本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的氨基酸诊断／测定试剂（盒），同时本发明专利技术还涉及测定氨基酸浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学／食品／环境检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂（盒）主要成分包括：缓冲液、辅酶、半乳糖己糖双醛糖、氨基酸氧化酶、半乳糖氧化酶、半乳糖脱氢酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外／可见光分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ处吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种氨基酸诊断/测定试剂(盒)，同时本专利技术还涉及测定氨基酸浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定
技术介绍
氨基酸含量的测定在医学/食品/工业/农业/环境中都是比较重要的测定项目。 现有的测定方法有色谱法、电化学法、仪器分析法(氨基酸分析仪)、分光光度计等方法，这 些方法或是操作方法较为繁杂、特异性差、或仪器设备成本较高等缺点。 氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价 格昂贵，不能普遍使用)，对于医学/食品/工业/农业/环境中来说，多数情况下，都是很 多种氨基酸同时存在，所以需要测定总的氨基酸含量，它们不能以氨基酸百分率来表示，只 能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。 大量食肉或饥饿时尿中氨基酸氮增加，孕妇及新生儿尿液氨基酸氮也增加。氨基 酸代谢异常，造成某些氨基酸在体内积累过多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎縮、肝功能 衰竭、Reye综合征、或某些因素造成蛋白质分解加速的疾病，遗传性疾病所导致的代谢异常 均可使尿中氨基酸氮增加。 酶法测定血、尿、体液、食品、土壤、工业产品中氨基酸氮含量具有特异性高、方法 简便、成本低的特点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶) 在340nm波长处吸光度的变化，得以测定氨基酸浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实 现该方法的氨基酸诊断/测定试剂(盒)，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或 半、全自动生化分析仪上进行氨基酸浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到 切实的推广应用。 本专利技术氨基酸浓度测定方法如下 氨基酸+水+氧氨某酸氧化酶氧代酸+氨+过氧化氢 过氧化氢+半乳糖己糖双醛糖半乳糖氧化酶半乳糖+氧 半乳糖+辅酶半乳糖脱氡酶半乳糖酸-1，4_内酯+还原型辅酶 这种方法应用氨基酸氧化酶(amino-acid oxidase ;EC 1. 4. 3. 2 ;EC 1. 4.3.3)酶(偶)联半乳糖氧化酶(galactose oxidase ;EC 1. 1. 3. 9)、半乳糖脱氢酶 (galactosel-dehydrogenase ;EC 1. 1. 1. 48 ;EC 1. 1. 1. 120)酶促反应比色终点法。氨基酸 氧化酶酶解氨基酸反应产生过氧化氢，再通过(偶)联合半乳糖氧化酶、半乳糖脱氢酶的作 用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)， 从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度，通过测量340nm处吸光度上升的 实施例一 本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为单试剂，包括三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 3,1/L 氨基酸氧化酶 10000U/L 半乳糖氧化酶 12000U/L 半乳糖脱氢酶 12000U/L 半乳糖己糖双醛糖 12mmol/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37°C ，反应时间10分钟，起始吸光度《0. 1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。 实施例二本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为双试剂，包括试剂l三(羧甲基)氨基甲烷稳定剂辅酶半乳糖己糖双醛糖试剂2三(羧甲基)氨基甲烷稳定剂盐酸缓冲液 100mmol/L50mmol/L3mmol/L12mmol/L半乳糖氧化酶半乳糖脱氢酶盐酸缓冲液 lOOmmol/L50mmol/L10000U/L12000U/L12000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。在全自动生化分析仪上设定温度37°C，反应时间10分钟，起始吸光度《0. 1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂1、试剂2的体积比例为2/20/5，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。 实施例三 本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为三试剂，包括 试剂1三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 50mmol/L5 辅酶 3,1/L 半乳糖己糖双醛糖 12mmol/L 试剂2 三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 半乳糖氧化酶 12000U/L 半乳糖脱氢酶 12000U/L 试剂3 三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 lOOmmol/L 稳定剂 500mmol/L 氨基酸氧化酶 10000U/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体三试剂，可以直接使用。 测定氨基酸浓度时，在全自动生化分析仪上设定温度37t:，反应时间IO分钟，起始吸光度《0. 1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂1、试剂2、试剂3的体积比例为4/40/5/5，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。 申请人:经过实验验证，采用以上
技术实现思路
中记载的其他测定方法均能达到本专利技术的目的，鉴于测定步骤等情况与以上实施例类同，不另一一例举。 总之，实验证明采用本专利技术的测定方法完全可以通过一般生化分析仪器得出所需的测定结果——空白试剂吸光度变化(AA/min)《0. 0009 ;吸光度时间反应曲线应呈上升曲线直至终点；试剂可测有效(R > 0. 99)线形范围可达40mmol/L ;试剂测试的不准确度，其相对偏差不超过±5% ;试剂测试的精密度(重复性)的变异系数(CV)《3% ;试剂的灵敏度可达O. 003±0. 002 AA/mmol/L ;试剂在2-8。C下保存，活性可以稳定一年；——本专利技术灵敏度高、精确度好，线形范围宽广，稳定期长，足以便于推广应用。权利要求一种酶比色法及酶联法的氨基酸的浓度测定方法，其方法如下氨基酸+水+氧 氨基酸氧化酶 氧代酸+氨+过氧化氢过氧化氢+半乳糖己糖双醛糖 半乳糖氧化酶 半乳糖+氧半乳糖+辅酶 半乳糖脱氢酶 半乳糖酸-1，4-内酯+还原型辅酶将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，测算出氨基酸的浓度大小测定结果。2. —种氨基酸诊断缓冲液稳定剂辅酶20-1— 1—J定试剂(盒)，主要成分包括 -500,1/L-4000mmol/L -6mmol/L-定只限于上述范围；在此范围内效果本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法的氨基酸的浓度测定方法，其方法如下：氨基酸＋水＋氧氨基酸氧化酶氧代酸＋氨＋过氧化氢过氧化氢＋半乳糖己糖双醛糖半乳糖氧化酶半乳糖＋氧半乳糖＋辅酶半乳糖脱氢酶半乳糖酸－１，４－内酯＋还原型辅酶将最终反应物置于紫外／可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ吸光度上升的程度，测算出氨基酸的浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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