本发明专利技术涉及乙型脑炎病毒抗体效价标准血清及其制备方法，属于生物制品标准物质领域。本发明专利技术所解决的技术问题是提供一种乙型脑炎病毒抗体效价标准血清以作为衡量乙型脑炎人免疫球蛋白效价量值的参考标准。本发明专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，其特征在于：采用乙型脑炎病毒ＩｇＧ抗体诊断试剂盒检测，其ＯＤ４５０ｎｍ值为１．０１９±０．０５１。本发明专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血清为乙型脑炎人免疫球蛋白的药学研究提供了参考，可以定量判断乙型脑炎人免疫球蛋白的预防或治疗效果，具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物制品标准物质领域。
技术介绍
流行性乙型脑炎(印idemic encephalitis B)简称乙脑，是病死率及致残率均较 高的急性虫媒传染病，随着居住环境的改善和疫苗的应用使其发病率有了大幅的下降，但 该病病的死亡率仍较高，为仅次于结核排序居第二位的乙类传染病。乙型脑炎人免疫球蛋 白(Human encephalitis B Immunoglobulin)简称HEIG，有报道称HEIG具有治疗乙型脑炎 疾病的前景，但在药学研究方面，由于没有参考或标准血清，也没有同类可比较产品，如何 研制及以国际单位标定HEIG效价是个难题。国家生物标准品系指用国际生物标准品标定的，或由我国自行研制的(尚无国际 生物参考品者)用于定量测定某一制品效价或毒素的标准物质，其生物学活性以国际单位 或单位表示。国家标准物质的制备与标定由国家药品检定机构负责。采用细胞蚀斑减少中和法测定乙型脑炎灭活疫苗效价时使用的是鼠源性参考血 清，由于异源性，采用酶联免疫试剂检测人血清乙脑病毒IgG抗体时无法使用中国生物制 品标准物质目录收载编号为250008的乙型脑炎病毒血清国家参考试剂。在新药研究中，普遍存在标准品的应用超前于国家药品检定机构制备与标定的情况，鉴于新药研究的连续性以及标准物质在新药研究中在量值溯源、产品定性、质量控制、 药理毒理以及临床研究的重要性与密切联系，研究者先期进行标准参考品的研制是必要 的。破伤风、狂犬、乙肝免疫球蛋白等产品由科技先进国家率先建立生物活性(效价) 标准物质，该标准由国际生物标准物质委员会所接受与提供该标准物质，目的是在世界范 围统一质量控制标准。乙脑属东南亚地区性虫媒病毒传染病，HEIG的效价是该产品的核心 质量标准，探索、建立符合以国际单位标定基本原理、产品研究与临床应用的效价标准是当 前本领域急需解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是提供一种乙型脑炎病毒抗体效价标准血清， 以作为衡量乙型脑炎人免疫球蛋白效价的标准。本专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，采用乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试剂盒 检测，其 OD45tlnm 值为 1.019 士 0. 051。其中，上述的乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试剂盒为北京金豪制药股份有限公司生 产，其检验原理为该试剂盒采用乙型脑炎病毒抗原包被酶联板，辣根过氧化物酶(HRP)标 记的羊抗人IgG抗体为示踪物，TMB显色系统，间接ELISA方法检测人血清或血浆中的乙型 脑炎病毒IgG抗体。进一步的，本专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，采用乙型脑炎病毒IgG抗体 诊断试剂盒检测，OD45tlnm值为1. 019时，其效价值计为10U/ml。进一步的，上述乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，酶法测定其生物活性的变异程 度< 20% ；该标准血清的乙脑病毒IgG抗体效价与乙型脑炎人免疫球蛋白的含量或浓度呈 线性相关。其中，上述乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，采用乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试 剂盒检测，其OD45tlnm值彡普通血清OD45tlnm值的4倍(一般取200份以上的普通血清，测定其 平均OD45tlnm值)。进一步的，采用乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试剂盒检测，其OD45tlnm值为普 通血清OD45tlnm值的4 10倍。本专利技术所要解决的第二个技术问题是提供一种上述乙型脑炎病毒抗体效价标准 血清的制备方法，该法发包括如下步骤采用乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试剂盒检测，以 OD450nm值>普通血清OD45tlnm值4倍的血清为合格血清，取> 100份合格血清等量混合，稀释 或浓缩调整，使血清的OD45tlnm值为1. 019士0. 051，即得。进一步的，上述的阳性血浆采用乙型脑炎病毒IgG抗体诊断试剂盒检测，其OD45tlnm 值为普通混合血浆OD45tlnm均值的4 10倍。本专利技术所要解决的第三个技术问题是提供上述乙型脑炎病毒抗体效价标准血清 在定性或 定量检测人血清或血浆中乙型脑炎病毒IgG抗体中的用途。本专利技术所要解决的第四个技术问题是提供一种乙型脑炎诊断试剂盒，该试剂盒含 有上述的乙型脑炎病毒抗体效价标准血清作为阳性对照品。本专利技术乙型脑炎IgG抗体定量诊断试剂盒可采用常规试剂盒制备方法制备而得。 如本专利技术试剂盒的主要组成成分包括检测乙脑IgG抗体酶联板、样品稀释液(常规的血清 稀释液即可)、酶结合物、乙脑IgG抗体阳性对照(即本专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血 清)、乙脑IgG抗体阴性对照、显色剂A、显色剂B (采用TMB显色系统)。本专利技术所要解决的第五个技术问题是提供一种定量检测乙型脑炎IgG抗体的方 法，该方法包括如下步骤a、样品按1 100稀释，取乙脑IgG抗体酶联反应板，在反应板上预留一个空白 孔，不加任何液体；在反应板上分别设2孔阴性对照和2孔阳性对照，阴性对照孔中直接各 加100 μ 1阴性对照液、阳性对照孔中直接各加100 μ 1乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，其 余孔加稀释好的样品100μ 1，置37°C反应30min ；b、洗涤反应板，甩弃前次反应液，反复洗涤5次，最后在吸水纸上拍干；C、每孔加入辣根氢化酶100 μ 1，置37°C反应30min ；d、按步骤b方法洗涤反应板5次；e、每孔依次加入显色剂100μ 1，37°C避光显色lOmin，每孔加入2mol/L的硫酸溶 液50 μ 1混勻终止反应；其中，所述显色剂的制备方法为先将TMBWO. lmol/L的浓度溶于 二甲亚砜，再将其以lmmol/L和H2O2以3. 0mmol/L的浓度溶于0. 2mol/L的醋酸钠/枸橼酸 缓冲液(PH值为4.0)；f、选择酶标仪波长450nm，测定各孔OD值；g、按上述方法测定乙型脑炎病毒抗体效价标准血清不同稀释度样品的OD检测 值，作标准曲线，根据待测样品的OD值，即可定量测定待测样品的效价。本专利技术的有益效果为本专利技术乙型脑炎病毒抗体效价标准血清为乙型脑炎人免疫 球蛋白的药学研究提供了参考，可以与乙脑疫苗、乙脑人免疫球蛋白相结合判断乙脑病毒 易感水平、评价乙脑疫苗免疫效果；还可以定量判断乙型脑炎人免疫球蛋白的预防或治疗 效果。本专利技术乙型脑炎诊断试剂盒可以用于定量检测人血清或血浆中乙型脑炎病毒IgG抗 体，用于乙型脑炎病毒感染的辅助诊断，具有广阔的应用前景。附图说明图1采用乙型脑炎病毒抗体效价标准血清制作效价标准曲线图。 具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术的具体实施方式做进一步的描述。建立乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，首先需要评估乙脑病毒IgG酶联免疫试剂 盒研制品定量检测受试品的特异性、准确性、精密度、线性、检测范围、重现性等参数，使该 方法的可比性与可靠性被公认；同时，借鉴与研究其它特异性免疫球蛋白产品标准物质的 特点，探讨其建立的基本原理与方法学，使研制的标准物质满足科学性与适用性的普遍要 求，最终能够被国家药品检定、国际生物标准物质机构认可并在HEIG产品质控及乙型脑炎 研究领域广泛应用。准确性或称为精密度，相对与化学药品而言，生物制品由于没有纯的标准物质， 往往难以获得确切的准确数据。生物学测定数据变异较大，生物制品质量控制分析方法与 验证技术要求酶法测定生物活性的变异程度<本文档来自技高网...
【技术保护点】
乙型脑炎病毒抗体效价标准血清，其特征在于：采用乙型脑炎病毒ＩｇＧ抗体诊断试剂盒检测，其ＯＤ↓［４５０ｎｍ］值为１．０１９±０．０５１。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：魏宪义，陈光清，高玲，
申请(专利权)人：四川远大蜀阳药业股份有限公司，魏宪义，陈光清，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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