本发明专利技术公开了一种用于自身免疫性肝炎检测的蛋白芯片及其试剂盒，可以同时检测ＡＮＡ（ｄｓＤＮＡ、ＲＮＰ、Ｓｍ、ＳＳ－Ａ／Ｒｏ、ＳＳ－Ｂ／Ｌａ、Ｓｃｌ－７０、Ｊｏ－１）、ＳＭＡ、ＬＫＭ－１、ＳＬＡ／ＬＰ、Ｆ－ａｃｔｉｎ和ＡＭＡ共１２个免疫蛋白标志物。克服了现有产品检测指标单一，检测指标不全面的缺陷，提供一种检测结果更全面、过程更简洁的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白芯片疾病检测产品，具体地说，涉及一种自身免疫性肝炎检测蛋白芯片及其试剂盒。
技术介绍
自身免疫性肝脏疾病主要包括原发性胆汁性肝硬化(primary bi 1 iary cirrhosis, PBC)、自身免疫性肝炎(autoimmune h印atitis， AIH)、原发性硬化性胆管炎 (primary scleroticcholangitis， PSC)，以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。 虽然它们均属自身免疫性肝病，但病因、临床表现、及治疗各不相同，而早期诊断和早期治 疗又是控制疾病进展的关键，故及时诊断及鉴别诊断成为临床治疗的首要措施。实验室检 测特别是免疫指标的测定在临床诊断及鉴别诊断中有着重要的作用。 目前医院中对AIH的诊断方式普遍采用国际自身免疫性肝炎小组(IAIHG)制定的 AIH记分系统。表l中为1999年修订版的AIH记分表，与1993年制定的评分系统相比新修 订后的AIH评分系统更为科学。确诊或疑诊AIH的敏感性达89. 8% 。但也存在不足，尤其 是其特异性较低，故有学者建议对那些评分已达AIH确诊或疑诊标准，但常规激素治疗无 效者，需行胆管造影术以排除原发性胆管疾病。另外也有文献报道使用修订后的AIH评分 系统难以诊断急性发作的AIH。 AIH的评分系统仍需进一步完善。 表l自身免疫性肝炎国际评分系统(1999 IAIHG) <table>table see original document page 3</column></row><table> 确诊总积分治疗前> 15及治疗后> 17 ;疑诊治疗前10-15及治疗后12-17分. AIH是一种原因不明的慢性进展性肝炎，发生于儿童和各年龄段的成年人，女性多见。目前普遍将AIH分为三种类型，I型主要以ANA(抗核抗体)，SMA(平滑肌抗体)、 ANCA(抗嗜中性粒细胞胞浆抗体)、ASGP-R(抗去唾液酸糖蛋白受体)抗体阳性为特征11 型主要以LKM-1 (肝肾微粒体1抗原)、LC-1 (肝细胞溶质蛋白1)抗体为特征。AIH患者往 往发病年龄小，治疗效果差。经过免疫抑制治疗，大多数I型AIH患者血清ANA和抗SMA可 转阴，但抗体水平不能预示疾病的预后。这表明ANA和SMA均不参与AIH的发病机制，它们 的诊断价值大于其预后价值。抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶，是构成AIH患者 识别线性抗原的决定簇，因与HCV病毒基因序列有部分同源性，所以约在7%慢性丙型肝炎 患者血清中出现。III型为近年的发现，主要以anti-SLA(anti soluble liver antigen, 抗可溶性肝抗原)为标志物。除此以外，还有抗可溶性肝、胰抗原(anti-LP)等蛋白也作为 一些AIH特异性标志物被逐渐应用到诊断中。 随着对SMA研究的深入，人们发现作为SMA复合物组成部分的F-actin (纤维状肌 动蛋白)在AIH病人中表现出很高的特异性。根据2006年的最新研究成果表明，F-actin阳 性在AIH患者中的敏感度能够达到74X，而传统认为具有很高特异性的SMA在同样的患者 群中只有34%的敏感度，同样F-actin与SMA的特异度则分别为98%和99% (Evaluation of F—actin ELISAfor the diagnosis of autoimmune hepatitis. Frenzel C， Herkel J， Liith S， etc. Am JGastroenterol. 2006 Dec ;101 (12) :2731-6)。 除F-actin外，SLA (可溶性肝抗原)也是目前人们发现的最新的AIH血清学标志 之一。SLA抗体的阳性率虽然不高，但它对AIH特异性较高，可出现在LKM-1阴性的AIH患 者血清中，而且在病毒性肝炎患者血清中呈阴性反应，不易造成误诊。 间接免疫荧光法(IIF)、酶免疫条带技术和Western Blot是当前进行AIH免疫学 诊断的主要方法。这三种方法虽然技术上相对比较成熟，检测结果准确。但这些方法不是 只能进行单指标检测，就是检测步骤繁琐，操作复杂而且耗费时间。并且这些方法目前用于 产业化检测的领域仍然限于传统AIH免疫项目检测上，无法检测特异度和灵敏度更好的免 疫指标(如SLA、 F-actin)。 因此市场上迫切需要一种既能够快速而准确地提供免疫学检测结果，又能够将更 新、更好的指标应用于产业化的检测产品。
技术实现思路
本专利技术要提供一种专门用于自身免疫性肝炎检测的多指标蛋白芯片及其试剂盒。 解决目前市场上自身免疫学检测产品检测功能单一、检测指标滞后，并且没有集成化的缺点。 本专利技术的技术方案如下提供一种自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，由基片和阵列 式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成，所述的蛋白检测指标包括 dsDNA (双链DNA) 、RNP (核糖核蛋白)、Sm Ag (Sm抗原)、SS-A/Ro (干燥综合症A抗原)、SS-B/ La(干燥综合症B抗原)、Scl-70(拓扑异构酶I) 、Jo_l (组氨酰tRNA合成酶)、SMAg(平滑 肌抗原)、LKM-1 (肝肾微粒体1抗原)、SLA/LP (可溶性肝抗原)、F-actin (纤维状肌动蛋 白)和AMAg(抗线粒体抗原)共12个标志物，以共价键盘或非共价键固定在基片上面。 所述的基片可以是玻璃片基，硝酸纤维素膜或尼龙膜。 上述基片的一个优选例是醛基化玻片。 上述的对照检测指标涂层包括阳性对照和阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗体点样所用的稀释液。 上述涂层上的每个阵列中蛋白检测指标每个有2-10个重复，对照指标有l-5个重 复。阵列的多少和大小与待检样品的数目，基片大小，以及点样直径有关。 上述蛋白检测指标与检测阵列的优选例是当蛋白检测指标点样直径为0. 1mm 时，点间距0. 6mm，阵列大小为6mmX5mm，可在硝酸纤维素膜蛋白芯片上设置24个阵列。 本专利技术还提供了包含上述自身免疫性肝炎检测蛋白芯片的试剂盒，还包括标准品 和质控品；标准品与质控品为瓶装，用纸质模板固定于包装盒内。 上述的试剂盒，还包括样本稀释液，酶标工作液，浓縮洗涤液，检测液；各液体为瓶 装，与标准品和质控品一起用纸质模板固定于包装盒内。各部分由纸质模具固定于一包装 盒内，不限放置方式，检测时配套使用。 上述的标准品由5-10个不同浓度梯度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入 一个容器，蛋白混合液由7个多AIH标志物蛋白检测指标按不同浓度混合而成。标准品用 于在每次标本检测结束后做标准曲线，可以定量测定样品中的检测指标的蛋白浓度。 上述的质控品由3-6个不同浓度的蛋白混合液组成，每个蛋白混合液装入一个容 器，蛋白混合液由7个多AIH标志物蛋白检测指标按不同浓度混合而成。质控品可以监测 整个检测系统的CV值，保证每次检测结果的有效性。 上述的样本稀释液是一种蛋白稳定剂；可以是由3% BSA和0.05X防腐剂 (PrOClinTM300)的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)配制而成; 上述的酶标工作液本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成；所述的蛋白检测指标包括ｄｓＤＮＡ（双链ＤＮＡ）、ＲＮＰ（核糖核蛋白）、ＳｍＡｇ（Ｓｍ抗原）、ＳＳ－Ａ／Ｒｏ（干燥综合症Ａ抗原）、ＳＳ－Ｂ／Ｌａ（干燥综合症Ｂ抗原）、Ｓｃｌ－７０（拓扑异构酶Ｉ）、Ｊｏ－１（组氨酰ｔＲＮＡ合成酶）、ＳＭＡｇ（平滑肌抗原）、ＬＫＭ－１（肝肾微粒体１抗原）、ＳＬＡ／ＬＰ（可溶性肝抗原）、Ｆ－ａｃｔｉｎ（纤维状肌动蛋白）和ＡＭＡｇ（抗线粒体抗原）共１２个标志物，以共价键盘或非共价键固定在基片上面。
【技术特征摘要】
一种自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，由基片和阵列式分布于基片上的蛋白检测指标以及对照检测指标涂层组成；所述的蛋白检测指标包括dsDNA(双链DNA)、RNP(核糖核蛋白)、Sm Ag(Sm抗原)、SS-A/Ro(干燥综合症A抗原)、SS-B/La(干燥综合症B抗原)、Scl-70(拓扑异构酶I)、Jo-1(组氨酰tRNA合成酶)、SMAg(平滑肌抗原)、LKM-1(肝肾微粒体1抗原)、SLA/LP(可溶性肝抗原)、F-actin(纤维状肌动蛋白)和AMAg(抗线粒体抗原)共12个标志物，以共价键盘或非共价键固定在基片上面。2. 如权利要求l所述的自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，所述的基片可以是玻璃片基，硝酸纤维素膜或尼龙膜。3. 如权利要求2所述的自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，所述的玻璃片基是带有醛基修饰的载玻片。4. 如权利要求1或2或3所述的自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，所述的对照指标包括1个阳性对照和1个阴性对照；阳性对照为兔IgG抗体，阴性对照为抗体点样所用的稀释液。5. 如权利要求4所述的自身免疫性肝炎检测蛋白芯片，其特征在于，所述的涂层上每个检测指标有2-10个重复，对照指标有1-5个重复。6. —种自身免疫性肝炎检测蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，穆宇豪，刘纲，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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