本发明专利技术公开了蛇毒细胞毒素－ＣＴＸ１在制备具有镇痛作用药中的应用，尤其是蛇毒细胞毒素－ＣＴＸ１在制备对伤害性刺激导致的躯体痛、内脏痛以及对吗啡成瘾后疼痛具有镇痛作用的药中的应用，该细胞毒素－ＣＴＸ１对伤害性刺激导致的躯体痛、内脏痛及吗啡成瘾后疼痛均有较好的镇痛作用，且连续用药１２天未见成瘾、耐受现象，将其开发为新的镇痛药具有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛇毒细胞毒素-CTX1在制备具有镇痛作用药中的应用，具体涉及蛇毒细胞毒素-CTX1在制备对伤害性刺激导致的躯体痛、内脏痛以及对吗啡成瘾后疼痛具有镇痛作用的药中的应用。
技术介绍
蛇毒是一个巨大的生物资源宝库。自1968年英国科学家首先研制成功了治疗血管闭塞性疾病的蛇毒制剂-ARIN，投放市场后不久即获得了巨大的经济回报。近十年来，随着多达数十种蛇毒药品的面世，并且取得了不俗的临床疗效和销售业绩，从蛇毒中开发出价廉、物美的特效药正在成为各国生物学家、药学家及制药企业争相追逐的新热点。 舟山眼镜蛇(Naja atra Cantor)，以颈部背面有白色眼镜架状斑纹为其最明显的特征，体长可达2米，主要分布于我国长江以南诸省及台湾等地。舟山眼镜蛇所分泌的蛇毒液中含有多种神经毒素(neurotoxin，NT)及细胞毒素(Cytotoxin，CTX)，由于CTX对多种组织细胞膜均有较强的破坏共性，尤其对心肌细胞更为显著，故又称为膜毒素(Membrane toxin)或心脏毒素(cardiotoxin)。从我国大陆及台湾产舟山眼镜蛇毒中至少已分离出了5～7种不同的CTX，均由60～63个氨基酸残基组成，相对分子质量为6000～7000kDa。 二十世纪70年代以来，蛇毒中有效单体-NT在镇痛的基础研究方面已有较多报道，其镇痛机制可能与胆碱能、内源性阿片肽等多种系统有关。与传统镇痛药物吗啡相比，NT的镇痛具有用量少、止痛时间长、无成瘾性等特点，对顽固性疼痛、神经性疼痛和恶性肿瘤痛均有效。但鉴于NT的神经毒性较大，致死活性较强，其的安全性一直有较大争议。 1975年，Hayashi首次报道了从台湾眼镜蛇毒Naja naja atra中纯化出一种CTX，是一种强碱性多肽毒素pI 9.0，相对分子质量为6693kDa，有60个氨基酸残基LKCNKLIPIA SKTCPAGKNL CYKMFMMSDL TIPVKRGCIDVCPKNSLLVK YVCCNTDRCN，并命名为CTX1；进一步研究发现泰国眼镜蛇(Naja naja siamensis)毒中亦含此毒素。目前CTX1是否有镇痛的功能，至今未见相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供蛇毒细胞毒素-CTX1在制备具有镇痛作用药中的应用，该细胞毒素-CTX1对伤害性刺激导致的躯体痛、内脏痛及吗啡成瘾后疼痛均有较好的镇痛作用，将其开发为新的镇痛药具有较好的应用前景。 实际上，本专利技术蛇毒细胞毒素-CTX1在制备具有镇痛作用药中的应用。 优选的，本专利技术所述的应用是指在制备对伤害性刺激导致的躯体痛具有镇痛作用药的应用。 优选的，本专利技术所述的应用是指在制备对伤害性刺激导致的内脏痛具有镇痛作用药的应用。 优选的，本专利技术所述的应用是指在制备对吗啡成瘾后疼痛具有镇痛作用药的应用。 本专利技术所述的蛇毒细胞毒素-CTX1通过中国大陆舟山眼镜蛇蛇毒的分离和纯化获得，其具体过程为 (1)凝胶过滤采用Sephacryl S-100HR填料，将舟山眼镜蛇毒样本通过AKTA explorer 100快速纯化工艺开拓系统进行分子筛过滤，获得I、II、III三个毒性组分，分别用G-50预装柱HiPrep 26/10Desaltin脱盐，冻干，备用； (2)离子交换将步骤(1)所得三个毒性组分根据毒性强弱初筛，选取毒性最强的组分III，采用CM Sepharose FF填料，通过AKTA explorer 100快速纯化工艺开拓系统进行离子交换，获得单一毒性的多肽CTX1，并用G-50预装柱HiPrep 26/10Desaltin脱盐，冻干即可。 本专利技术的有益效果是 (1)该蛇毒细胞毒素CTX1对各种急、慢性疼痛的具有良好的镇痛作用，尤其是CTX1对伤害性刺激导致的躯体痛(somatalgia)、内脏痛(visceral pain)及吗啡成瘾后疼痛(疼痛症状群)均有较强镇痛作用。 (2)由于CTX1分子中并不存在类似于内源性阿片肽的氨基酸序列(TGGP)片断，对吗啡成瘾的动物不但能发挥较强的镇痛效应，并且连续用药12天亦未见成瘾、耐受现象，故将其开发为新的镇痛药有较好的应用前景。 附图说明 图1是CTX1在CM Sepharose FF离子交换色谱图； 图2是质谱分析法(MALDI-TOF)测定CTX1的质谱图。 具体实施例方式 以下实施例仅用于阐述本专利技术，而本专利技术的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述
的普通技术人员依据以上本专利技术公开的内容均可实现本专利技术的目的。 第一部分蛇毒细胞毒素-CTX1的制备及其分子量和氨基酸序列的测定 1.1蛇毒细胞毒素-CTX1的制备 从大陆舟山眼镜蛇自然野生分布优势区域之一的湛江地区野外采集舟山眼镜蛇毒样本，进行以下分离和纯化得到CTX1 (1)凝胶过滤采用Sephacryl S-100HR填料，将舟山眼镜蛇毒样本通过AKTA explorer 100快速纯化工艺开拓系统(制备型高效液相色谱仪)进行分子筛过滤，获得I、II、III三个毒性组分，分别用G-50预装柱HiPrep 26/10 Desaltin脱盐，冻干，备用； 其中柱规格为26×100mm，先用0.05M pH6.4磷酸缓冲液两个柱体积平衡凝胶柱，蛇毒样品溶液通过AKTA explorer-100色谱仪的上样泵上样，泵速为0.6ml/min，洗脱泵速0.6ml/min，紫外检测波长280nm，每管收集量6ml/min。 (2)离子交换将步骤(1)所得三个毒性组分通过初筛，选取毒性最强的组分III，采用CM Sepharose FF填料，通过AKTA explorer 100快速纯化工艺开拓系统进行离子交换，获得单一毒性的多肽CTX1，并用G-50预装柱HiPrep 26/10Desaltin脱盐，冻干即可。 其中，柱规格26×100mm，先用0.05M pH6.4磷酸缓冲液两个柱体积平衡凝胶柱，组分III100mg样品溶液通过AKTA explorer-100色谱仪的上样泵上样，泵速为0.8ml/min，用1000mL含0.5mol/L NaCl的0.02mol/L pH为8.0的PBS和1000mL0.02mol/L pH为8.0的PBS进行梯度洗脱，洗脱泵速0.8ml/min，紫外检测波长280nm，每管收集量8ml/min，获得CTX1的色谱图如附图1所示。 1.2蛇毒细胞毒素-CTX1的分子量及氨基酸序列的测定 用质谱分析法(MALDI-TOF)测定CTX1的分子量为6697.915kDa，其质谱图如附图2所示； 用埃德曼降解法(Edman degradation)测定CTX1的氨基酸序列为LKCNKLIPIA SKTCPAGKNL CYKMFMMSDL TIPVKRGCID VCPKNSLLVKYVCCNTDRCN。 与从台湾舟山眼镜蛇毒中纯化出的CTX1相比，来源于大陆湛江地区舟山眼镜蛇毒CTX1的分子质量有约3kDa的差异，二者的氨基酸序列一致。 第二部分蛇毒细胞毒素-CTX1的镇痛作用 实施例1 本实施例通过醋酸扭体法测试CTX1对小鼠的因伤害性刺激导致的内脏痛的镇痛作用。 动物经腹腔注射醋酸溶液本文档来自技高网...
【技术保护点】
蛇毒细胞毒素－ＣＴＸ１在制备具有镇痛作用药中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘先国，孔天翰，信文君，仲维高，崔跃，董伟华，黄绍，崔超伟，唐娅，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。