一种三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd的制备方法技术

本发明专利技术提供一种能够适应工业化生产要求，环保、简便、快速制备三七皂苷Ｒ１、人参皂苷Ｒｇ１、Ｒｅ、Ｒｂ１和／或Ｒｄ的方法。该方法以三七提取物、三七总皂苷或三七皂苷中间体为起始原料，采用制备型反相高效液相色谱法以乙醇－水系统为流动相进行等度或梯度洗脱，所述乙醇－水系统为３０％－８０％（ｖ／ｖ）的乙醇－水溶液。该方法具有工艺简单、无污染、成本低和纯度高，其产品纯度均在９７％以上的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药有效成分的制备方法，具体涉及三七中皂苦类成分的 制备方法。
技术介绍
三七为五力口-牛才直物三七[尸fl(3x otog/ weg (Burk.) R H. Chen]的干 燥根，为我国名贵中药，其主要有效成分为皂苷类化合物。据统计，迄今 已从三七中分离得到50余种达玛烷型的三萜皂苷，其中以三七皂苷R1、 人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd为主要成分。三七总皂苷对血液系统、神 经系统、心血管系统、免疫系统和代谢方面等均具有广泛的药理活性[参 见，中药药理与应用(第二版)，王浴生、邓文龙、薛春生主编，第598-606 页，人民卫生出版社，北京，1998年]。但是，不同皂苷的药理作用各有 差异，有的甚至截然相反，例如人参皂苷Rgl能促选血管新生，而人参皂 苷Rbl则发挥其抑制作用[参见，Sengupta S， Toh SA, Sellers LA等, Circulation, 2004,110, 1219-1225]。因此，皂香单体的开发及其应用潜力巨 大。三七、人参CP gz'sewg)和西洋参CP —《w咖/z',)同为人参属植物， 化学成分上具有相似性，均含有人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd，而三七皂 苦R1为三七中特有的成分。其中除人参皂苷Re外，其余四种皂苷以三七 中含量最高(见表1 )[参见，Wan JB, Li SP， Chen JM等，J. Sep. Sci. 2007, 30, 825-832]。因此，选择三七作为原料进行上述皂苷分离制备是合理的、可 行的。表l:三七皂苷R1、人参急香Rgl、 Re、 Rbl和Rd 在三七、人参和西洋参中的含量(mg/g)<table>table see original document page 5</column></row><table>三七皂苷R1、人参急苦Rbl、 Rgl和Re现已广泛应用于三七、人参、 西洋参及其相关制品的质量控制中。中国药典规定三七、三七片的含量测定指标为三七皂苷R1、人参皂苷RM和Rgl [参见，中华人民共和国药 典2005版，国家药典委员会，PlO-ll， P323，化学工业出版社，北京， 2005年];人参、红参、西洋参的质量控制指标为人参皂苷Rgl、 Rbl和 Re[参见，中华人民共和国药典2005版，国家药典委员会，P7-8, P105， P87，化学工业出版社，北京，2005年];人参叶为人参皂苷Rgl和Re [参 见，中华人民共和国药典2005版，国家药典委员会，P8，化学工业出 版社，北京，2005年]。因此，在检验和分析上述中药质量时，需要大量 的化学标准品。除此之外，人参属其它植物均有较为类似的化学成分，这 些植物包括越南人参(户v/e加a膨^ )、竹节参/op ow/cws )、姜状'三七 (尸.z/wg7'6ere^ )和屏边三七(尸./eawa/ws )等[参见,Zhu S, Zou K, Fushimi H等，Planta Med. 2004, 70, 666-667]。上述中药的质量控制和药理 研究大多集中在皂苷类成分，因此市场上对于三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd有着巨大的需求量。由于分离工艺的制约，传统工艺利用反复柱色谱进行三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd的分离制备，需要大量使用曱醇、氯仿和 乙酸乙酯等有机溶剂，不仅费时、费力、效率低下、操作困难、生产成本 过高，而且易造成环境污染，使用的溶剂不便于回收利用。近年来，有人 将高速逆流色谱技术应用于三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd 的分离制备[参见，CaoXL，TianY, Zhang TY等，J. Liq. Chromatogr. Rel.Technol. 2003, 26, 1579-1591; Du Q, Jerz G, Waibel R等，J Chromatogr A. 2003， 1008, 173-80],但利用反相色谱法同时分离制备上述皂苷尚未见报 道。虽然在人参皂苷的分析上， 一般亦釆用反相高效液相色镨法，然而为 了分开人参皂苷Rgl和Re，需要使用低比例的乙腈，使整个分析时间大 大的延长，不利于皂苷的分离制备[参见，Wan JB， Lai CM, Li SP等，J. Pharm Biomed Anal. 2006, 41， 274-279]。
技术实现思路
因此，本专利技术目的在于提供一种能够适应工业化生产要求，环保、简便、 快速制备三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和/或Rd的方法。 本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的一种釆用反相高效液相色语制备三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl 和/或Rd的方法，该方法包括采用乙醇-水系统为流动相进行洗脱，所述乙 醇-水系统为30%-80% (v/v)的乙醇-水溶液，所述洗脱为等度或梯度洗脱。上述反相高效液相色i普分离的样品为三七提取物、三七总皂苷或三七 皂苷中间体，其中所述三七提取物为三七药材经40。/。-95。/。(v/v)乙醇渗漉 提取、热回流提取、超声提,取或加压溶剂提取而得的提取物。所述三々急 苷中间体为原人参三醇型皂香或原人参二醇型皂苦，原人参三醇型皂苦主 要包含三七皂苷R1、人参皂苷Rgl和Re,原人参二醇型皂苷主要包含人 参皂香Rbl和Rd。当所述分离的样品为三七提取物或三七总皂苷时，洗脱步骤为以 30%~60%(v/v)乙醇-水系统洗脱至三七皂苷R1、人参皂苷Rgl和Re的洗 脱峰出现，再将流动相切换为50%~80% (v/v)乙醇-水系统。当所述分离 样品为原人参三醇皂苷时，所述洗脱步骤为以30%~60%(v/v)乙醇-水系 统进行等度或梯度洗脱。当所述分离样品为原人参二醇皂苷时，所述洗脱步 骤为以50%~80%(v/v)乙醇-水系统进行等度或梯度洗脱。上述反相高效 液相色i普的流速优选为6.0ml/min;以C18反相键合硅胶为固定相。上述方法还包括在203nm下进行检测并分别收集三七皂苷Rl、人参皂 苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd的洗脱峰，以及将收集的溶液减压挥去溶剂后，真 空冷冻干燥制得冻干并分。采用反相高效液相色镨制备三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和/ 或Rd的方法包括以下具体步骤直接将三七提取物、三七总皂苷或三七皂苷中间体(原人参三醇皂苷或原人参二醇急芬)应用于制备型反相高效液相色语，以C18反相键合硅胶为 固定相，乙醇-水系统为流动相进行洗脱，203nm下检测，流速6.0ml/min, 分别收集三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、 Re、 Rbl和Rd的洗脱峰，以上所述 乙醇-水系统流动相具体参数为① 中间体原人参三醇皂苷等度或梯度洗脱，30%~60%乙醇-水系统 (v/v )。② 中间体原人参二醇皂苷等度或梯度洗脱，50%~80%乙醇-水系统 (v/v)。③ 三七才是取物或三七总皂苷A相30%~60%乙醇-水系统(v/v); B 相50%~80%乙醇-水系统(v/v),按梯度进行系统洗脱。首先是100Q/oA相， 待三七急苷Rl、人参急苷Rgl和Re的洗脱峰出来之后，流动相切换为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用反相高效液相色谱制备三七皂苷Ｒ１、人参皂苷Ｒｇ１、Ｒｅ、Ｒｂ１和／或Ｒｄ的方法，其特征在于，所述方法包括采用乙醇－水系统为流动相进行洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种采用反相高效液相色谱制备三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1和/或Rd的方法，其特征在于，所述方法包括采用乙醇-水系统为流动相进行洗脱。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙醇-水系统为 300/。-80% (v/v)的乙醇-水溶液。3. 根据权利要求l或2所述的方法，其特征在于，所述洗脱为等度或 梯度洗脱。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述反相 高效液相色镨分离的样品为三七提取物、三七总皂苷或三七皂苷中间体。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述三七提取物为三七 药材经40°/。 95°/。 (v/v)乙醇渗漉提取、热回流提取、超声提取或加压溶 剂提取而得的提取物。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述三七皂苷中间体为 原人参三醇型皂香或原人参二醇型皂苷。7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述原人参三醇型皂苷 主要包含三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl和Re;所述原人参二醇型皂苷主要 包含人参急苷Rbl和Rd。8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分离的样品为三七 提取物或三七总急苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：王一涛，万建波，张庆文，
申请(专利权)人：澳门大学，
类型：发明
国别省市：MO[中国|澳门]