏度。即，所述免疫比浊法中，例如，为了确保对于低浓度的测定对象的测定灵敏度，需要增多平均粒径大的颗粒(大颗粒)的抗体致敏量，减少平均粒径小的颗粒(小颗粒)的抗体致敏量。然而，若减少对所述小颗粒的抗体致敏量，则为了确保测定对象的可测定的浓度范围，需要增加抗原抗体反应时的小颗粒量。其结果，胶乳颗粒所需要的成本升高。另外，由于抗原抗体反应时整体颗粒浓度变高，容易发生非特异性凝集。此外，若过量增加抗原抗体反应时的小颗粒量，则对于低浓度的测定对象的测定灵敏度反而会降低。另一方面，代替增加抗原抗体反应时的小颗粒量，而增加致敏反应时用于致每文小颗粒的抗体量，则测定对象为低浓度的情况下，小颗粒先于大颗粒而更多地与测定对象反应，因此难以确保对于低浓度的测定对象的测定灵敏度。此外，若减少小颗粒量，则可能会发生前区现象，另外，由于凝集的颗粒数减少，所以难以获得高浓度侧的灵敏度。这样，浊法中，例如，对最佳平均粒径的组合、用于致敏胶乳颗粒的抗体的比例、2种胶乳颗粒的混合比例、抗原抗体反应时的胶乳颗粒浓度等的控制很困难，难以确保对于低浓度的测定对象的测定灵敏度和测定对象的可测定的浓度范围。另一方面，如所述专利文献3和4中所/>开的那样的、使用负载有单克隆抗体的胶乳颗粒的方法，其目的在于防止前述非特异性凝集和确保测定灵敏度。然而，该方法由于使用单克隆抗体，因此存在成本高的问题。此外，单克隆抗体由于只有一种抗原识别部位，因此除了测定对象抗原为多价或多聚体的情况外，仅使用一种抗体则无法通过抗原抗体反应发生凝集。因此，在使用单克隆抗体的情况下，需要将多种单克隆抗体进行组合，但由于所选择的抗体需要满足相互的抗原识别部位不同、不会接近、不受位阻等条件，因此非常复杂。而且，通常仅单克隆抗体的话，则对于低浓度的测定对象的测定灵敏度较低。另外，胶乳凝集免疫比浊法中，在待测物中的测定对象(抗原)的浓度高的情况下，例如，若所述待测物的稀释率低，则稀释后的待测物(测定试样)中的测定对象的浓度依然4艮高，因此存在测定范围窄的问题。因此，胶乳凝集免疫比浊法无法像例如使用微芯片的测定方法那样应用于待测物稀释率低的测定方法中。因此，本专利技术的目的在于提供一种例如可以抑制不溶性载体颗粒量和单克隆抗体量、提高对于低浓度范围的测定对象(抗原)的测定灵敏度、能够在宽浓度范围对测定对象进行测定，并且，还能够应用于试验片等待测物分析用具的测定试剂，以及使用该测定试剂的免疫比浊法和待测物分析用具。为了达成所述目的，本专利技术的测定试剂的特征在于，其为用于免疫比浊法的测定试剂，所述测定试剂包含含有多个负载有抗体的不溶性载体颗粒的不溶性载体颗粒群，所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的2种以上的不溶性载体颗粒群，所述平均粒径不同的2种以上的不溶性载体颗粒群中，至少l种不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体，其他种类的不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。本专利技术的免疫比浊法的特征在于，该方法使用了具有不溶性载体颗粒群的测定试剂，所述不溶性载体颗粒群含有多个负载有抗体的不溶性载体颗粒，通过使作为抗原的测定对象与所述抗体反应，从而使所述不溶性载体颗粒群凝集，作为所述测定试剂，使用本专利技术的测定试剂。本专利技术的待测物分析用具的特征在于，其为用于免疫比浊法的待测物分析用具，其具有基板和测定试剂，并且在所述基板上配置有所述测定试剂，所述测定试剂为本专利技术的测定试剂。本专利技术人等为了达成所述目的，反复进行了一系列的研究。结果发现，如果使用以下测定试剂作为测定试剂的话，则能够以很少的颗粒量和单克隆抗体量对从低浓度至高浓度的测定对象(抗原)进行测定，从而完成了本专利技术。该测定试剂为包含不溶性载体颗粒群，所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的2种以上的不溶性载体颗粒群，其中，至少l种不溶性载体颗粒群负载有多克隆抗体和单克隆抗体，其他的不溶性载体颗粒群负载有所述两种抗体中的至少一种抗体。根据本专利技术，能够在很宽的浓度范围对测定对象进行定量，而且，能够高灵敏度地测定低浓度的测定对象。另外，根据本专利技术，能够利用待测物分析用具等，并且能够降低成本。附图说明图l为示出本专利技术的实施例中使用各种测定试剂对CRP浓度和吸光度变化量的关系进行测定的结果的图。图2为示出本专利技术的其他实施例中使用各种测定试剂对CRP浓度和吸光度变化量的关系进行测定的结果的图。图3为本专利技术的待测物分析用具的一个例子，(A)为所述待测物分析用具的平面图，(B)为所述(A)中所示的待测物分析用具的从I - I方向所观察的截面图。图4为示出本专利技术的其他实施例中使用配置有千系测定试剂的待测物分析用具对CRP浓度和吸光度变化量的关系进行测定的结果的图。附图标记说明1 待测物分析用具2a 上基板2b 下基板3 试剂部4 测定部5a、 5b 流路6 测定试剂7 贯通孔、导入口8 开口部具体实施方式本专利技术的测定试剂中，所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的2种不溶性载体颗粒群，所述2种不溶性载体颗粒群中，优选平均粒径小的不溶性载体颗粒群中的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体，优选平均粒径大的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于免疫比浊法的测定试剂，其特征在于，所述测定试剂包含含有多个负载有抗体的不溶性载体颗粒的不溶性载体颗粒群， 所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的２种以上的不溶性载体颗粒群， 所述平均粒径不同的２种以上的不溶性载体颗粒群中 ， 至少１种不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体， 其他种类的不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2007-11-21 302182/20071.一种用于免疫比浊法的测定试剂，其特征在于，所述测定试剂包含含有多个负载有抗体的不溶性载体颗粒的不溶性载体颗粒群，所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的2种以上的不溶性载体颗粒群，所述平均粒径不同的2种以上的不溶性载体颗粒群中，至少1种不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体，其他种类的不溶性载体颗粒群中所含有的不溶性载体颗粒负载有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。2. 根据权利要求l所述的测定试剂，其中，所述不溶性载 体颗粒群包含平均粒径不同的2种不溶性载体颗粒群，所述2种不溶性载体颗粒群中，平均粒径小的不溶性载体颗粒群中的不溶性载体颗粒负载 有多克隆抗体和单克隆抗体，有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。3. 根据权利要求l所述的测定试剂，其中，所述不溶性载所述2种不溶性载体颗粒群中，有多克隆抗体和单克隆抗体，平均粒径小的不溶性载体颗粒群中的不溶性载体颗粒负载 有多克隆抗体和单克隆抗体中的至少一种抗体。4. 根据权利要求l所述的测定试剂，其中，所述不溶性载 体颗粒为力交乳颗粒。5. 根据权利要求2所述的测定试剂，其中，用于致敏所述平均粒径小的不溶性载体颗粒群中的不溶性载体颗粒的所述多克隆抗体和所述单克隆抗体的抗体浓度比为1: 9~7: 3。6. —种免疫比浊法，其特征在于，该方法使用了具有不溶 性载体颗粒群的测定试剂，所述不溶性载体颗粒群含有多个负 载有抗体的不溶性载体颗粒，通过使作为抗原的测定对象与所述抗体反应，从而使所述不溶性载体颗粒群凝集，作为所述测定试剂，使用权利要求l所述的测定试剂。7. 根据权利要求6所述的免疫比浊法，其中，所述测定试 剂中的所述不溶性载体颗粒群包含平均粒径不同的2种不溶性 载体颗粒群，所述2种不溶性载...
【专利技术属性】
技术研发人员：高木英纪，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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