用脐带血细胞治疗肌营养不良制造技术

本发明专利技术描述了一些通过给予脐带血细胞，例如，用Ⅳ输注，以治疗患有肌营养不良的病人的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
肌营养不良是肌肉遗传病家族的代表。某些型可侵害儿童(例如Duchenne肌营养不良)，并且在二十至三十年内就可致死。其它型则出现在成年人中，并且发展的较为缓慢。现已鉴定出若干种营养不良的基因，其中包括Duchenne肌营养不良(由肌营养不良蛋白基因中的突变所致)、青少年和成年人发病的Miyoshi肌营养不良或其变体，以及肢带营养不良2B或LGMD-2B(由dysferlin基因中的突变所致)。这些是“功能丧失”突变，它们阻碍了肌肉中相关蛋白的表达，从而导致肌肉功能障碍。现有的用于针对这些突变的小鼠模型既有自然产生的，也有通过相关基因的灭活或缺失产生的。这些模型非常适用于检验那些可能替代肌肉中的缺失蛋白并恢复正常肌肉功能的疗法。分化的肌肉是由具有惊人的再生能力的多核细胞或肌纤维组成的。之所以存在这种再生能力是因为肌肉含有原始的肌前体细胞(肌肉干细胞，某种程度更成熟的细胞被称为“卫星细胞”)。这些细胞以休眠状态存在于肌肉中，并且能被激活以产生新的单核肌细胞(成肌细胞)，这些单核肌细胞能够相互粘附并融合以产生新的多核肌管，以及更成熟的肌细胞(仍然是多核细胞)。由于肌纤维是通过单个成肌细胞融合产生的，因此，如果两个细胞融合到同一肌管中，一个肌细胞所产生的一种蛋白很容易就可以被邻近的缺乏该种蛋白的肌细胞分享。在成肌细胞融合和肌肉再生这一概念中固有的是用细胞疗法治疗肌肉疾病的可能性。能够产生肌营养不良蛋白的成肌细胞与缺乏该蛋白的肌细胞融合将会纠正所得肌管中的缺陷。也就是说，正常成肌细胞中的正常细胞核替代了营养不良肌细胞中的基因缺失，从而通过细胞疗法实现基因和蛋白的替代。Partridge及其同事在十几年前就证明了能够产生正常的肌营养不良蛋白的混合的肌前体细胞群能够融合到缺乏肌营养不良蛋白的mdx小鼠的肌肉中，从而部分的替代了该缺失蛋白(Partridge et al.，Nature 337176-179，1989)。在Partridge的胚胎实验中，不能非常明确哪些肌前体细胞群具有实现这种作用的能力。用直接肌肉注射成肌细胞的方法，至少在6位Duchenne肌营养不良和Becker肌营养不良患者身上采取了成肌细胞疗法的试验；但没有一个生效，这可以解释为，由于成肌细胞处于不充分的未分化状态，所以不能有效地用于肌细胞疗法。该发现激起了对肌肉干细胞的探索。在过去两年中，一些肌肉生物学家在分离可能的肌肉干细胞方面已经取得了鼓舞人心的初始成果。此外，这些研究不仅证明了原始肌前体细胞能融合到受损肌肉中以产生新生肌肉，还证明了这种干细胞或干细胞样细胞在血液中具有惊人的循环能力，并且反应于未鉴定的亲肌因子后离开血液进入局部肌肉损伤部位。引人注目的是，在过去三年中，已经明确了具有肌肉干细胞特征的细胞可能存在于以前被认为主要是造血组织的组织，例如骨髓中。1999年，Kunkel实验室的Gussoni及其同事报道，在骨髓或肌肉自身中，通过在一种多药物抗性转动蛋白存在条件下鉴定出的作为细胞的“侧群”(SP)组分的原始细胞群能够在尾静脉注射后被递送到营养不良的mdx肌肉中(Gussoniet al.，Nature 401390-394，1999)。相同注射能够使足够的正常肌细胞聚集到肌肉组织，从而使多达10％的肌原纤维恢复肌营养不良蛋白的表达，与此同时，还能使先前接受辐射的小鼠的骨髓重新恢复，该发现充分表明这些细胞中含有原始干细胞。随后Huard实验室(Leeet al.，J.Cell Biol.1501085-1099，2000)和Bresolin实验室(Torrente et al.，J.Cell Biol.152335-348，2001)也报道了类似的发现。此时，定义一种细胞作为肌肉干细胞的一项标准是看其分化形成成肌细胞的能力，并由此增强肌肉再生或修复等某些方面的能力。通常在输注肌肉干细胞后，一种先前缺失的蛋白(例如肌营养不良蛋白)的表达为存在肌肉干细胞提供了初步证据。至今，仍未鉴定出任何一组唯一限定肌肉干细胞的分子。但是，表面蛋白的一个进化家族被确定能够表征肌细胞系中不同的分化时期，见表1中的总结。表1在肌细胞系中的细胞上差异表达的选定的表面标记 MSC＝肌肉干细胞；SP＝侧群细胞；MPC＝肌前体细胞举例来说，一组候选干细胞可能会表达表面抗原CD34，并且可能表达其它的原始细胞表面标记，如AC133，但不会表达系标记，如c-kit或造血标记CD45。脐带血细胞(“UCB”细胞)包含具有干细胞特性的亚群。通过输注人UCB细胞可以实现骨髓细胞的替代。专利技术概述本专利技术的特征在于，通过给予人UCB细胞以治疗患有肌营养不良病人的一种方法。可以用任何适当的方式给予这种细胞，例如，通过直接注射到病人的肌肉或血流中。在全身注射后，一些UCB细胞会迁移到患者的肌肉中，并且掺入已存在的肌细胞，这些细胞将会提供缺失的蛋白，从而对该疾病起到治疗作用。在本专利技术的一项实施方案中，为了增加UCB细胞数量，并使这些细胞富含相对未分化的细胞，在给予之前对上述UCB细胞进行了处理。本专利技术的另一特征是一种用于治疗患有肌营养不良病人的细胞移植方法，该方法降低了接受治疗的患者的免疫系统对被给予的细胞的排斥反应。该方法包括提供一种脐带血细胞制剂、使用该制剂的细胞来重建患者的免疫系统，以及给予该制剂的细胞以治疗患者的肌营养不良症。在细胞移植方法的一项实施方案中，该方法还进一步包括在体外扩增上述制剂的细胞，并且将扩增的该制剂的细胞反复给予患者以治疗其肌营养不良。本专利技术提供若干优势。举例来说，本专利技术提供通过将UCB细胞给予患者以治疗诊断有或患有肌营养不良病人的方法。本专利技术依赖于使用含有多能干细胞的充足来源的脐带血，这些多能干细胞是一种生物体的两种或多种细胞类型的前体。通常使用来自供体的骨髓作为干细胞的来源来恢复患病的骨髓，但是研究人员已经证明脐带血是提供多能细胞的极好的替代来源，这些多能细胞可用于恢复多种不同组织的细胞。此外，本专利技术的另一特征是一种用于治疗诊断有或患有肌营养不良病人的方法，其中，UCB细胞被给予患者，但是，为了克制细胞的排斥反应，还需要用UCB细胞(既可以由患者提供，也可以由供体提供)重建患者的免疫系统。此外，脐带血干细胞很独特，因为发现它们在血型仅仅接近匹配的移植病例中很成功，这与骨髓中的干细胞不同，使用骨髓干细胞需要供体与受体严格匹配。此外，骨髓移植比脐带血细胞移植更常发生移植物抗宿主疾病。定义本专利技术所用的“脐带血细胞或胎盘血细胞”是指出生后保留在脐带和胎盘中的血液。与骨髓一样，发现脐带血也是干细胞的充足来源。所用的“干细胞”或“多能干细胞”可替换使用，是指一种具有能够产生一种生物体的两种或多种细胞类型的能力的细胞。专利技术详述小鼠试验人UCB细胞获得自立即从婴儿身上切割下来的新生婴儿的脐带。将细胞(每只小鼠10,000-1,000,000个细胞)悬浮于标准的药学缓冲液或无菌盐水中，并装在注射器中。最初使用的小鼠模型是一种突变小鼠(sjl小鼠)，该小鼠缺失功能性dysferlin；这些小鼠是Miyoshi肌营养不良/LGMD2B的天然模型。可以从马萨诸塞州波士顿的马萨诸塞综合医院的Robert H.Brown，Jr.实验室得到这些小鼠，有关其描本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗患有肌营养不良的病人的方法，该方法包括将脐带血（ＵＣＢ）细胞给予所述病人的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：RH布朗，SP芬克勒斯泰恩，
申请(专利权)人：维亚塞尔公司，综合医院公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]