【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析，具体涉及一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法。
技术介绍
1、非奈利酮(finerenone，bay94-8862)是一种非甾体选择性盐皮质激素受体拮抗剂，在临床前研究中显示可阻断盐皮质激素受体过度激活导致的有害影响。在糖尿病患者中，盐皮质激素受体过度激活被认为会导致慢性肾病进展和心血管受损，这可能由代谢、血流动力学或炎症和纤维化等因素驱动。
2、4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶是合成非奈利酮的关键中间体，在药学研究阶段，对4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质进行研究已经成为制备非奈利酮的质量研究及控制的重要步骤，其化学结构式如下：
3、
4、4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶具有羟基吡啶结构，会产生酮式烯醇式互变现象，在进行液相方法检测时，主成分会裂成两个响应接近的峰，或者是一个主峰伴随一个较大的未知峰。如果将酮式烯醇式互变产生的未知峰当成杂质峰，会造成错误的判断，从而对其分析方法有要求。到目前为止，还没有公开的方法报道可有效对本品及其有关物质进行分离和定量测定。因此，开发一种同时分离测定4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶及其有关物质的方法，对4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶及其质量控制具有极其重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，解决了由羟基吡啶结构引起的酮式烯醇式互变导致的裂峰问题，检测出的杂质种类多、
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱，流动相a为乙酸铵水溶液，以乙酸调ph值至5.8-6.2；流动相b为甲醇；具体梯度洗脱过程如下：(1)在0-8分钟，流动相a与流动相b的体积比保持95:5不变；(2)在8-30分钟内，流动相a与流动相b的体积比由95:5匀速渐变至25:75；(3)在30-31分钟内，动相a与流动相b的体积比由25:75匀速渐变至95:25；(4)在31-42分钟内，流动相a与流动相b的体积比保持95:5不变；其中，溶解样品的溶剂为70％～90％甲醇水溶液。具体的洗脱梯度如下表1所示：
4、表1梯度洗脱过程
5、
6、本专利技术提供的检测方法，以流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱。在色谱分析时，选择色谱柱和流动相后，需要确定洗脱过程是等度洗脱或是梯度洗脱，并在洗脱过程中，流动相a和流动相b的比例，都会影响分析物在色谱柱上的响应及分离，以及溶剂和杂质峰会不会干扰主峰的分析。
7、对于本专利技术而言，4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶具有在分析过程中发生酮式烯醇式互变的可能，影响主成分测定。特别地，由于4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶及其有关物质之间化学结构相近，导致流动相的选择、洗脱梯度和溶剂并不是可以随机选择的，是需要进行大量的实验和分析确定的，否则，主峰会发生裂峰，溶剂会出现干扰，各成分之间的分离会不符合要求，从而产生误判4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶的质量的严重后果。
8、本专利技术采用的流动相a为乙酸铵水溶液，在一种优选方案中，流动相a为0.1％～0.5％乙酸铵水溶液，为了获得更好的效果，流动相a为0.2％～0.4％乙酸铵水溶液；更优选地，流动相a为0.3％乙酸铵水溶液。
9、本专利技术采用的流动相a的制备包括以下步骤：首先配制浓度为0.1％～0.5％乙酸铵水溶液，再用乙酸调ph值至5.8-6.2，即得；优选地，用乙酸调ph值至6.0。
10、在一种优选方案中，本专利技术采用的流动相a的制备包括以下步骤：首先配制浓度为0.3％乙酸铵水溶液，再用乙酸调ph值至5.8-6.2，即得；更优选地，用乙酸调ph值至6.0。
11、本专利技术提供的检测方法，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶，例如，watersatlantis t3、inertsil ods-3c18或waters xbridge c18，其中，waters atlantis t3的效果更佳。在一种优选方案中，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
12、进一步的，检测器的检测波长为240～244nm；优选为242nm。
13、进一步的，柱温为25～35℃；优选为30℃。
14、进一步的，流速为0.5～1.5ml/min，优选为1.0ml/min。
15、进一步的，进样量为3～10μl；优选为5μl。
16、进一步的，溶解样品的溶剂为70％～90％甲醇水溶液；优选为80％甲醇水溶液。
17、更进一步的，供试品溶液中本品(4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶的)的浓度为0.3～1.0mg/ml；优选为0.5mg/ml。
18、本专利技术提供的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶(简称smc)中有关物质的检测方法，其中有关物质包括以下物质，具体如表2所示。
19、表2有关物质信息
20、
21、
22、本专利技术提供的检测方法，可以配制如下溶液，在配制如下溶液时，所选择的溶剂为：80％甲醇水溶液。
23、供试品溶液：取本品(4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶的)适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液。
24、对照溶液：精密量取供试品溶液适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含2.5μg的溶液，即为0.5％供试品溶液。
25、各杂质贮备液：分别取各杂质对照品适量，精密称定，至不同量瓶中，用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml含0.5mg的各杂质贮备液。
26、杂质混合溶液：精密量取各杂质贮备液适量，分别置同一量瓶中，用溶剂定量稀释制成每1ml含0.05mg的各杂质贮备液。
27、专属性溶液：取本品(4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶的)、杂质混合溶液各适量，用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶含0.5mg、各杂质含2.5μg的混合溶液。
28、采用本专利技术的技术方案，优势如下:
29、本专利技术提供一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，解决了由羟基吡啶结构引起的酮式烯醇式互变导致的裂峰问题，检测出的杂质种类多、灵敏度高、专属性好，各杂质峰之间、4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶及其相邻杂质峰之间的分离度好，检测过程中溶剂峰也不干扰测定，准确度高，对4-氨基-5-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱对4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙酸铵水溶液，以乙酸调pH值至5.8-6.2；所述流动相B为甲醇；具体梯度洗脱过程如下：(1)在0-8分钟，流动相A与流动相B的体积比保持95:5不变；(2)在8-30分钟内，流动相A与流动相B的体积比由95:5匀速渐变至25:75；(3)在30-31分钟内，动相A与流动相B的体积比由25:75匀速渐变至95:25；(4)在31-42分钟内，流动相A与流动相B的体积比保持95:5不变；其中，溶解样品的溶剂为70％～90％甲醇水溶液。
2.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质如下：
3.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，溶解样品的溶剂为80％甲醇水溶液。
4.根据权
5.根据权利要求4所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A的制备包括以下步骤：首先配制浓度为0.3％乙酸铵溶液，再用乙酸调pH值至5.8-6.2，即得；更优选地，用乙酸调pH值至6.0。
6.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的型号为Waters Atlantis T3、Inertsil ODS-3C18或Waters XBridgeC18，优选地，所述色谱柱的型号为Waters Atlantis T3；更优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
7.根据权利要求6所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，检测波长为240～244nm，优选为242nm。
8.根据权利要求6所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，柱温为25～35℃；优选为30℃。
9.根据权利要求6所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，流速为0.5～1.5mL/min；优选为1.0mL/min。
10.根据权利要求6所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，进样量为3～10μl，优选为5μl。
...【技术特征摘要】
1.一种4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱对4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相a为乙酸铵水溶液，以乙酸调ph值至5.8-6.2；所述流动相b为甲醇；具体梯度洗脱过程如下：(1)在0-8分钟，流动相a与流动相b的体积比保持95:5不变；(2)在8-30分钟内，流动相a与流动相b的体积比由95:5匀速渐变至25:75；(3)在30-31分钟内，动相a与流动相b的体积比由25:75匀速渐变至95:25；(4)在31-42分钟内，流动相a与流动相b的体积比保持95:5不变；其中，溶解样品的溶剂为70％～90％甲醇水溶液。
2.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质如下：
3.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，溶解样品的溶剂为80％甲醇水溶液。
4.根据权利要求1所述的4-氨基-5-甲基-2-羟基吡啶中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a为0.1％～0.5％乙酸铵水溶液；优选为0.2％-0.4％乙酸铵水溶液，更优选为0.3％乙酸铵水溶液。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：顾笑，刘玉莹，于金龙，辛妮，
申请(专利权)人：南京海纳制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。