蛇毒止痛剂制造技术

公开了从蛇毒中分离的基本上无毒的级分，该级分具有止痛效果。该级分具有在Ｍｏｎｏ Ｑ离子交换柱上从蛇毒中精制的级分特征。还描述了包含该无毒级分的作为止痛剂使用的药物组合物和用于缓解疼痛的方法，包括将该无毒级分给药。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛇毒作为止痛剂的用途。
技术介绍
尽管疼痛是至关重要的生理反应，不过它也会导致不必要的难受和痛苦。疼痛的控制和缓解是医学的一个重要分支。疼痛既可以作为疾病的结果而发生，也可以作为医疗的结果而发生，例如化疗。无论怎样，尽可能多地减轻疼痛都是重要的，以便患者能够正常活动。与疼痛有关的两种神经途径在体内同时发挥作用(1)感觉途径，它感觉组织损害，随后产生疼痛的感觉；(2)止痛途径，它减少疼痛的感觉，防止关于疼痛的信息流向中枢神经系统(CNS)，因而允许生物体维持其正常活动，不受损伤影响。使用抑制充当疼痛感受器的外周神经的药物或者增强天然止痛系统都可以实现麻醉。由于这些是不同的途径，因此它们受不同物质的影响。例如，阿斯匹林和利多卡因对外周感觉途径有活性，而吗啡和相关物质对止痛系统有活性。目前使用的最有效的止痛剂是阿片来源的吗啡类物质。众所周知，大脑产生各种内源性阿片制剂，这一点解释了这些物质的强大效果。它们对神经元的作用受特异性受体的介导。受这些受体调节的信号防止信息从外周疼痛神经元流向CNS。这些CNS神经元对其他各种化学物质也是敏感的，包括儿茶酚胺类(血清素、去甲肾上腺素等)、神经活性肽类(神经降压素)和抑制性氨基酸类(甘氨酸和GABA)。现存4000余种蛇中，已知大约有400种是有毒的。有毒的物种分为五个科，它们是蝰蛇科、眼镜蛇科、Crotolidae、海蛇科和穴蝰科(Atractaspidae)。蝰蛇科蛇分布在欧洲、亚洲和非洲，包含8个属，其中之一是蝰属。Crotolidae科包括响尾蛇属。眼镜蛇科包括眼镜蛇属。蛇毒包含多种不同的物质。据估计有数百种化合物，其中据信仅有4-8种参与蛇毒的毒性作用。尽管在功能上有相似性，不过蛇毒在它们的化学组成上还是有显著区别的。每种都具有其特有的蛇毒组成。迄今，在这400余种有毒的蛇中仅鉴别出几百种化合物。它们包括酶、毒素、生长因子等。大多数所分离的蛇毒化合物都是功能未知的。蛇毒在传统上被视为毒性物质的来源。不过，它也是止痛剂的来源。治疗被一种南美蛇(彩响尾蛇(Crotalus durissus terrificus))咬伤的患者的医生报道说尽管这些患者处于生命垂危状态，不过他们没有感觉到疼痛。有一种从蛇毒中分离的神经毒素产物在南斯拉夫第一届神经毒理学大会(1977)上被认为是新型的止痛剂。这些和其他观察结果引导人们尝试从蛇毒中分离止痛化合物。Bevan，P.和Hiestand，P.(1983)《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)2585319-5326描述了通过阳离子交换色谱法从Viperarusselli russelli毒中分离的单链多肽。该多肽与单胺和阿片配体竞争结合它们各自的受体，大鼠脑室内注射该多肽导致显著的镇静效果。作者认为，该多肽是一种强烈带电的大分子，不太可能通过血-脑屏障。还发现该多肽是一种毒性大小适度的毒素，类似于粗毒。Dutta，A.S.和Chaudhuri，A.K.N.(1991)《印度实验生物学杂志》(Indian J.Exp.Biol.)29937-942描述了用Viperarusselli粗毒对小鼠和大鼠所进行的实验。将蛇毒通过腹膜内和静脉内方式注射，发现在与CNS有联系的一般行为模式上产生变化。蛇毒在一项测定中显示显著的止痛活性，但是在其他两项测定中没有活性。1991年2月21日公布的WO91/01740公开了冻干大响尾蛇(Crotalus atrox)全毒在外用药物组合物中的用途。该组合物具有止痛、致充血和解痉活性。Giorgi，R.，Bernardi，M.M.和Cury，Y.(1993)《Toxicon》311257-1265描述了由通过超滤法从彩响尾蛇(Crotalus durissusterrificus)毒提取的小分子量物质所激发的止痛效果。将提取物通过皮下、腹膜内和口服方式对小鼠给药。1993年5月26日公布的CN1,072,344公开了含有蛇毒素酶商品(未给出来源)、白细胞肽因子和冰片的蛇毒素软膏，冰片是一种已知的止痛中药。该软膏起到抗生素的作用，没有毒副作用。Pu，X.C.，Wong，P.T.H.和Gopalakrishnakone，P.(1995)《Toxicon》331425-1431描述了通过凝胶过滤和HPLC法从扁颈眼镜蛇毒中精制的神经毒素。将该毒素通过腹膜内、口服或i.c.v.方式对小鼠给药，发现具有有力的止痛效果。U.S.S.R.专利No.435,824描述了从Nayaksin干燥眼镜蛇毒中制备的止痛组合物。这种蛇来自眼镜蛇科的眼镜蛇属。过去20年间，一种名为Viprosalum或Viprosal的软膏在前苏联和东欧用于缓解疼痛。这种软膏是蝰蛇毒(欧洲种)的凡士林溶液以及羊毛脂、樟脑和solicilate的混合物。专利技术概述本专利技术的目的是提供从蛇毒中分离的止痛物质，它基本上是无毒的。按照本专利技术的一个方面，提供了基本上无毒的、从蛇毒中分离的级分，具有通过Mono Q离子交换色谱法从蛇毒中精制的级分特征，其中该级分具有止痛效果。在本专利技术这方面的优选实施方式中，在Mono Q柱上、在20mMTris-HCl缓冲液pH7.0中进行色谱法，该级分在12-28分钟时洗脱。应当强调的是，上述条件打算限定本专利技术的级分，并不限制可以制备该级分的方式。换句话说，本专利技术的级分可以通过各种精制方法而从蛇毒制备。不过，它被限定为具有如上所限定的精制级分的特征。进而按照本专利技术的这个方面，提供了作为止痛剂使用的药物组合物，包含基本上无毒的、从蛇毒中分离的级分，具有通过Mono Q离子交换色谱法从蛇毒中精制的级分特征，其中该级分具有止痛效果。在本专利技术的优选实施方式中，该药物组合物用于局部使用。本专利技术在进一步方面提供了用于从蛇毒中分离基本上无毒的级分的方法，该级分具有止痛效果，是用一种水性缓冲液通过离子交换色谱法从蛇毒中精制的。在本专利技术这方面的优选实施方式中，该离子交换色谱法是用MonoQ FPLC柱进行的。在进一步优选的实施方式中，该水性缓冲液是Tris-HCl缓冲液或乙酸铵缓冲液。在特别优选的实施方式中，缓冲液的浓度是20mM，pH在6.8-7.5范围内。由本专利技术所提供的级分结合了大量以前未曾报道共同出现在相同材料中的性质。这些性质包括(1)具有止痛活性；(2)基本上没有毒性；和(3)基本上是精制的。本说明书中，术语无毒被定义为不发生作为使用具有止痛效果的药理水平的本专利技术级分的结果的病理现象。术语基本上无毒被定义为包括低至可接受程度的毒性以及没有毒性。本专利技术的级分可以从蝰蛇科(Viperidae)、眼镜蛇科(Elapidae)、响尾蛇科(Crotolidae)、海蛇科(Hydrophidae)和穴蝰科(Atractaspidae)各种毒蛇中分离。尽管下述用于阐述本专利技术的实验涉及山蝰(Vipera xanthina)、蝰蛇(Vipera russelli)、菱斑响尾蛇(Crotalus adamanteus)和黑唇眼镜蛇(Naja melanoleuca)，不过不言而喻的是这些物种仅仅充当上述五科毒蛇的实例。尽管本专利技术的级分是粗毒的精制级分，不过它显然包含不止一种物质。本专利技术不仅包括本专利技术的级分，而且包本文档来自技高网...

【技术保护点】
基本上无毒的、从蛇毒中分离的级分，具有通过Ｍｏｎｏ Ｑ离子交换色谱法从蛇毒中精制的级分特征，其中所述级分具有止痛效果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：A舒洛弗，N普利莫尔，
申请(专利权)人：SIS舒洛弗科学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]