本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的氨基酸诊断／测定试剂（盒），同时本发明专利技术还涉及测定氨基酸浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学／食品／环境检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂（盒）主要成分包括：缓冲液、辅酶、羧酸、辅酶Ａ、氨基酸氧化酶、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外／可见光分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ处吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种氨基酸诊断/测定试剂(盒)，同时本专利技术还涉及测定氨基酸浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定
技术介绍
氨基酸含量的测定在医学/食品/工业/农业/环境中都是比较重要的测定项目。 现有的测定方法有色谱法、电化学法、仪器分析法(氨基酸分析仪)、分光光度计等方法，这 些方法或是操作方法较为繁杂、特异性差、或仪器设备成本较高等缺点。 氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价 格昂贵，不能普遍使用)，对于医学/食品/工业/农业/环境中来说，多数情况下，都是很 多种氨基酸同时存在，所以需要测定总的氨基酸含量，它们不能以氨基酸百分率来表示，只 能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。 大量食肉或饥饿时尿中氨基酸氮增加，孕妇及新生儿尿液氨基酸氮也增加。氨基 酸代谢异常，造成某些氨基酸在体内积累过多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎縮、肝功能 衰竭、Reye综合征、或某些因素造成蛋白质分解加速的疾病，遗传性疾病所导致的代谢异常 均可使尿中氨基酸氮增加。 酶法测定血、尿、体液、食品、土壤、工业产品中氨基酸氮含量具有特异性高、方法 简便、成本低的特点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶) 在340nm波长处吸光度的变化，得以测定氨基酸浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实 现该方法的氨基酸诊断/测定试剂(盒)，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或 半、全自动生化分析仪上进行氨基酸浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到 切实的推广应用。 本专利技术氨基酸浓度测定方法如下 氨基酸+水+氧氨某酸氧化酶氧代酸+氨+过氧化氢 过氧化氢+羧酸+水乙醛氧化酶乙醛+水+氧 乙醛+辅酶A+辅酶乙醛脱氡酶(乙酰化)乙酰_辅酶A+还原型辅酶 这种方法应用氨基酸氧化酶(amino-acid oxidase ;EC 1. 4. 3. 2 ;EC 1. 4. 3. 3)酶(偶)联乙醛氧化酶(aldehyde oxidase ;EC 1. 2. 3. 1)、乙醛脱氢酶 (acetaldehydedehydrogenase ;EC 1. 2. 1. 10)酶促反应比色终点法。氨基酸氧化酶酶解 氨基酸反应产生过氧化氢，再通过(偶)联合乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶的作用，最终将辅酶 (在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还 原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度，通过测量340nm处吸光度上升的程度，可以测算氨，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本专利技术氨基酸诊断/测定试剂(盒)较为理想 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 3mmol/L 氨基酸氧化酶 10000U/L 乙醛氧化酶 12000U/L 乙醛脱氢酶 12000U/L 羧酸 12mmol/L 辅酶A 7,1/L 本专利技术的氨基酸诊断/测定试剂(盒)可以是单剂，包括 缓冲液、稳定剂、辅酶、氨基酸氧化酶、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶、羧酸、辅酶A。 试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、辅酶、羧酸、辅酶A。 试剂2 缓冲液、稳定剂、氨基酸氧化酶、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶。 辅酶、氨基酸氧化酶、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶、羧酸、辅酶A在试剂1或试剂2中 的位置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液 体试剂，直接使用。 还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂l 缓冲液、稳定剂、辅酶、羧酸、辅酶A。 试剂2 缓冲液、稳定剂、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶。 试剂3 缓冲液、稳定剂、氨基酸氧化酶。 辅酶、氨基酸氧化酶、乙醛氧化酶、乙醛脱氢酶、羧酸、辅酶A在试剂1、试剂2或试 剂3中的位置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配 制成液体试剂，直接使用。 无论是单剂、双剂还是三剂，本专利技术测定氨基酸浓度的方法，其辅酶可以是NADP+、 NAD+或thio-NAD+中的一种。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进一步的说明。 实施例一4 本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为单试剂，包括 三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 3mmol/L 氨基酸氧化酶 10000U/L 乙醛氧化酶 12000U/L 乙醛脱氢酶 12000U/L 羧酸 12,1/L 辅酶A 7,1/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净 水，复溶后使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37。C，反应时间10分钟，起始吸光度《0. l，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。 实施例二本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为双试剂，包括 试剂l三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 稳定剂 辅酶 辅酶A 试剂2三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 稳定剂100,1/L 50mmol/L 3mmol/L 12mmol/L 7mmol/L乙醛氧化酶 乙醛脱氢酶100,1/L 50mmol/L 10000U/L 12000U/L 12000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37°C，反应时间10分钟，起始吸光度《0. 1， 测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂1、试剂2的体积比例为 2/20/5，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约0分钟左右，检测时间5分钟左右。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测 主波长340nm吸光度上升的程度，从而测算出氨基酸的浓度大小。 实施例三 本实施例的氨基酸诊断/测定试剂为三试剂，包括 试剂1 三(羧甲基)氨基甲烷稳定剂辅酶盐酸缓冲液辅酶A 试剂2三(羧甲基)氨基甲烷稳定剂乙醛氧化酶乙醛脱氢酶试剂3三(羧甲基)氨基甲烷 稳定剂盐酸缓冲液100,1/ 50mmol/L 3mmol/L 12mmol/L 7mmol/L100,1/ 500,1/L 12000U/L 12000U/L盐酸缓冲液100,1/L 500,1/L 10000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体三试剂，可以直接使用。测定氨基酸浓度时，在全自动生化分析仪上设定温度37t:，反应时间IO分钟，起始吸光度《0. 1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测氨基酸样品与试剂1、试剂2、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法的氨基酸的浓度测定方法，其方法如下：氨基酸＋水＋氧氨基酸氧化酶氧代酸＋氨＋过氧化氢过氧化氢＋羧酸＋水乙醛氧化酶乙醛＋水＋氧乙醛＋辅酶Ａ＋辅酶乙醛脱氢酶（乙酰化）乙酰－辅酶Ａ＋还原型辅酶将最终反应物置于紫外／可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ吸光度上升的程度，测算出氨基酸的浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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