新型Cas9蛋白CasC、其突变体及应用制造技术

本发明专利技术公开了新型Cas9蛋白CasC、其突变体及应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供的Cas蛋白，可用于CRISPR‑CAS系统，实现对基因的编辑，其是以C为核心PAM序列的Cas蛋白(CasC)，可以拓展Cas蛋白的可编辑序列范围。通过对筛选到的Cas蛋白进行改造，提升了编辑效率；同时对sgRNA和gRNA的长度进行改造，也可提升Cas蛋白的编辑效率。本发明专利技术提供的新型Cas蛋白在基因疗法等方面具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新型cas9蛋白casc、其突变体及应用，属于生物。

技术介绍

1、crispr/cas9系统是目前科研及临床研究方面应用最广泛的基因编辑工具，具有高效、特异及设计简便等优势。已有多种cas9蛋白被发现，其中研究最多应用最广泛的为streptococcus pyogenes(spcas9)和staphylococcus aureus(sacas9)。然而几乎所有cas9的pam序列只包含a或者g，极大地限制cas9在利用中序列的选择范围。因此，鉴定活性、pam序列等性质不同的新型cas蛋白一直是科研及临床应用的热点问题。

技术实现思路

1、专利技术要解决的问题

2、本专利技术从未被报道过的昆虫肠道微生物基因组中鉴定新型cas9蛋白，得到识别全新pam序列的cas蛋白casc，其识别的pam序列主要取决于spacer下游第5号位的c。casc具有较高的编辑活性。为提高对低活性位点的编辑效率，本专利技术对casc蛋白进行了活性优化，得到编辑活性显著增强的casce1，casce2和cas本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cas9蛋白，其中，所述Cas9蛋白选自如下(i)～(iv)组成的组中的任一项：

2.根据权利要求1所述的Cas9蛋白，其中，所述取代为在如SEQ ID NO:2所示的多肽的第14位和/或第908位。

3.根据权利要求2所述的Cas9蛋白，其中，所述取代为在SEQ ID NO:2所示的多肽在I14V和S908T中的至少一个位置处发生取代。

4.根据权利要求1～3任一项所述的Cas9蛋白，其中，所述Cas9蛋白识别的PAM序列为5’-NVRNC-3’，其中，V为A、G或C，R为A或G，N为A、G、C或T。

5.一种融合蛋白，其中，所述...

【技术特征摘要】

1.一种cas9蛋白，其中，所述cas9蛋白选自如下(i)～(iv)组成的组中的任一项：

2.根据权利要求1所述的cas9蛋白，其中，所述取代为在如seq id no:2所示的多肽的第14位和/或第908位。

3.根据权利要求2所述的cas9蛋白，其中，所述取代为在seq id no:2所示的多肽在i14v和s908t中的至少一个位置处发生取代。

4.根据权利要求1～3任一项所述的cas9蛋白，其中，所述cas9蛋白识别的pam序列为5’-nvrnc-3’，其中，v为a、g或c，r为a或g，n为a、g、c或t。

5.一种融合蛋白，其中，所述融合蛋白包含：权利要求1～4任一项所述的cas9蛋白，以及与之融合的异源功能结构域。

6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中，所述异源功能结构域在所述cas9蛋白的n端或c端进行融合。

7.根据权利要求5或6所述的融合蛋白，其中，所述异源功能结构域选自：报告蛋白或检测标记、定位信号、脱氨酶、dna结合域、表位标签、转录激活域、转录抑制域、核酸酶、甲基化酶、脱甲基酶、组蛋白去乙酰化酶、dna或rna连接酶，或以上任意的组合；

8.一种向导rna，其引导如权利要求1～4任一项所述的cas9蛋白结合至靶序列，所述向导rna包含指导序列、同向重复序和tracrrna序列，所述指导序列与靶序列互补，所述tracrrna可与所述cas9蛋白和同向重复序列相互作用；所述向导rna的骨架序列如seq idno:5所示或为其截短体；

9.一种crispr-cas系统，其包括：

10.根据权利要求9所述的crispr-cas系统，其中，所述向导rna包含指导序列、同向重复序列和tracrrna序列，所述指导序列与靶序列互补，所述tracrrna可与cas9蛋白和同向重复序列相互作用；

11.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成，
申请(专利权)人：北京因诺惟康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：