赭曲霉毒素的固相萃取制造技术

技术编号:4557398 阅读:175 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了能够结合赭曲霉毒素的聚合物。该聚合物可用于赭曲霉毒素的固相萃取和将赭曲霉毒素固定在固相萃取(SPE)盒中,以对从食品或动物饲料提取的液体中的赭曲霉毒素进行定性或定量的分析。该聚合物可从含氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的单体制备。优选的实施例是,从2-丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)和从二乙基氨乙基甲基丙烯酸酯(DEAEM)与衣康酸(IA)的混合物制备的聚合物。所述聚合物最好是例如使用乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)或二乙烯基苯(DVB)交联的,并通过在有致孔溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)存在时进行聚合而成为大孔的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种适于结合赭曲霉毒素的聚合物。该聚合物可用于赭曲霉毒素的固相萃取和将赭曲霉毒素固定在固相萃取(SPE)盒中, 以对从食品提取的液体中的赭曲霉毒素进行定性或定量的分析。
技术介绍
人类食品和动物饲料种类繁多,包括食用坚果、油籽、谷物和饲 料,从它们中衍生的产品容易受到霉菌毒素污染,所述霉菌毒素是真菌 的有毒代谢的副产品,这可以在食品和饲料作物被收获之前和之后发生赭曲霉毒素A是由一些曲霉的物种和由青霉菌孢产生的赭曲霉毒 素化合物的结构相关官能团中最重要和最常见的,上述曲霉例如是主要 在热带地区的A.赭曲霉,所述青霉菌孢是在温带地区如加拿大、东欧 、西欧、北欧和南美洲部分地区常见的存储真菌。欧盟最近提出了一项 关于赭曲霉毒素A的最高含量的法令,在包括大米和荞麦的谷物原料中 是5 u g/kg,在谷物衍生产品或供人类直接消费的谷物产品中是3 u g/kg ,且在干葡萄果实中是10ug/kg。因此对赭曲霉毒素水平的直接测定是 食品和饲料的质量控制中的重要方面。对霉菌毒素含量的测量通常使用高效液相色谱法(HPLC)进行。 然而,在高效液相色谱设备无法使用或不适于使用的情况下,通过薄层 色谱法(TLC)来测定也是可行的。在TLC分离后,用发射波长366纳 米的汞灯作为光源以激发荧光,该荧光用光电倍增管检测和量化,这样 可以使用商用扫描仪进行霉菌毒素测量。对于定量检测,还有放射免疫 检定技术和以免疫化学为基础的技术,如酶联免疫吸附测定(ELISA) 方法。从食品样品中提取的溶液在例如使用HPLC定量测定之前,可使用固相萃取对该溶液进行"清理"工序,以去除可能会干扰霉菌毒素的 评估的化合物。可以使用小型色谱柱(称为"微型柱",mini-column)进行霉菌 毒素的定量检测,其中在微型柱的矿物吸附剂内霉菌毒素被固定为一 层。在紫外线光下观察微型柱,被固定的霉菌毒素会产生荧光。多种微 型柱方法已经被采纳成为AOAC国际(官方分析化学家协会Association of Official Analytical Communities )的正式观iji式。WO 2006/123189描述了一种对固定在微型柱的层中的霉菌毒素进 行定量荧光测定的装置,并且还提到了分子印迹聚合物和非分子印迹(空白)聚合物作为SPE盒中霉菌毒素吸附剂的用途。WO 2003/101580公开了一种用于将霉菌毒素与固体载体结合的方 法,其中包括利用霉菌毒素作为模板来制备分子印迹聚合物(MIP)。 从所提到的霉菌毒素和功能单体的大批清单中,实际制备的一些MIP仅 使用霉菌毒素脱氧萎镰菌醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZON)作为模 板。对于DON的MIP是以二乙基氨乙基-甲基丙烯酸甲酯(DEAMA) 、 4-乙烯基吡啶(4-VP)或甲基丙烯酸(MAA)与作为交 联剂的乙二醇-甲基丙烯酸酯(EDMA)或二乙烯基苯(DVP)聚合而 成。对于ZON的MIP是用EDMA作为交联剂以三氟甲基丙烯酸(TFM)或4-VP聚合得到的。WO 2006/120381公开了一种包括用于结合麻醉异丙酚的分子印迹 聚合物的传感器。该聚合物由从N, N-二乙基氨乙基甲基丙烯酸酯 (DEAEM)、丙烯酰胺、2 (三氟甲基)丙烯酸(TFMAA)、衣康 酸和甲基丙烯酸磷酸乙二醇酯(EGMP)中的一种或多种所选择的一种 单体和交联剂组成。在聚合过程中异丙酚用作模板以达到预期的分子印 迹
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可用作对于赭曲霉毒素有选择性的SPE吸附剂的聚合物。本专利技术是基于以下发现含有氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的聚合物在用作SPE吸附剂时能够固定赭曲霉毒素。因此,本专利技术的一个方面提供了一种含有氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的聚合物,它用作SPE吸附剂以固定赭曲霉毒素。如果这种聚合物本身是新颖的,它们也形成本专利技术的另一个方面。用于本专利技术的聚合物可通过常规聚合技术制备,不使用赭曲霉毒素或结构类似物作为模板(template)。所述聚合物优选被制备为大孔性的(macroporous),例如通过在聚合过程中使用致孔剂形成。本专利技术的另一个方面是一种SPE吸附剂单元,包括装有或涂有包含氨基或氨基-垸基基团和酸性基团的聚合物的吸附剂层的柱、试管、棒、针、膜或平整表面。本专利技术的再一个方面是包含氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的聚合物作为赭曲霉毒素的吸附剂的用途。本专利技术的又一个方面是一种赭曲霉毒素的荧光分析方法,包括以下步骤将赭曲霉毒素吸附在装入或装在试管、盒、棒或平整表面中的一种包含氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的聚合物上,使所固定的赭曲霉毒素曝露在紫外线光中,以及检测由所述固定的赭曲霉毒素发出的荧光。适当的聚合物是从分别含有氨基烷基和酸性基团的单体衍生的共聚物。氨基-垸基单体可以包含初阶、次阶、三阶或四阶官能团。酸性单体可以含有羧酸官能团、膦酸或磺酸官能团。有用的聚合物包括烷基氨基-烷基(甲基)丙烯酸酯单体与不饱和酸性单体的共聚物。可用于共聚物的制备以提供聚合物中适当基团的单体包括二乙基氨乙基甲基丙烯酸酯(DEAEM)和从衣康酸、2-丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸(AMPSA)或2-(三氟甲基)丙烯酸(TFMAA)中选择的酸性单体。优选实施例是从DEAEM和衣康酸衍生的共聚物。替代地,可以使用从同时含有氨基烷基基团或氨基基团的单体衍生的聚合物,例如,含有酸性代替物的(甲基)丙烯酰胺单体,如AMPSA单体。优选地,所述聚合物或共聚物与有效的交联剂进行交联,所述交联剂不干扰与赭曲霉毒素的相互作用。合适的交联剂包括如乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)的多元醇二丙烯酸酯,如N'N'-亚甲基双丙烯的双丙烯酰胺,以及如乙烯基苯(DVB)的乙烯基化合物,及它们的类似物。有利地,所述聚合物或共聚物是多孔的,以增大可与赭曲霉毒素相互作用的表面积。附图说明图1是根据本专利技术的SPE吸附剂盒的剖视图2是图1的SPE吸附剂盒的一种变型的剖视图。具体实施例方式本专利技术的聚合物包括含有氨基-烷基基团和酸性基团的单元作为主要组成部分,它可以优选地在交联剂存在时,通过将分别含有氨基-烷基基团和酸性基团的适当单体(功能单体)共聚合而制备。聚合物最好是制成多孔的,以增加可与赭曲霉毒素相互作用的表面积。多孔聚合物可在致孔剂存在下通过聚合功能单体和交联剂而制备,致孔剂即是可分散在单体中的物质,且它在单体的反应后仍然分散在聚合物中,但可以在聚合物形成后被去除以在聚合物中形成孔。通常孔隙度的增加会导致表面积增大,这可用于使结合力达到最大。通常情况下, 一种合适的致孔剂在聚合反应过程中是惰性的。致孔剂可以是固体、液体或气体。固体或液体可以通过分解或在一个合适的溶剂中溶解而去除。通常使用液体致孔剂,它可通过搅拌而在聚合物混合物中弥散,并可通过用合适的溶剂清洗聚合物而被去除。该聚合物还可制备成凝胶,这有利于产生光学透明的物品。在优选实施例中,所述聚合物是从烷基氨基-烷基(甲基)丙烯酸酯单体(初阶、次阶、三阶或四阶)和不饱和酸单体衍生的一种共聚物,用作赭曲霉毒素的一种SPE吸附剂。所述垸基氨基-烷基(甲基)丙烯酸酯单体可以是二乙基氨乙基(甲基)丙烯酸酯单体,如二乙基氨乙基甲基丙烯酸酯(DEAEM)。所述不饱和酸单体可以具有羧酸、膦本文档来自技高网
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【技术保护点】
含有氨基或氨基-烷基基团和酸性基团的聚合物作为SPE吸附剂以固定赭曲霉毒素的用途。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:S皮莱斯基O皮莱斯卡R科克
申请(专利权)人:拓克西密特有限公司
类型:发明
国别省市:GB[英国]

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